Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.
Локальный цитокиновый профиль эндометрия у пациенток с повторными неудачами имплантации и его фармакологическая коррекция секретомом мононуклеаров периферической крови
Журнал: Проблемы репродукции. 2024;30(5): 46‑54
Прочитано: 2330 раз
Как цитировать:
В программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) у 60—70% женщин после переноса эуплоидного эмбриона хорошего качества беременность не наступает [1]. Репродуктивные неудачи могут быть связаны с материнскими и отцовскими факторами, качеством гамет и эмбрионов, особенностями образа жизни в сочетании с психологическим состоянием. Одной из вероятных причин, препятствующих имплантации, является дисбиоз полости матки [2]. Исследование микробиоты эндометрия в контексте бесплодия привлекает все больше внимания с позиций потенциальных возможностей терапии. Определение различных медиаторов воспаления в тканях и биологических жидкостях лежит в основе перспективного направления для диагностики локального воспаления [3]. Аномальная активация врожденного иммунитета эндометрия, стимулируемая различными патогенами, может представлять собой один из механизмов, в настоящее время недостаточно изученных, отрицательно влияющих на рецептивность эндометрия [4]. Имеются данные, позволяющие предположить, что цитокины, продуцируемые материнским эндометрием и развивающимся эмбрионом, играют основополагающую роль в этом процессе. Ряд исследователей отводят особую роль в успехе имплантации локальной иммунной толерантности, включающей в себя большое количество механизмов, в том числе продукцию цитокинов, интерлейкинов и факторов роста [5, 6]. Описаны изменения некоторых иммунных клеток, таких как нейтрофилы, макрофаги, NK-клетки и T- и B-клетки, тесно связанные с развитием эндометриоза, и как следствие реакция интерлейкинов и сдвиги экспрессии их рецепторов, что отражается на секреторных функциях эндометрия, ассоциированных с субфертильностью и бесплодием [7].
Субклиническое воспаление в тканях эндометрия протекает, как правило, локально, что определяет сложность выявления патогенетических факторов, низкую информативность и чувствительность традиционных методов лабораторной диагностики — исследования системного цитокинового профиля. Определение уровня специфических цитокинов и интерлейкинов может рассматриваться в качестве прогностических биомаркеров имплантации перед переносом эмбриона [8]. В преодолении инфекционного фактора в генезе имплантационных неудач современная терапия, направленная на элиминацию патогенов, далеко не всегда приводит к желаемому результату, и это означает необходимость новых подходов. Неудачи имплантации, вызванные иммунологическими факторами, можно контролировать с помощью инновационных методов лечения. Среди них внутриматочное введение аутологичных мононуклеарных клеток периферической крови [9]. Таким образом, иммуномодуляция эндометрия представляется как инновационный метод лечения для предотвращения повторных неудач имплантации при ВРТ.
Цель исследования — определить локальный цитокиновый профиль эндометрия у пациенток с многократными неудачными попытками ВРТ и эффективность его коррекции раствором лиофилизата секретома мононуклеаров периферической крови путем внутриматочной перфузии.
Дизайн исследования. С мая 2022 по сентябрь 2024 г. включительно проведено проспективное наблюдательное исследование по оценке локального цитокинового профиля до и после внутриматочного введения лиофилизата секретома мононуклеаров периферической крови в лечении пациенток с повторными неудачами имплантации в протоколах ВРТ. В исследование включено 55 пациенток в возрасте от 29 до 47 лет с наличием бесплодия в анамнезе более 5 лет и многократными неудачами ВРТ. Пациентки распределены в 2 группы. Основную группу составили женщины, у которых наступила беременность (беременность «+»), группу сравнения — женщины, у которых беременность в результате лечения не наступила (беременность «–»). После лечения у 14 человек повторно определен локальный цитокиновый профиль эндометрия.
Способ введения исследуемого препарата. Все женщины получали 10 внутриматочных введений лиофилизата секретома мононуклеаров периферической крови 1 раз в 3—5 дней за исключением периода менструации, в течение которого препарат не вводили. Перед введением разводили 2 официнальных флакона лиофилизата секретома мононуклеаров периферической крови (препарат Суперлимф) в дозе 200 мг в 1,0 мл воды для инъекций или в 1,0 мл физиологического раствора. Введение изготовленного раствора выполняли с помощью тонкого внутриматочного атравматичного катетера.
Критерии эффективности. Критериями эффективности проводимой терапии было наступление беременности в протоколе ВРТ или в протоколе переноса размороженных эмбрионов, а также наличие спонтанной беременности, зарегистрированной в течение 3—6 месяцев после прекращения введения исследуемого препарата в полость матки.
