Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Логутова Л.С.

Московский областной НИИ акушерства и гинекологии

Радьков О.В.

Тверская государственная медицинская академия

Калинкин М.Н.

Тверская государственная медицинская академия

Заварин В.В.

Тверская государственная медицинская академия

Циркуляция внеклеточной плодной дезоксирибонуклеиновой кислоты в плазме крови беременных и формирование у них клинико-патогенетических особенностей артериальной гипертензии

Авторы:

Логутова Л.С., Радьков О.В., Калинкин М.Н., Заварин В.В.

Подробнее об авторах

Журнал: Российский вестник акушера-гинеколога. 2012;12(2): 18‑21

Просмотров: 240

Загрузок: 1

Как цитировать:

Логутова Л.С., Радьков О.В., Калинкин М.Н., Заварин В.В. Циркуляция внеклеточной плодной дезоксирибонуклеиновой кислоты в плазме крови беременных и формирование у них клинико-патогенетических особенностей артериальной гипертензии. Российский вестник акушера-гинеколога. 2012;12(2):18‑21.
Logutova LS, Rad'kov OV, Kalinkin MN, Zavarin VV. The circulation of fetal extracellular deoxyribonucleic acid in the plasma of pregnant women and the formation of clinical and pathogenetic features of arterial hypertension in them. Russian Bulletin of Obstetrician-Gynecologist. 2012;12(2):18‑21. (In Russ.).

?>

Преэклампсия - одна из ведущих причин материнской и перинатальной заболеваемости и смертности во всем мире, поэтому крайнюю необходимость представляет разработка тестов для прогнозирования и ранней диагностики этого осложнения беременности еще до появления клинических симптомов заболевания [1, 9]. Циркулирующая внеклеточная общая и плодная дезоксирибонуклеиновая кислота (воДНК, впДНК) в плазме крови беременных является новым биомаркером для пренатальной диагностики. Уровень впДНК в настоящее время определяется путем анализа локусов SRY и DYS14, связанных с Y-хромосомой, в этом случае анализируются образцы только при беременности плодом мужского пола [2, 10]. Однако предложены альтернативные подходы с использованием независимых от пола таких эмбриональных эпигенетических маркеров, как гиперметилированная ДНК или внеклеточная плацентарная РНК [6, 11]. Для раннего распознавания преэклампсии увеличение уровня впДНК в плазме крови матери может быть отмечено уже в I триместре беременности [13]. Причинами роста концентрации впДНК считают нарушение инвазии ворсин хориона и патологические процессы в маточно-плацентарном локусе [15]. Однако уровень этого биомаркера не ассоциирован с проявлениями системного воспалительного ответа, оцениваемого по количеству C-реактивного белка, антифосфолипидных или анти-ДНК антител, сопровождающих аномальную плацентацию [7, 10]. В то же время концентрация впДНК связана с уровнем активина А, ингибирующего рост сосудистого эндотелия при инвазии трофобласта, так как уровень обоих факторов сочетанно увеличивается до появления клинических проявлений преэклампсии [5]. Выраженность симптомов преэклампсии может быть связана с количеством циркулирующей впДНК, что, однако, остается предметом дискуссий [3, 13]. Таким образом, клинико-патогенетическое значение внеклеточной ДНК в плазме крови матери при артериальной гипертензии остается мало изученным, как и роль нового биомаркера в сравнительном анализе преэклампсии и хронической артериальной гипертензии (ХАГ), осложняющей процесс гестации.

Цель данного исследования - изучение ассоциации уровней воДНК и впДНК в плазме крови матери с клинико-патогенетическими особенностями преэклампсии и ХАГ, а также с другими факторами, патогенетически значимыми для формирования этих заболеваний.

Материал и методы

Проведено наблюдение за 102 беременными в III триместре гестации, из которых у 35 была преэклампсия (1-я группа), 37 пациенток страдали ХАГ (2-я группа) и 30 были здоровыми с физиологическим течением беременности (контрольная группа). Средний возраст в группах составил 28,7±7,6, 29,3±6,5 и 26,4±4,3 года соответственно. Все женщины вынашивали плод мужского пола при одноплодной беременности. В качестве дополнительных контрольных групп были обследованы по 10 беременных указанных выше нозологических групп с плодами женского пола.

Проводилось суточное мониторирование артериального давления (АД), в анализ включены данные среднесуточного систолического и диастолического АД (ССАД и СДАД). Оценен кровоток в системе мать-плацента- плод при допплерометрии маточных и пуповинных артерий.

Выделение внеклеточной ДНК проводили из 1000 мкл плазмы крови методом сорбции на магнитных частицах с использованием набора РеалБест экстракция 1000. Элюцию осуществляли в объеме 40 мкл. Для определения концентрации внеклеточной ДНК использовали тест-системы Quantifiler и Quantifiler Y. С помощью данных тест-систем оценивали кинетику накопления продуктов амплификации локусов 5p15.33 (ген теломеразной обратной транскриптазы) для воДНК и Yp11.3 (ген детерминирующего пол региона Y-хромосомы - SRY) для впДНК. В качестве детектирующего амплификатора использовали систему регистрации полимеразной цепной реакции ABI Prism 7500.

Концентрацию интерлейкинов (IL) 2, 6 и 10 в крови матери и пуповинной крови, собранной для исследования после вагинальных родов, определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов реактивов ИФА-IL-2, ИФА-IL-6 и ИФА-IL-10.

Проверку на нормальность распределения данных проводили с помощью критерия Колмогорова-Смирнова. Результаты представлены в виде медианы, нижнего и верхнего квартилей (Me, Q1-Q2), значений среднего и стандартного отклонений (M±SD). Оценка связи количественных признаков в зависимости от их распределения проведена с помощью t-теста Стьюдента, U-теста Манна-Уитни, дисперсионного анализа (ANOVA), критерия Краскела-Уоллиса. Связь между переменными определена тестом ранговой корреляции Спирмена. Статистическая значимость различий установлена при p<0,05.

Результаты и обсуждение

При анализе клинической характеристики групп установлено, что индекс массы тела (ИМТ) до беременности у больных с преэклампсией (1-я группа) и ХАГ (2-я группа) имел тенденцию к повышению по сравнению с таковым у здоровых женщин, тогда как ИМТ перед родами был больше в обеих группах обследованных пациенток (табл. 1).

Срок беременности к моменту родов у пациенток 1-й группы был значительно меньше, чем у пациенток контрольной группы, что связано с необходимостью досрочного родоразрешения у некоторых беременных 1-й группы. Синдром задержки внутриутробного роста плода (ЗВУР) диагностирован у 10 (28,6%) пациенток 1-й группы и у 5 (13,5%) - с ХАГ в отсутствие этого осложнения у женщин контрольной группы. Синдром ЗВУР плода в сочетании с недоношенностью обусловили достоверно низкую массу тела новорожденных у матерей с преэклампсией по сравнению с таковой у здоровых родильниц. Проявления ЗВУР ассоциировались с нарушением кровообращения в системе мать-плацента-плод в обеих группах пациенток с артериальной гипертензией. Однако значения индекса резистентности (RI) и систолодиастолического отношения (S/D) в маточных артериях значимо преобладали только у пациенток 1-й группы по сравнению с таковыми у беременных контрольной группы.

В плазме крови воДНК была обнаружена у всех беременных. Уровень этого биомаркера значительно преобладал при преэклампсии по сравнению с таковым во 2-й и контрольной группах (р=0,04 и р=0,03 соответственно), тогда как у больных с ХАГ и здоровых беременных различия в концентрации воДНК были незначимы (р=0,5) (табл. 2).

Источником высокого уровня воДНК при преэклампсии, по-видимому, является преимущественно печеночная ткань, цитолиз которой отмечается при этом осложнении беременности и наиболее выражен в сочетании с HELLP-синдромом. Так, клиническое течение преэклампсии сопровождается увеличением уровня воДНК в 3,5 раза, а при осложнении HELLP-синдромом - в 10 раз по сравнению с таковым у здоровых беременных [10]. Кроме того, установлена прямая зависимость между уровнем воДНК и активностью ферментов печени в плазме крови у беременных с преэклампсией [9].

