Введение
Диуретики в зависимости от механизма действия разделяют на петлевые (фуросемид), тиазидные (гипотиазид), калийсберегающие (триамтерен), ингибиторы карбоангидразы (ацетазоламид) и применяют для регулирования объема или состава жидкостей организма [1].
Тиазидные и тиазидоподобные диуретики действуют в корковой части петли Генле. Они блокируют белок-транспортер, переносящий ионы Na+ и Cl– в эпителий канальцев, увеличивая их выведение с мочой, при этом снижая выведение ионов Ca2+. Этот процесс сопровождается диуретическим эффектом. Максимальные терапевтические дозы этих препаратов вызывают примерно одинаковый диуретический эффект. Диурез и натрийурез регистрируются уже через 1—2 ч, а максимальный эффект проявляется через 4 ч [2].
Околоплодные воды играют важную роль в развитии и обеспечении жизнедеятельности плода [3]. Объем околоплодных вод может меняться при различных патологических состояниях плода и маточно-плацентарного комплекса [4]. Амниотическая жидкость (АЖ) — продукт обмена между организмом беременной, плодом и плацентой, ее количество в норме находится в относительно узком диапазоне, что обеспечивает нормальное функционирование систем плода и плаценты. Нарушение любого звена регуляции объема околоплодных вод может приводить как к маловодию, так и к многоводию, к развитию ряда тяжелых осложнений беременности, вплоть до гибели плода [5]. Существует прямая корреляция между объемом околоплодных вод и скоростью циркуляции мочи плода, составляющей 3/4 объема всей амниотической жидкости,по ионному и органическому составу которой можно судить о состоянии плода в период его внутриутробного развития [6].
Изучение регуляции объема АЖ показывает, что ее уровень определяется внутримембранным всасыванием жидкости через амниотический пузырь в кровь плода [7]. Регуляция жизнедеятельности плода обеспечивается нормальным уровнем АЖ. Как показывают исследования, нарушения объема происходят у 5—10% новорожденных каждый год [6]. Эти нарушения могут приводить как к хроническим, таким как бронхиальная астма [8] и ожирение [9], так и к острым (гипоксическим) поражениям плода [10], а также к синдрому задержки развития плода [11]. В настоящее время показано, что негативный исход беременности зависит от аномального объема АЖ. В связи с изложенным представляется актуальным понимание механизмов регуляции объема АЖ для разработки методов лечения, направленных на смягчение отрицательного воздействия на плод маловодия (олигогидрамниона) и многоводия (полигидрамниона) [12].
В настоящее время механизмы образования АЖ находятся на стадии изучения [13]. Например, пути транспорта жидкости в амниотическую полость и в обратном направлении уже исследованы в экспериментах на животных, но основные клеточные события и медиаторы, регулирующие движения АЖ, остаются малоизученными [14]. До сих пор основным способом мониторинга состояния АЖ является ультразвуковой метод, который не отражает ее состав [15].
Известно, что объем АЖ зависит от степени гидратации плода [16]. Главным фактором, определяющим объем АЖ, является плацентарный ток воды, поступающий от матери к плоду. Основным путем образования АЖ является моча плода, поэтому интерес представляет изучение восприимчивости почек плода к диуретикам, в частности к гипотиазиду [17, 18], что и явилось целью нашей работы. Полученные результаты настоящего исследования позволяют выявить степень и характер изменения объема и состава амниотической жидкости на модели [19, 20], прогнозировать использование диуретиков у беременных для регуляции объема и состава амниотической жидкости, чтобы предотвратить патологические изменения [21].
Цель исследования — изучить влияние гипотиазида на объем и состав амниотической жидкости крольчих в поздние сроки беременности.
Материал и методы
Исследование проведено на беременных крольчихах: включено 13 крольчих (первобеременных) и их 39 плодов. Крольчих оплодотворяли случайно выбранными кроликами-самцами, после этого они находились в одиночных клетках. Все испытуемые разделены на две группы: опытную и контрольную. В опытную группу попало 4 крольчихи и 14 их плодов, в контрольную группу — 9 крольчих и 25 их плодов. Крольчихи опытной группы получали мочегонный препарат гипотиазид в дозе 5 мг на 1 кг массы тела. Таблетку измельчали до порошкообразного состояния, разводили в 5 мл кипяченой воды. Полученный раствор забирали шприцем и вливали в ротовую полость крольчихи. Для этого рот животного нужно приоткрыть, надавив на беззубое пространство за резцами. Конец шприца клали на корень языка, немного наклоняли голову крольчихи, чтобы лекарство не вытекало, и выпаивали препарат медленно, небольшими порциями, чтобы животное не захлебнулось. Контрольной группе крольчих диуретик не вводили.
Критериями включения испытуемых животных являлись: масса крольчих 3—4 кг, для каждой из них - первая беременность, срок — 27—28 сут. (нормальная беременность крольчих протекает 31 сут.). Критерий исключения плодов из исследования: масса плода менее 20 г.
В ходе эксперимента определены: масса плода, плаценты и объем околоплодных вод (ОАЖ). В АЖ определяли содержание и концентрацию органических (креатинин, мочевина, лактат) и неорганических (ионы Na+, Cl–, K+, Ca²+) метаболитов.
Через 2 ч после введения диуретика проводилось умерщвление животного путем цервикальной дислокации. После этого проводилось срединное рассечение брюшной полости с последующей экстирпацией матки. Из полости извлеченной матки выделяли и изолировали амниотические мешки с плодами и околоплодными водами. Далее разделяли материнскую часть плаценты и детское место, не повреждая покровы амниотического мешка. Амниотическую жидкость из мешка добывали одноразовым шприцем. Полученные образцы амниотической жидкости подвергали центрифугированию в течение 15 мин на скорости 1000 об/мин. После центрифугирования образцы помещали в микропробирки емкостью 200 мкл, которые хранили в морозильной камере при температуре –20°C до последующего проведения биохимического исследования.
Для проведения биохимического исследования использовался биохимический автоматический анализатор Dimension Xpand (Siemens, Германия). Концентрацию ионов Na+ определяли с помощью набора реагентов для определения содержания натрия ферментативным методом в сыворотке и плазме крови «Натрий ферментативный ДДС» («АО «Диакон-ДС», Россия); концентрацию ионов K+ — с помощью набора реагентов для определения содержания калия ферментативным методом в сыворотке и плазме крови «Калий ферментативный ДДС» («АО «Диакон-ДС», Россия); концентрацию ионов Cl– — с помощью набора реагентов для определения содержания хлоридов «Хлориды ДиаС D 10 120 021» («АО «Диакон-ДС», Россия); общую концентрацию Ca2+ — с помощью набора реагентов для количественного определения кальция методом с арсеназо III «Кальций АС ДиаС D 10 113 021» («АО «Диакон-ДС», Россия); концентрацию креатинина в АЖ — кинетическим методом реагентами «Креатинин ДиаС D 10 171 021» («АО «Диакон-ДС», Россия); концентрацию мочевины — кинетическим ферментативным (уреазным) методом реагентами «Мочевина ДиаС D 10 310 021)»; концентрацию белка — колориметрическим методом с пирогаллоловым красным с помощью набора реагентов «Общий Белок ДиаС D 10 231 021» («АО «Диакон-ДС», Россия); концентрацию лактата — энзиматическим фотометрическим методом с использованием экспресс-анализатора Accutrend Plus («Roche Diagnostics», Швейцария).
Исследование прошло проверку и одобрено этическим комитетом ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России.
Полученные данные подвергнуты статистическому анализу. Результаты исследования обработаны с использованием программы SigmaPlot 11.0 («Systat Software, Inc.», США). Рассчитывали медиану, 25-й и 75-й перцентили, статистическую значимость межгрупповых различий по критерию Манна—Уитни (так как обнаружено непараметрическое распределение данных). Для всех использованных критериев принимали статистическую значимость при p<0,05.
Результаты и обсуждение
Масса плода не влияла на подбор групп животных. По массе плаценты, объему и осмоляльности амниотической жидкости статистически значимых различий не было (табл. 1).
Таблица 1. Определение общих показателей (масса плода, масса плаценты, объем) амниотической жидкости по критерию Манна—Уитни
| Показатель | Контроль | Гипотиазид | p |
| Масса плода, г | 17,6; 21,0; 24,5 | 16,3; 17,6; 25,1 | 0,305 |
| Масса плаценты, г | 2,6; 2,9; 3,5 | 2,1; 2,8; 3,1 | 0,241 |
| Объем амниотической жидкости, мл | 0,7; 1,6; 3,7 | 0,7; 1,8; 3,5 | 0,714 |
Примечание. Данные представлены в виде: 25-й перцентиль; медиана; 75-й перцентиль.
Гипотиазид — тиазидный диуретик. Он блокирует реабсорбцию натрия и хлора, уменьшая при этом выведение кальция. Вследствие увеличения выделения ионов натрия происходит вторичное выведение воды, тем самым достигается диуретический эффект [2].
В ходе проведенного исследования состава амниотической жидкости определяли содержание неорганических и органических компонентов (табл. 2, 3).
Таблица 2. Определение содержания неорганических компонентов (ионов) в амниотической жидкости по критерию Манна—Уитни
| Показатель | Контроль | Гипотиазид | p |
| Na+, ммоль/л | 126,5; 130,0; 135,5 | 123,5; 129,5; 132,3 | 0,312 |
| K+, ммоль/л | 5,60; 7,60; 10,1 | 6,9; 7,7; 11,4 | 0,380 |
| Cl−, ммоль/л | 102,0; 108,0; 111,0 | 82,0; 95,5; 98,0 | <0,001* |
| Ca2+, ммоль/л | 2,7; 3,4; 4,0 | 3,1; 3,4; 3,8 | 0,703 |
Примечание. Данные представлены в виде: 25-й перцентиль; медиана; 75-й перцентиль. * — статистически значимые изменения.
Таблица 3. Определение содержания органических компонентов (лактата, креатинина, мочевины) амниотической жидкости по критерию Манна—Уитни
| Показатель | Контроль | Гипотиазид | p |
| Лактат, ммоль/л | 10,2; 18,5; 23,2 | 9,8; 14,5; 20,4 | 0,356 |
| Креатинин, ммоль/л | 0,15; 0,18; 0,19 | 0,1; 0,14; 0,21 | 0,139 |
| Мочевина, ммоль/л | 5,0; 5,4; 7,1 | 5,2; 6,6; 7,8 | 0,112 |
Примечание. Данные представлены в виде: 25-й перцентиль; медиана; 75-й перцентиль.
В АЖ крольчих опытной группы содержание большинства ионов (натрия, калия, кальция) не имело статистически значимых изменений по сравнению с показателями у крольчих контрольной группы, что свидетельствует о слабом влиянии гипотиазида на состав амниотической жидкости. Однако у животных опытной группы выявлено статистически значимое снижение содержания ионов хлора, то есть гипотиазид оказал эффект на почечные канальцы плода, так как известно, что гипотиазид стимулирует выведение хлора [2]. Тем не менее диуретический эффект выявлен слабо, поскольку не получено изменения объема амниотической жидкости, а также нет изменения концентрации ионов натрия, калия и кальция, на реабсорбцию которых тиазидные препараты оказывают прямое влияние [22].
При определении содержания органических компонентов (лактата, креатинина, мочевины) амниотической жидкости крольчих не выявлено статистически значимых различий между опытной и контрольной группами. Отсутствие изменений в концентрации креатинина и мочевины говорит о том, что гипотиазид в данном эксперименте не влияет на клубочковую фильтрацию [23]. Соизмеримая концентрация лактата у животных обеих групп говорит об отсутствии гипоксического влияния гипотиазида на плод и малом его влиянии на реабсорбцию в почечных канальцах [24]. Таким образом, выявлено крайне слабое влияние гипотиазида на состав и объем амниотической жидкости. Это открывает новые возможности в изучении эффектов тиазидных препаратов при беременности, так как установлено, что они оказывают слабое влияние на гидродинамику плодных жидкостей.
Заключение
В ходе эксперимента показано, что гипотиазид не оказывает существенного влияния на параметры амниотической жидкости, такие как объем, электролитный состав (за исключением ионов Cl−), и ее органические компоненты. Это может быть объяснено слабым диуретическим влиянием гипотиазида как на организм матери, так и на организм плода. Применение диуретиков у беременных ограниченно, однако клинически эти препараты могут быть использованы по жизненным показаниям, поэтому моделирование влияния диуретиков на объем и состав амниотической жидкости представляется необходимым. Диуретики могут быть использованы для коррекции состава и объема амниотической жидкости, например при лечении женщин с олигогидрамнионом/полигидрамнионом, поэтому их изучение в эксперименте является оправданным с терапевтической точки зрения.
Участие авторов:
Концепция и дизайн исследования — Шабалина Ю.В., Сузопов Е.В.
Сбор и обработка материала — Шабалина Ю.В., Сузопов Е.В., Дегтярева Ю.В., Переверзева О.В.
Статистическая обработка — Шабалина Ю.В., Штоббе И.А.
Написание текста — Шабалина Ю.В., Дегтярева Ю.В., Переверзева О.В.
Редактирование — Шабалина Ю.В., Дегтярева Ю.В., Штоббе И.А.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.