Описание исследования. До начала терапии у всех пациенток на 19—21-й день менструального цикла во время проведения гинекологического осмотра выполняли забор эндометрия с помощью атравматичного зонда. Часть полученного материала, предназначенного для оценки микробиоценоза с обнаружением возбудителей инфекций, передаваемых половым путем, и вирусов, помещали в транспортную среду с муколитиком (ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, Россия). Другую часть биоматериала, необходимого для оценки профиля экспрессии мРНК генов иммунного ответа с применением теста ИммуноКвантэкс во избежание деградации РНК помещали в среду для стабилизации РНК в биопробах (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).
Для выделения ДНК из материала использовали комплект реагентов «ДНК-сорб-АМ» (ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, Россия). Для определения мРНК генов врожденного иммунитета проводили выделение нуклеиновых кислот с использованием набора «Проба-НК» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия) с дальнейшим проведением реакции обратной транскрипции. Для постановки реакции использовали детектирующие амплификаторы DTprime 5 (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).
Молекулярно-биологическое исследование микробиоты полости матки проводили с использованием тестов Фемофлор-16, ГерпесКомлекс, Квант 21, ХЛАМИ-ГЕН, ГОНО-ГЕН, EBV и HHV6 (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). С помощью теста Фемофлор-16 определяли тотальную концентрацию бактериальной ДНК и концентрацию (абсолютную и относительную) следующих видов/родов микроорганизмов: Lactobacilluss pp., семейство Enterobacteriaceae, Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Eubacterium spp., Sneathia spp./Leptotrichia spp./Fusobacterium spp., Megasphaera spp./Veillonella spp./Dialister spp., Lachnobacterium spp./Clostridium spp., Mobiluncus spp./Corynebacterium spp., Peptostreptococcus spp., Atopobium vaginae. Кроме того, оценивали абсолютную концентрацию Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp., Candida spp. и наличие/отсутствие Mycoplasma genitalium. Используя наборы реагентов ХЛАМИ-ГЕН, ГОНО-ГЕН, EBV и HHV6, определяли патогенные микроорганизмы (Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae) и репродуктивно-значимые вирусы: вирус герпеса человека 6-го типа (HHV-6A), вирус Эпштейна—Барр (EBV). Используя мультиплексный тест «ГерпесКомплекс», определяли вирусы цитомегалии (CMV) и простого герпеса 1-го и 2-го типа (HSV1/2). Тест-система Квант 21 позволяла идентифицировать ВПЧ высокого (16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82-й типы) и низкого (6, 11, 44-й типы) онкогенного риска.
Исследование уровней экспрессии мРНК генов врожденного иммунитета (IL-1B, IL-10, IL-18, TNF-α, TLR4, GATA3, CD68, B2M) с проведением объективной диагностики воспалительного процесса выполняли с помощью тест-системы ИммуноКвантэкс, позволяющей интегрально оценить уровень мРНК цитокинов и получить заключение о наличии локальной воспалительной реакции на основании автоматического расчета Индекса воспаления.
Статистический анализ. Проведено описание групп, а также сравнение частотных признаков между подгруппами по исходу беременности, выполнен анализ данных двух зависимых выборок до и после лечения. Качественные признаки представлены в виде абсолютных (количество) и относительных (доля/частота, в %) данных, количественные — в зависимости от варианта распределения признака в виде среднего значения и среднеквадратичного отклонения μ±SD (нормальное распределение) или в виде медианы с границами 25% и 75%-го перцентиля (отличное от нормального распределение). С учетом небольшой выборки вариант распределения признака в группе определяли критерии Андерсона—Дарлинга, Шапиро—Уилка. Значимость различий в подгруппах в зависимости от наступления беременности проверяли с учетом варианта распределения данных с использованием t-теста Стьюдента или U-критерия Манна—Уитни соответственно. Соотношение частот качественных признаков в подгруппах сравнивали с помощью теста хи-квадрат (χ2) Пирсона. Сравнение двух зависимых выборок проведено с использованием критерия t-Стьюдента и критерия Вилкоксона в зависимости от варианта распределения. Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы (об отсутствии значимых различий или факторных влияний) принимали равным 0,05.
Этические правила и нормы. Исследование выполнено в полном соответствии с принципами Хельсинкской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы научных и медицинских исследований с участием человека», действующими порядками и стандартами оказания медицинской помощи, а также другими регуляторными требованиями к проведению клинических исследований и наблюдательных программ в Российской Федерации. При соотношении пользы и рисков от режима внутриматочного введения исследуемого препарата учитывалась совокупная польза для участниц исследования с длительным бесплодием, заключающаяся в комплексной диагностике микробиоты полости матки, расчете индекса воспаления высокоинформативными методами, а также в ранее продемонстрированной эффективности внутриматочных инфузий лиофилизатом секретома мононуклеаров периферической крови в контексте наступления клинической беременности у пациенток с бесплодием и повторными неудачами имплантации.
В процессе проспективного наблюдения за 55 пациентками 31 (56,36%) женщина вступила в протоколы ВРТ, из которых 29 (93,54%) пациенткам перенесены размороженные эмбрионы. За период наблюдения, пока 24 (43,64%) пациентки ожидали вступления в протокол, в данной подгруппе диагностировано 11 (45,83%) случаев спонтанной беременности. Данные о частоте наступления беременности у женщин с длительным бесплодием представлены в табл. 1.
Таблица 1. Частота наступления беременности у пациенток, получивших комплексную терапию
| Показатель | Количество пациенток, n (%) | Наступление беременности, n (%) |
| Протокол ЭКО | 2 (6,4) | 2 (6,67) |
| Протокол переноса размороженных эмбрионов | 29 (93,5) | 18 (60) |
| Итого: | ||
| вступили в протокол ВРТ | 31 (56,36) | 20 (64,5) |
| ожидание протокола ВРТ, из них спонтанная беременность | 24 (43,64) | 11 (35,48) |
| Всего 55 (100) | 31 (56,36) |
Примечание. ЭКО — экстракорпоральное оплодотворение; ВРТ — вспомогательные репродуктивные технологии.
Как видно из данных, приведенных в табл. 1, у 2 (100%) пациенток, которым выполнен протокол ЭКО, наступила беременность, а из 29 женщин, которым выполнен перенос размороженных эмбрионов, беременность наступила у 18 (60%). Таким образом, беременность наступила у 20 женщин в результате процедуры ВРТ и у 11 спонтанно, что составило 31/55 (56,36%).
В результате сформированы 2 группы женщин: основная группа — 31 женщина, у которых наступила беременность (беременность «+»), и группа сравнения — 24 женщины, у которых беременность не наступила (беременность «–»). В табл. 2 представлены данные пациенток двух групп.
Таблица 2. Клинико-анамнестические данные пациенток обследуемых групп
| Показатель | Все пациентки (n=55) | Беременность «+» (n=31) | Беременность «–» (n=24) |
| Возраст, лет | |||
| средний [минимум; максимум] | 37,03±0,63 (4,52)* [29—47] | 37,85±0,99 (5,13) [29—47] | 36,16±0,99 (3,66) [30—42] |
| Me [Q25; Q75] | 36 [34; 40] | 38 [34; 42] | 35 [33,5; 40] |
| A-критерий (p) | 0,919 (0,018) | 0,505 (0,186) | 0,948 (0,014) |
| Длительность бесплодия, лет | |||
| средняя [минимум; максимум] | 8,35±0,34 (6,03) [5—16] | 8,37±0,57 (8,7) [5—16] | 8,32±0,37 (3,39) [5—12] |
| Me [Q25; Q75] | 8 [7; 10] | 7 [6; 10] | 8 [7; 10] |
| A-критерий (p) | 1,286 (0,002) | 1,286 (0,002) | 1,286 (0,002) |
| Социальный статус | |||
| замужем | 44 (80) | 27 (87,1) | 17 (70,83) |
| не замужем (постоянный партнер) | 11 (20) | 4 (12,9) | 7 (29,17) |
| Репродуктивный возраст | |||
| Пациентки раннего репродуктивного возраста | 9 (16,36) | 6 (19,35) | 3 (12,5) |
| Пациентки позднего репродуктивного возраста | 46 (83,64) | 25 (80,65) | 21 (87,5) |
Примечание. * — средние значения представлены в виде μ±SE (SD), где SE — стандартная ошибка среднего, SD — стандартное отклонение.
Как видно из данных, приведенных в табл. 2, все женщины были сопоставимы по возрасту, длительности бесплодия, социальному статусу, независимо от результата: наступления или отсутствия беременности в течение периода наблюдения.
Динамическое наблюдение за пациентками после завершения лечения, согласно протоколу, продолжалось от 8 до 57 недель.
Изучение гинекологического анамнеза пациенток с повторными неудачами имплантации показало отсутствие существенных различий по гинекологическим заболеваниям и оперативным вмешательствам у пациенток обеих групп. Данные анамнеза представлены в табл. 3.