У 33 (94,3%) пациенток 1-й группы была обнаружена впДНК, последняя выявлена у 30 (81,1%) - 2-й группы и только у 23 (76,6%) - здоровых беременных. Вместе с тем уровень впДНК при преэклампсии был значительно выше, чем у пациенток с ХАГ и в группе здоровых беременных (р=0,013 и р=0,0006 соответственно). Рост концентрации впДНК до появления клинических симптомов преэклампсии происходит в связи с гипоксией/реоксигенацией в пределах межворсинчатого пространства, приводящей к оксидантному стрессу ткани, некрозу и увеличению плацентарного апоптоза [1, 2, 13]. Манифестация преэклампсии ассоциирована со вторым пиком повышения уровня впДНК в плазме крови матери (по данным других авторов [8, 9, 15], в 3-80 раз), зависящего от нарушения почечного клиренса плодового биомаркера.

Необходимо отметить, что концентрация впДНК у беременных всех групп не зависела от уровня воДНК, что, видимо, связано с различными механизмами повышения содержания биомаркеров в плазме.

Концентрация IL-6 материнской плазмы в 1-й группе беременных была значительно выше, чем у пациенток 2-й и контрольной групп (р=0,018 и р=0,027 соответственно), как и уровень IL-6 пуповинной крови при сравнительном анализе тех же групп (р=0,02 и р=0,035 соответственно) (см. табл. 2). Содержание IL-10 и IL-2 плазмы крови в группе с гестационным повышением АД (1-я группа) увеличивалось, достигая достоверных различий по сравнению с уровнем этих цитокинов в контрольной группе (р=0,038 и р=0,04 соответственно), но не с показателями 2-й группы. Уровень IL-10 в пуповинной крови при преэклампсии значительно превысил этот показатель во 2-й и контрольной группах беременных (р=0,024 и р=0,032 соответственно), а концентрация IL-2 во всех группах не различалась.

Связи клинико-функциональных показателей, уровней цитокинов с концентрацией воДНК не установлено во всех группах. Значимые результаты корреляционного анализа для впДНК и количественных признаков получены только в 1-й группе (табл. 3).

Установлена отрицательная зависимость между уровнем впДНК и сроком родоразрешения, что может указывать на связь этого биомаркера со степенью тяжести заболевания. Не все авторы [6, 8] придерживаются подобного мнения, хотя продолжительность течения преэклампсии оказывает влияние на уровень впДНК. Увеличение RI в маточных артериях, связанное с синдромом ЗВУР плода, прямо зависит от уровня впДНК. Показано [10, 12], что выраженность нарушения плацентарной перфузии при преэклампсии связана с увеличением концентрации впДНК уже в I триместре беременности, что указывает на первичный характер расстройств маточно-плацентарного кровотока при гестационном повышении АД.

Значимый коэффициент корреляции получен только при анализе пары «IL-10 плазмы матери - впДНК», тогда как связь уровня провоспалительных цитокинов IL-6 и IL-2 с концентрацией впДНК не установлена. Однако отсутствие взаимосвязи между этими показателями может не означать отсутствия их биологического взаимодействия; оно зависит от различного периода полураспада цитокинов и впДНК [9]. Кроме того, IL-6 и IL-2 - важные модуляторы дисфункции эндотелия и системного воспаления при преэклампсии, инициатором которых является мигрирующий в кровоток матери трофобласт, чьи клетки - основной источник впДНК [4, 12, 14].

Таким образом, из двух изучаемых форм гипертензии только преэклампсия связана с увеличением уровня внеклеточной ДНК в крови матери. Так, концентрация впДНК является значимым биомаркером клинико-патогенетических особенностей преэклампсии, связанных с морфофункциональными нарушениями в системе мать-плацента-плод, хотя ассоциации между провоспалительными IL-6 и IL-2 и уровнем генетического плодового материала в крови матери не установлено. Очевидно, что пренатальная диагностика, основанная на изучении циркулирующей впДНК, весьма перспективна, однако для внедрения в клиническую практику необходимо дальнейшее исследование роли этого фактора в патологии беременности.

Выводы

1. Установлено повышение уровня внеклеточной общей и плодной ДНК у беременных с преэклампсией.

2. Уровень внеклеточной плодной ДНК у пациенток с преэклампсией ассоциирован с наличием синдрома задержки роста плода, индексом резистентности в маточных артериях и уровнем интерлейкина-10 в плазме крови беременных.

3. Концентрация внеклеточной плодной ДНК является значимым биомаркером клинико-патогенетических особенностей преэклампсии.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail