Иззати-заде К.Ф.

Кафедра неврологии им. проф. В.П. Первушина, кафедра гистологии лечебного факультета Пермской государственной медицинской академии им. акад. Е.А. Вагнера

Четвертных В.А.

Шутов А.А.

Морфометрический анализ гранул серотонина тромбоцитов при мигрени

Журнал: Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2011;111(10): 58-61

Просмотров : 11

Загрузок :

Как цитировать

Иззати-заде К. Ф., Четвертных В. А., Шутов А. А. Морфометрический анализ гранул серотонина тромбоцитов при мигрени. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2011;111(10):58-61.

Авторы:

Иззати-заде К.Ф.

Кафедра неврологии им. проф. В.П. Первушина, кафедра гистологии лечебного факультета Пермской государственной медицинской академии им. акад. Е.А. Вагнера

Все авторы (3)

Серотонин (5-гидрокситриптамин,5-НТ) - биогенный амин с выраженными вазоконстрикторными свойствами - впервые выделен из крови в 1944 г. M. Rapport и соавт. [26]. В 1946 г. M. Rapport [27] установил его химическое строение, а спустя два года Е. Hamlin и Е. Fisher [17] осуществили его синтез. Оказалось, что серотонин является производным индола, близким к триптофану. В 1964 г. A. Dahlstrom и K. Fuxe [15] выявили наличие в головном мозге серотонинергических нейронов. Наибольшая концентрация этих нейронов сосредоточена в ядрах шва ствола мозга, некоторых подкорковых образованиях (хвостатое ядро, скорлупа чечевичного ядра, переднее и медиальное ядра зрительного бугра), промежуточном и обонятельном мозге, амигдале, гипоталамусе, ряде структур, связанных с ретикулярной активирующей системой, и коре больших полушарий [2, 3, 8, 12, 22]. У человека 90% серотонина содержится в энтерохромаффинных клетках слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, 10% - в тромбоцитах [12, 15, 17].

Первые исследования серотонина при мигрени были связаны с упрощенной гипотезой патогенеза заболевания, согласно которой мигренозный приступ является следствием повышенной выработки этого биологически активного вещества [1, 4, 6, 9, 11]. Однако искусственно вызвать приступ мигрени путем внутримышечного введения серотонина не удалось. F. Sicuteri и соавт. [28] показали, что во время приступа мигрени возрастает выделение с мочой метаболитов серотонина, главным образом гидроксиндолуксусной и ванилинминдальной кислот. Австралийскими учеными было установлено, что во время приступа мигрени в крови больных значительно - от 9 до 80% (в среднем на 20%) - падает содержание серотонина [20]. Позже было обнаружено, что колебание концентрации серотонина в плазме крови ассоциировано с клинической динамикой мигренозного приступа, и сформулирована «серотониновая гипотеза» мигрени [1, 12-14, 16, 18, 19, 21].

Увеличение в приступе мигрени концентрации серотонина плазмы связывают с распадом тромбоцитов [25]. Неврологическая симптоматика, характерная для мигренозного приступа, возникает вследствие спазма церебральных сосудов и снижения мозгового кровотока в отдельных участках мозга (в фазе мигренозной ауры), снижения тонуса, избыточного растяжения экстрацеребральных сосудов и раздражения в них болевых рецепторов, периваскулярного отека в собственно алгической фазе. Именно в фазе головной боли наблюдается увеличение экскреции серотонина и его метаболитов с мочой и снижение содержания серотонина в плазме и ликворе [25].

Известно, что тромбоциты крови человека являются адекватной экстрацеребральной моделью серотонинергических нейронов в отношении процессов в серотонинергических синапсах [5]. Тромбоциты крови по фармакологическим, биохимическим и морфоцитологическим свойствам идентичны серотонинергическим нейронам [29]. Поэтому дисфункция тромбоцитарной серотониновой системы обычно сопряжена с соответствующей дисфункцией серотонинергических нейронов мозга [2, 23, 24], что позволяет экстраполировать биохимические процессы, равно как и морфоструктурные изменения, происходящие в тромбоцитах, на аналогичные явления в серотонинергических нейронах.

Ранее гистохимическим методом Фонтана-Массона нами было исследовано количественное содержание гранул серотонина в тромбоцитах периферической крови у больных мигренью в межприступном периоде и во время приступа [12]. В межприступном периоде в 100 тромбоцитах крови выявлено высокое количественное содержание гранул серотонина (469,3±22,4), которое не отличается от этого показателя здоровых лиц из группы контроля (447,9±19,6). На высоте приступа мигрени содержание гранул серотонина в тромбоцитах катастрофически (почти в 10 раз) падает: их количество составляет всего 47,7±7,4 (р<0,001). В качестве иллюстрации приводим цифровые микрофотографии (электронное увеличение в 1350 раз) гранул серотонина в тромбоцитах здорового человека, окрашенных по методу Фонтана-Массона, (рис. 1, А) и больной с мигренью в межприступном периоде (рис. 1, Б), на которых определяются гранулы в большом количестве, и той же больной во время приступа мигрени (рис. 1, В), где визуализирован дефицит гранулярного серотонина.

Рисунок 1. Гранулы серотонина в тромбоцитах крови. А - практически здорового человека; Б - больной с мигренью в межприступном периоде; В - этой же больной во время приступа мигрени. Ув. 900.

