Острый демиелинизирующий эпизод (ОДЭ) — это первое клиническое проявление демиелинизирующего заболевания [1]. К ОДЭ относят различные неврологические патологии, такие как острый поперечный миелит (ОПМ), оптический неврит (ОН), острый рассеянный энцефаломиелит (ОРЭМ), которые клинически подозрительны на рассеянный склероз (РС).

ОРЭМ — это заболевание, характеризующееся иммуноопосредованным воспалением ЦНС, приводящим к распространенной демиелинизации главным образом белого вещества головного и спинного мозга [2]. Воспаление, манифестирующее в изолированном участке ЦНС (поперечный миелит, неврит зрительного нерва), протекает монофазно или сопровождается возникновением последующего клинического эпизода с поражением другого отдела ЦНС, что может привести к развитию РС [3]. Наиболее важным патофизиологическим механизмом развития РС являются выработка провоспалительных цитокинов и активация клеток врожденного и адаптивного иммунитета, что приводит к воспалительной реакции в ЦНС [4].

Цитокины — значимые молекулы иммунного ответа. У пациентов с энцефалитом, включая ОРЭМ, отмечается повышение концентрации цитокинов в крови, что обусловливает роль воспалительных и аутоиммунных процессов в патогенезе этих заболеваний. Воспалительные белки, потенциально связанные с ОРЭМ, включают фактор роста нервов β (Beta-NGF), цистатин D, интерлейкин (ИЛ)-7, латентный трансформирующий ростовой фактор-β1 (TGF-β1) и нейротрофин-3 (NT-3) [2]. У пациентов с РС в активной фазе заболевания наблюдается повышенный уровень ИЛ-2, -4, -6, -13, -17, -21, -22 и -33 в сыворотке крови по сравнению со здоровыми контрольными группами и пациентами в стадии ремиссии, в то время как ИЛ-10 оказывает протективное влияние на прогрессирование заболевания [5]. По данным F. Ashtari и соавт. [6], у пациентов с заболеванием спектра оптиконейромиелита (ЗСОНМ) уровень ИЛ-6 выше в сыворотке крови и цереброспинальной жидкости по сравнению с пациентами с РС. ИЛ-6 является стимулирующим фактором, способствующим дифференцировке B-клеток в плазматические клетки и продукции иммуноглобулинов.

По данным нескольких исследований, IL-1β секретируется в ответ на аутоиммунные заболевания, такие как РС, способствуя миграции активных лейкоцитов в ЦНС. IL-6 также в основном вырабатывается в период обострений РС B- и T-клетками [7].

Клиническое значение цитокинов остается не до конца понятным из-за недостаточного количества экспериментальных и клинических исследований. Исследование потенциальной причинно-следственной связи между циркулирующими воспалительными белками и патогенезом энцефалитов, в том числе ОРЭМ, могло бы прояснить биологические механизмы, лежащие в основе патогенеза этих заболеваний, и предложить новые диагностические и терапевтические возможности [2].

Отдельное внимание уделяется взаимосвязи между уровнем C-реактивного белка (СРБ) в плазме крови пациентов и активностью демиелинизирующего процесса. Ранее обсуждалась способность СРБ подавлять дифференцировку Th1-клеток и облегчать течение экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита. Уровень СРБ у пациентов с РС несколько повышен, однако это повышение незначительно по сравнению с контрольной группой, за исключением стадии обострения. Другие данные литературы не рассматривают СРБ в качестве диагностического или прогностического биомаркера при РС и ЗСОНМ [8].

Таким образом, представляется актуальным изучение уровня провоспалительных цитокинов и СРБ как показателей воспалительной реакции и маркеров персистирующей иммунной активации у пациентов с ОДЭ.

Цель исследования — оценка уровня провоспалительных цитокинов (ИЛ-1β, ИЛ-6) и СРБ в сыворотке крови пациентов с ОДЭ.

Материал и методы

В исследование были включены 15 пациентов (8 женщин, 7 мужчин) в возрасте от 29 до 58 лет (средний — 39,2±2,31) с установленными диагнозами ОРЭМ (n=8), левамизол-ассоциированный ОРЭМ (n=3) и ОПМ (n=4) (см. таблицу). Контрольную группу (n=15) составили практически здоровые лица, которые были сопоставимы по возрасту (средний — 39,3±3,37 года), полу (8 женщин, 7 мужчин) с основной группой.

Уровень ИЛ-1β, ИЛ-6 и СРБ в плазме крови пациентов с ОДЭ и контрольной группы, Me [Q₁;Q₃], n

Среди представленной выборки с ОДЭ 5 пациентов были включены в острый период заболевания (3 — с ОРЭМ, 1 — с левамизол-индуцированным ОРЭМ и 1 — с ОПМ), до начала проведения пульс-терапии глюкокортикостероидами. Остальные 10 пациентов были включены в исследование в период ремиссии (5 — с ОРЭМ, 2 — с левамизол-индуцированным ОРЭМ и 3 — с ОПМ в анамнезе). Длительность ремиссии составляла от 3 до 34 мес, в среднем — 14,1±3,21 мес.

Критерии включения: подтвержденные в соответствии с клиническими рекомендациями диагнозы ОРЭМ (постинфекционный, поствакцинальный, в том числе левамизол-ассоциированный) и ОПМ в остром периоде и в периоде ремиссии (перенесенный ОДЭ в период с 2021 по 2024 г.). Диагноз ОРЭМ был выставлен в соответствии с критериями IPMSSG, адаптированными к различным популяциям, ОПМ — согласно критериям Международной группы по изучению поперечного миелита (Transverse Myelitis Consortium Working Group) [9].

Критерии исключения: энцефалит другой установленной этиологии (анти-NMDA рецепторный энцефалит, инфекционной этиологии), злоупотребление алкоголем и другими психоактивными веществами, тяжелые соматические и психические заболевания (в том числе выраженное интеллектуально-мнестическое снижение), способные повлиять на результаты обследования.

У пациентов контрольной группы исключалось наличие хронических заболеваний, которые могли бы повлиять на уровень провоспалительных цитокинов и СРБ в плазме крови.

У всех пациентов производился забор венозной крови с последующим выделением плазмы. Образцы полученной плазмы крови замораживались при температуре –80 °C до выполнения анализов.

Лабораторная диагностика включала определение концентрации ИЛ-1β, ИЛ-6 в плазме крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием наборов Invitrogen (ИЛ-1β, 88-7261-88), (ИЛ-6, 88-7066-88) и определение концентрации СРБ высокочувствительным иммуноферментным методом с реактивами Вектор-Бест (СРБ-ИФА-БЕСТ, А-9002) согласно инструкции производителя.

Статистический анализ результатов проводился с помощью программного обеспечения Jamovi версии 2.3.28. Анализ соответствия исследуемых выборок нормальному закону распределения проводился с помощью теста Шапиро—Уилка. Для анализа статистической значимости различий между количественными показателями для несвязанных выборок (между опытной и контрольной группами) применялся U-критерий Манна—Уитни. Значения p<0,05 считали статистически значимыми.

Протокол исследования был одобрен локальным Этическим комитетом ФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России. У всех пациентов было получено письменное информированное согласие на участие в исследовании.

Результаты

Были проанализированы полученные результаты уровней ИЛ-1β, ИЛ-6 и СРБ в плазме крови пациентов с ОДЭ и контрольной группы (см. таблицу).

Уровень ИЛ-1β составил 0,947±0,198 и 0,907±1,251 пг/мл в группе пациентов с ОДЭ и контрольной группе соответственно, уровень ИЛ-6 — 2,11±0,073 и 1,98±0,043 пг/мл, уровень СРБ — 99,4±34,4 и 123±40,7 МЕ/мл.

Кроме того, произведен сравнительный анализ провоспалительных цитокинов и СРБ внутри группы пациентов с ОДЭ: в остром периоде и периоде ремиссии. Среднее значение ИЛ-1β в группе пациентов с ОДЭ в остром периоде составило 1,71±0,36 пг/мл, а в группе пациентов в периоде ремиссии — 0,566±0,121 пг/мл, эти отличия оказались статистически значимыми (p=0,003). Стоит отметить, что наибольший уровень ИЛ-1β выявлен в плазме крови пациента с ОПМ, у которого впоследствии верифицирован серопозитивный вариант ЗСОНМ.

Среднее значение ИЛ-6 в группе пациентов с ОДЭ в остром периоде было 2,04±0,063 пг/мл, а в группе пациентов в период ремиссии — 2,14±0,106 пг/мл. Наибольший уровень ИЛ-6 определен в плазме крови пациента с перенесенным ОРЭМ в стадии ремиссии, что, вероятно, указывает на компенсацию процесса.

Среднее значение СРБ в группе пациентов с ОДЭ в остром периоде составило 66,7±12,9 МЕ/мл, а в группе пациентов в период ремиссии — 115±51,4 МЕ/мл (p=0,513).

Обсуждение

В данной работе нами оценивались уровни ИЛ-1β, ИЛ-6 и СРБ в плазме крови пациентов с ОДЭ (ОРЭМ, ОПМ) и пациентов контрольной группы. Значимой разницы между исследованными группами выявлено не было, что, по-видимому, может быть обусловлено недостаточным числом включенных в исследование пациентов.

Однако при сравнительном анализе уровней ИЛ-1β плазмы крови пациентов с ОДЭ было обнаружено повышение уровня данного цитокина в остром периоде по сравнению с периодом ремиссии, что обусловлено выраженностью демиелинизирующего процесса.

Согласно данным предыдущих исследований, повышение уровня провоспалительных цитокинов в крови и цереброспинальной жидкости ускоряет демиелинизацию и повреждение аксонов в ЦНС. Сообщается, что среди основных провоспалительных цитокинов, включая ИЛ-1β, ИЛ-6 и фактор некроза опухолей альфа, роль ИЛ-1β ограничена по сравнению с двумя другими [10]. Таким образом, предполагается, что данные лабораторные показатели имеют прямую корреляцию с активностью демиелинизирующего процесса.

Ограничения исследования. В настоящее время в проводимое клиническое исследование включены 15 пациентов, что, возможно, является недостаточным для полноценной оценки полученных лабораторных результатов для выявления взаимосвязи между активностью демиелинизирующего процесса и уровнем провоспалительных цитокинов и СРБ, белка острой фазы воспаления. Для дальнейшего исследования планируются продолжение набора пациентов в клиническое исследование и проведение сравнительного анализа динамики полученных лабораторных данных у пациентов с ОДЭ через 6 мес.

Заключение

Полученные предварительные результаты не позволяют сделать однозначные выводы о взаимосвязи между уровнем провоспалительных цитокинов (ИЛ-1β и ИЛ-6) и СРБ и активностью демиелинизирующего процесса на данном этапе исследования. Однако представляется перспективным дальнейшее исследование пациентов с ОДЭ в остром периоде и периоде ремиссии в сравнении с контрольной группой с увеличением исследуемой выборки для обнаружения возможных статистически значимых различий между группами.

Данная статья выполнена при финансовой поддержке РНФ, грант №22-15-00284.

This article was funded by the Russian Science Foundation, grant No. 22-15-00284.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.