Рассеянный склероз (РС) на сегодняшний день является одним из самых распространенных неврологических заболеваний и одной из самых частых причин инвалидизации в молодом возрасте [1]. Развитие заболевания, его течение, скорость прогрессирования зависят от ряда факторов, одну из ведущих ролей в которых играют генетические особенности [2—3].

Исследования генетики РС, как в результате полногеномных поисков ассоциаций, так и по методу «ген—кандидат», не теряют своей актуальности, хотя в литературе нередко представлены разрозненные, а подчас и противоречивые результаты [4, 5]. Установлено значение отдельных генов в наследственной предрасположенности к РС с разной степенью достоверности. Однако в разнородных этнических группах (и даже в пределах одной этнической группы) выявлены ассоциации полиморфных участков различных генов [3].

Для Пермского края изучение генетики РС представляется актуальным в связи с достаточно высоким уровнем распространенности заболевания в регионе [6].

Основными генетическими факторами предрасположенности к РС считаются гены HLA-системы [3], однако и другие, не связанные с иммунорегуляцией, гены значимы в патогенезе Р.С. Одним из них является ген KIF1B (Kinesin family member 1B), кодирующий одноименный белок, основной функцией которого является транспорт синаптических везикул и митохондрий [7, 8]. Кроме того, белок KIF1B принимает участие в процессе апоптоза, возможно также его действие на процесс миелинизации нервных волокон путем влияния на работу олигодендроцитов [8].

Полиморфизм гена KIF1B rs10492972 в различных исследованиях показал противоречивые результаты в отношении участия в патогенезе Р.С. Первое исследование полиморфизма rs10492972, проведенное Y. Aulchenko и соавт. [9], выявило влияние вариантной аллели С на развитие РС с отношением шансов (ОШ) 1,35 (p=2,5·10^–10). Членами международного генетического консорциума по проблемам РС [10] было отмечено отсутствие этой клинико-генетической связи, более того, показана противоположная тенденция. В российском исследовании, проведенном на территории Якутии (Республика Саха), не было установлено влияния аллелей или генотипов на развитие РС, однако результаты метаанализа, осуществленного в рамках того же исследования, указали на протективную роль аллели С (ОШ 0,95; 95% ДИ 0,9—0,99; p=0,02) [11].

Однонуклеотидный полиморфизм rs117525287 у больных РС ранее не изучался. В опубликованной на сегодняшний день литературе представлены сведения о его защитной функции в отношении развития болезни Шарко—Мари—Тутта [12].

Учитывая сказанное, интерес представляет определение влияния полиморфизмов гена KIF1B на развитие РС и выраженность его клинических проявлений на территории Пермского края.

Цель исследования — выявить ассоциации однонуклеотидных полиморфизмов rs10492972 и rs117525287 гена KIF1B с развитием и выраженностью клинических проявлений РС у больных в Пермском крае.

Обследованы 206 неродственных между собой пациентов с достоверным диагнозом РС.

Критерии включения в исследование: установленный диагноз РС, согласно критериям McDonald (2010); рецидивирующе-ремиттирующий и вторично-прогрессирующий тип течения заболевания; длительность РС не менее 6 мес; подписание добровольного информированного согласия на участие.

Набор группы пациентов с РС проходил на базе Центра рассеянного склероза и отделения неврологии ГБУЗ ПК «Ордена «Знак почета» Пермская краевая клиническая больница».

Из выборки были исключены 9 пациентов, получающих ПИТРС в рамках клинических исследований. Таким образом, в основную группу вошли 197 пациентов с РС (средний возраст больных 39 [31; 48] лет, средний возраст дебюта заболевания 28 [22; 35] лет, длительность заболевания от 6 мес до 38 лет — в среднем 9 [6; 14] лет). В половой структуре преобладали (67%) женщины. Группу контроля составили 80 здоровых, не имеющих родственников с диагнозом РС.

Тяжесть состояния определялась с помощью шкалы функциональных систем Kurtzke с оценкой по расширенной шкале инвалидизации (Expanded Disability Status Scale — EDSS), шкалы неврологического статуса (SCRIPPS), шкалы оценки функции рук (Arm-index) и шкалы тяжести астении (Fatigue Severity Score — FSS) [13]. Скорость прогрессирования заболевания, рассчитанная как отношение показателя по шкале EDSS к длительности заболевания (в годах), определялась как низкая при приросте, равном или менее 0,25 балла в год, как умеренная — при приросте более 0,25 балла в год, но равном или менее 0,75 балла в год, высокая — при 0,75 балла в год [14].

Расчет мощности исследования был проведен с учетом характеристик каждого из полиморфизмов при помощи онлайн-калькулятора GAS Power Calculator.

Генетический анализ осуществлялся на образцах ДНК, полученных из цельной венозной крови больных РС методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени с использованием реакционной смеси для проведения ПЦР (ЗАО «Синтол», Россия), праймеров и зондов KIF1B T/C (rs10492972), A/G (rs117525287) Thermo Fisher Scientific («Applied Biosystems», США). Для анализа генетического полиморфизма применялся метод аллельной дискриминации с помощью детектирующего амплификатора CFX96 («Biorad», США) и программного пакета CFX Manager 2.1 («Biorad», США). Доминирующая аллель определялась по результату пересечения кривой флюоресценции с пороговой линией.

Для математической обработки количественных статистических параметров использовали программный пакет Statistica 10.0 («Statsoft», США) с расчетом коэффициента корреляции Спирмена, критерия Манна—Уитни для независимых групп. Анализ ассоциаций количественных признаков с генотипом, а также множественный анализ частоты аллелей были проведены с помощью программного обеспечения SNPstats («Institut Català d’Oncologia», Испания) с расчетом коэффициента χ² Пирсона. Различия считались достоверными при p<0,05. Для сравнения 3 и более групп применялась поправка Бонферрони.

В основной группе большинства (83,76%) пациентов течение РС носило ремиттирующий характер, у 16,24% — вторично-прогрессирующий.

В структуре жалоб больных преобладали двигательные (72,58%), координаторные (68,02%) и тазовые (70,1%) нарушения.

Средний показатель по шкале EDSS составил 4 [3; 6] балла, преимущественно за счет двигательных (96,6%), координаторных (95,14%), стволовых (89,8%) и чувствительных (84,95%) нарушений.

У пациентов основной группы РС характеризовался средней скоростью прогрессирования — 0,42 [0,28; 0,67] балла в год. Среднее значение по шкале SCRIPPS составило 62 [50; 79] балла.

Шкала Arm-index была использована в качестве дополнительной оценки функции произвольных движений. У больных РС среднее значение по шкале Arm-index составило 1 [1; 2] балл, что соответствует минимальным симптомам в одной или обеих руках, не мешающих выполнению перечисленных функций.

Значение по шкале FSS находилось в пределах от минимального (0 баллов) до максимального (7 баллов), в среднем не было высоким и составляло 4,33 [2,55; 5,44] балла.

Была выявлена корреляционная связь между значениями по шкалам EDSS и Arm-index (r=0,71, p=0,000000), по EDSS и FSS (r=0,44, p=0,000000). Достоверная связь была установлена между показателями по шкалам FSS и Arm-index (r=0,57, p=0,0000001), FSS и SCRIPPS (r=0,33, p=0,000001), что указывает на закономерные взаимоотягощающие процессы различных клинических проявлений. При этом скорость прогрессирования РС не коррелировала с показателями по изучаемым шкалам (p>0,05).

Возраст дебюта РС коррелировал с оценками по всем изучаемым шкалам, однако во всех случая коэффициент корреляции был менее 0,33 (p<0,05).

При делении больных на подгруппы по половому признаку не было обнаружено различий значений по EDSS (p=0,66), SCRIPPS (p=0,97), Arm-index (p=0,83). Однако был установлен достоверно более высокий балл по шкале FSS у женщин (p=0,04).

У больных с вторично-прогрессирующем типом течения наблюдались достоверно более высокие показатели клинического статуса по шкалам EDSS (p=0,000000), SCRIPPS (p=0,000000), FSS (p=0,003), Arm-index (p=0,000002).

Реакция генотипирования по полиморфизмам rs10492972 и rs117525287 не состоялась у 2 пациентов, поэтому их данные были исключены из статистической обработки.

Генетическое исследование по полиморфному маркеру rs10492972 в основной группе показало распределение частоты генотипов T/T, T/C и C/C (49,74, 41,02 и 9,24% соответственно), распределение аллелей T и С (70,26 и 29,74% соответственно). В группе контроля распределение генотипов T/T, T/C rs10492972 составило 21,75 и 76,25% соответственно, вариантный генотип С/С обнаружен не был, распределение аллелей T и С — 61,87 и 38,13% соответственно. Полученные результаты оказались схожими с опубликованными в литературе, в частности — с европейскими данными [15]: T — 67,6%, C — 32,4%.

Генотипирование по полиморфизму rs117525287 выявило преобладание гомозиготного генотипа A/А как в группе больных РС (94,36%), так и в группе контроля (95%). Вариантный генотип G/G не был обнаружен ни в одной из групп. Распределение аллелей в основной группе показало следующий результат: А — 97,18%, G — 2,82%; в группе контроля аллель, А была выявлена в 97,5% случаев, G — в 2,5%.

В таблице

Установлено преобладание генотипа C/T в группе здоровых лиц (ОШ 0,26; 95% ДИ 0,14—0,44; p<0,0001).

Ассоциаций генотипов rs117525287 KIF1B с наличием РС не обнаружено (p=0,83).

В группе больных РС было обнаружено достоверное увеличение балла по EDSS у пациентов с доминирующей аллелью T (p=0,02) и соответственно снижение балла по шкале SCRIPPS (p=0,03).

Генотипы полиморфизма rs10492972 не показали достоверной связи с тяжестью инвалидизации по шкале EDSS как в общей выборке (p>0,05), так и при разделении по полу (p=0,95). У больных РС не было отмечено достоверных различий значения скорости прогрессирования при доминировании той или иной аллели (p=0,22). Однако у мужчин аллель C была ассоциирована с более высоким баллом скорости прогрессирования РС (p=0,03).

Ассоциаций генотипов rs10492972 с показателями клинического статуса (EDSS, FSS, SCRIPPS, Arm-index) также не было получено (p>0,05).

Кроме того, не установили ассоциаций генотипов rs117525287 с выраженностью клинических проявлений по шкалам EDSS (p=0,39), SCRIPPS (p=0,83), FSS (p=0,65), Arm-index (p=0,42).

При исследовании взаимного влияния аллелей (гаплотипов) на клинические проявления не обнаружили ассоциаций гаплотипов со скоростью прогрессирования РС, тяжестью состояния по изучаемым шкалам.

Таким образом, впервые была изучена частота аллелей и генотипов полиморфизмов rs10492972 и rs117525287 гена KIF1B в группе больных РС на территории Пермского края. Распределение аллелей соответствует данным распределения по европейской популяции.

Выявлено достоверное преобладание гетерозиготного генотипа T/Crs10492972 KIF1B у здоровых группы контроля. Вариантный генотип С/С был обнаружен только в группе больных РС.

У больных с РС в Пермском крае наблюдалось влияние доминирующей аллели Т однонуклеотидного полиморфизма rs10492972 KIF1B на выраженность клинических проявлений по шкалам EDSS, SCRIPPS. Аллель С ассоциирована с более высокой скоростью прогрессирования у мужчин с РС.

Не получено связи генотипа изучаемых полиморфизмов с клиническими параметрами по шкалам EDSS, SCRIPPS, FSS, Arm-index, а также скоростью прогрессирования заболевания.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

The authors declare no conflicts of interest.

Сведения об авторах

Арбузова Е.Е. — https://orcid.org/0000-0002-6412-5975; e-mail: elenaarbuzova@hotmail.com

Селянина Н.В. — https://orcid.org/0000-0002-2317-7808; e-mail: nselyanina@mail.ru

Каракулова Ю.В. — https://orcid.org/0000-0002-7536-2060; e-mail: julia.karakulova@mail.ru

Как цитировать:

Арбузова Е.Е., Селянина Н.В., Каракулова Н.В. Ассоциации однонуклеотидных полиморфизмов гена KIF1B с выраженностью клинических проявлений рассеянного склероза. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2019;119(10, вып. 2):58-62. https://doi.org/10.17116/jnevro201911910258

Автор, ответственный за переписку: Арбузова Елена Евгеньевна — e-mail: elenaarbuzova@hotmail.com