Во время мигренозного приступа концентрация растворенного в сыворотке крови серотонина, установленная методом иммуноферментного твердофазного анализа с помощью тест-системы ELISA, наоборот, достоверно (р<0,001) повышается - до 345,5±39,1 нг/мл, относительно его концентрации как у здоровых лиц (184,2±12,3 нг/мл), так и больных с мигренью в межприступном периоде (221±28,3 нг/мл). Это свидетельствует о выходе, буквально «бегстве» гранулярного, физиологически малоактивного серотонина тромбоцитов из его гуморального депо в свободный серотонин плазмы крови с одновременным срочным экстрагированием в мочевыделительную систему. Это, очевидно, во многом обусловливает патофизиологический механизм мигрени (кортикальную депрессию Лео, тригеминально-вазомоторную реакцию, отек мозга, асептическое воспаление оболочек и др.) и клинический паттерн мигренозного приступа. Выведение серотонина с мочой проявляется его дефицитом в тромбоцитах, а также плазме крови непосредственно в постприступной фазе мигрени.

Таким образом, наши данные подтверждают феномен выброса во время приступа мигрени депонированного в тромбоцитах эндогенного серотонина в плазму, о чем свидетельствует низкое содержание гранул серотонина в тромбоцитах и увеличение его концентрации в сыворотке крови.

Каскад гранулярного серотонина тромбоцитов во время приступа мигрени не может, очевидно, не отразиться на их морфологических характеристиках, и если они изменяются, можно предположить развитие аналогичных цитоморфологических изменений и нейронального серотонина.

Нами проведена морфометрия гранул серотонина в тромбоцитах периферической крови больных с мигренью во время приступа и межприступном периоде заболевания. В доступной литературе подобных исследований не обнаружено.

Материал и методы

Исследуемая группа состояла из 20 больных с мигренью, 14 женщин и 6 мужчин в возрасте 23-47 лет (средний - 34,6±8,0 года), 17 пациентов - с мигренью без ауры, 3 - с аурой. В контрольную группу вошли 10 здоровых лиц аналогичного возраста и пола.

У обследуемых утром натощак из пальца забирали 1-2 капли крови на чистое предметное стекло, предварительно выдержанное в эксикаторе над парами 40% раствора формалина в течение 1-2 мин. Из свежей капли крови готовили мазок, который еще влажным подвергали воздействию паров формалина, а затем фиксировали, проводя над пламенем спиртовки 3-4 раза. Зафиксированный таким образом мазок окрашивали по методу Фонтана-Массона [7, 10]: выдерживали в растворе нитрата серебра при температуре 56-58°С в течение 50-60 мин, затем промывали дистиллированной водой и выдерживали в 5% растворе тиосульфата натрия (5 г щелочного тиосульфата натрия растворяли в 100 мл дистиллированной воды) 4-6 мин. Окрашенный мазок высушивали на воздухе и при 900-кратном увеличении микроскопа просматривали 100 тромбоцитов, подсчитывая в них количество гранул серотонина.

Мазки крови после серебрения исследовали на установке OLIMPUS. Подсчет гранул серотонина проводили в автоматическом режиме обработки изображений с использованием программы Морфология-мастер. Калибровочную шкалу устанавливали со стандартного микрометра, снятого при рабочем инструментальном увеличении (x1350) и занесенного в рабочую программу. Регистрировали площадь, диаметр, длину и ширину гранул серотонина. Результаты фиксировали на цифровой аппарат и обрабатывали на персональном компьютере.

Статистический анализ проводили в помощью непараметрического критерия Вилкоксона для двух зависимых групп.

Результаты

Количественные показатели морфометрического исследования гранул серотонина тромбоцитов больных с мигренью представлены в таблице.

Видно, что при этом заболевании имеется ряд морфометрических особенностей гранулярного серотонина. В частности, в межприступном периоде мигрени наиболее информативны средние показатели, характеризующие площадь и диаметр (объем) гранул, которые несколько большего размера, чем в контроле. В то же время величины, указывающие на длину и ширину гранул, существенно уступают аналогичным данным у здоровых. Создается впечатление, что в межприступном периоде мигрени гранулы серотонина структурно более выражены: полнотелы, полновесны, концентрированны. Во время мигренозного приступа морфометрические показатели немногочисленных оставшихся в тромбоцитах гранул серотонина продолжают претерпевать значительные изменения, увеличиваясь в размерах (особенно диаметр (объем) и площадь); гранулы набухают от избытка 5-НТ. Можно предположить, что и те гранулы серотонина, которые в приступе были «вымыты» из тромбоцитов, предварительно также претерпели аналогичные изменения и, достигнув критической массы, разрешились каскадом выброса в плазму крови. Это явление отчетливо прослеживается на параметрах, характеризующих прежде всего увеличение массы гранулы с нарастанием диаметра (объема) и площади (рис. 2).
Рисунок 2. Средняя площадь гранул серотонина у больных мигренью. По оси абсцисс - обследованные, по оси ординат - площадь гранул (мк).

Мы полагаем, что ферментативные реакции, обеспечивающие в межприступном периоде мигрени процесс экстрагирования серотонина из плазмы крови и накопления его в виде гранул в тромбоцитах (процесс депонирования), а также во время приступа осуществляющие обратную трансформацию серотонина гранулярного в плазменный, имеют однотипное морфологическое отображение.

Таким образом, хотя количественные показатели гранулярного серотонина у больных в межприступном периоде мигрени и здоровых лиц практически идентичны, их морфометрические характеристики имеют различия. Основные средние показатели, характеризующие диаметр и площадь гранул при мигрени, превышают таковые у здоровых лиц: тромбоциты «вынашивают» гранулы серотонина. Во время приступа немногочисленные гранулы серотонина, оставшиеся в тромбоцитах, еще больше увеличивают практически все морфометрические параметры. Это явление отчетливо прослеживается на одном из интегративных морфометрических показателей - средней площади гранул серотонина (см. рис. 2). Следовательно, ферментативные реакции, обеспечивающие в приступе мигрени трансформацию инактивного, депонированного в гранулах серотонина в свободный серотонин плазмы, имеют структурное отображение.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail