Изучение взаимодействия флуоресцентных анти-CD133 ДНК-аптамеров с клетками перевиваемых культур глиобластомы методом проточной цитофлуориметрии

Глиобластома (ГБ) — глиома IV степени — характеризуется крайне неблагоприятным прогнозом. Устойчивость к радио- и химиотерапии, а также рецидивы связывают с наличием опухолевых стволовых клеток. Потенциальным маркером опухолевых стволовых клеток считается трансмембранный белок CD133. Чтобы преодолеть недостатки при детекции клеточного CD133 антителами изучаются возможности аптамеров — молекулярных узнающих элементов на основе нуклеиновых кислот. Для получения воспроизводимых результатов необходимо изучать взаимодействие флуоресцентных аптамеров к CD133 со стандартными клеточными линиями и с клеточными культурами, полученными из опухолей пациентов, различными методами.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Определение маркера CD133 для клеток перевиваемых культур ГБ пациентов с помощью флуоресцентных ДНК-аптамеров методом проточной цитофлуориметрии.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Для детекции маркера CD133 использовали меченые флуоресцеином (FAM) ДНК-аптамеры серии Cs и Ap. С помощью проточной цитофлуориметрии тестировали три перевиваемые клеточные культуры из Биобанка НМИЦ им. акад. Н.Н. Бурденко: BU881 (107), G01 и Sus, — полученные из постоперационных тканей ГБ пациентов.

РЕЗУЛЬТАТЫ

ДНК-аптамеры к CD133 в концентрации 1 мкМ дают положительные сигналы для клеток культур ГБ пациентов, величина которых коррелирует с уровнем транскрипции гена CD133. Сдвиг сигнала флуоресценции (∆MFI) для FAM-ДНК-аптамеров серии Cs и Ap для клеток культуры BU881 больше (1942 и 5449 у.е. соответственно), чем для клеток G01 (1469 и 1817 у.е. соответственно), что согласуется с уровнем транскрипции гена CD133. Для клеток культуры Sus с минимальной транскрипцией гена CD133 сдвиг сигнала флуоресценции отсутствует.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Меченые флуоресцеином ДНК-аптамеры серии Cs и Ap в концентрации 1 мкМ позволяют определять маркер CD133 для клеток перевиваемых культур ГБ пациентов методом проточной цитофлуориметрии.