Таблица 3. Гинекологический анамнез пациенток с повторными неудачами имплантации
| Показатель | Все пациентки (n=55) | Беременность «+» (n=31) | Беременность «–» (n=24) | χ2* |
| Критерии включения в исследование | ||||
| Неразвивающаяся беременность | 23 (41,8) | 9 (29,03) | 14 (58,3) | 4,773 |
| Неудачные попытки ЭКО | 32 (58,2) | 22 (79,97) | 10 (41,67) | 4,773 |
| Гинекологический анамнез | ||||
| Трубно-перитонеальная форма бесплодия | 17 (30,9) | 8 (25,83) | 9 (37,5) | 0,866 |
| Хронический эндометрит | 31 (56,5) | 20 (64,5) | 11 (45,83) | 1,920 |
| Миома матки | 7 (12,6) | 3 (9,67) | 4 (16,67) | 0,595 |
| Оперативные вмешательства в анамнезе | ||||
| Тубэктомия по поводу эктопической беременности | 7 (12,72) | 3 (9,67) | 4 (16,67) | 0,595 |
| Тубэктомия по поводу гидросальпингса | 9 (16,36) | 6 (19,35) | 3 (12,5) | 0,464 |
| Гистероскопия и/или гистерорезектоскопия полипа эндометрия | 19 (34,55) | 7 (22,58) | 12 (50) | 4,498 |
| Выскабливание полости матки: удаление плодного яйца по поводу неразвивающейся беременности или самопроизвольного выкидыша | 15 (27,28) | 7 (22,58) | 8 (33,63) | 0,789 |
| Миомэктомия | 5 (9,09) | 4 (12,9) | 1 (4,16) | 1,249 |
Примечание. * — сравнение частотных признаков в подгруппах. ЭКО — экстракорпоральное оплодотворение.
При анализе микробиоты эндометрия установлено, что наиболее часто у женщин с бесплодием идентифицировались Lactobacillus spp. (n=44; 84,62%), Staphylococcus spp. (n=38; 73,1%), Atopobium vaginae (n=8; 15,38%), Eubacterium (n=7; 13,46%), Candida spp. (n=6; 11,54%). Доля остальных идентифицируемых микроорганизмов не превышала 5,77%. При последующем сравнении подгрупп в зависимости от наступления беременности значимых различий по микробному пейзажу полости матки не было.
При анализе вирусных агентов, обнаруженных в полости матки, выявлено 8 разных типов вируса папилломы человека (ВПЧ) у 12 пациенток, у 2 пациенток выявлен вирус герпеса 6-го типа, у 1 пациентки — вирус простого герпеса 1-го типа, в 2 случаях — цитомегаловирус и в 1 случае — вирус Эпштейна—Барр.
В результате анализа микробиоты эндометрия пациенткам с длительным бесплодием и при выявлении комменсальных микоплазм в эндометрии, кроме лиофилизата секретома мононуклеаров периферической крови, назначен доксициклина моногидрат в дозе 100 мг 2 раза в сутки 10 дней. При выявлении Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas и/или Fannyhessea vaginae (Atopobium vaginae) назначен моксифлоксацин по 400 мг 1 раз в сутки 10 дней. Пациентки, у которых обнаружены вирусы семейства Herpesviridae, получали валацикловир в дозе 500 мг 1 раз в сутки до момента наступления беременности. В табл. 4 представлены показатели локального цитокинового профиля эндометрия пациенток с бесплодием.
Таблица 4. Локальный цитокиновый профиль эндометрия пациенток обследуемых групп
| Показатель | Беременность «+» | Беременность «–» | Z | p |
| Индекс воспаления, % | 92,42±3,03 (17,6) | 89,66±3,9 (17,35) | –0,678 | 0,498 |
| 97,9 [86,1; 98,74]# | 97,7 [81,3; 98,03]# | |||
| IL-10 | 2,36±0,15 (0,7) | 2,29±0,11 (0,51) | –0,845 | 0,398 |
| 2,4 [2,03; 2,69]# | 2,3 [2,04; 2,54] | |||
| IL-18 | 3,45±0,108 (0,49) | 3,52±0,12 (0,53) | –0,205 | 0,851 |
| 3,5 [3,23; 3,68]# | 3,6 [3,26; 3,77] | |||
| TNF-α | 3,17±0,12 (0,55) | 3,16±0,10 (0,46) | –0,683 | 0,495 |
| 3,4 [2,9; 3,4]# | 3,2 [2,94; 3,38] | |||
| TL4 | 3,53±0,13 (0,63) | 3,53±0,13 (0,63) | –0,272 | 0,786 |
| 3,8 [3,25; 3,82] | 3,8 [3,25; 3,82]# | |||
| GATA3 | 3,09±0,09 (0,44) | 3,13±0,13 (0,58) | –0,123 | 0,902 |
| 3,2 [2,89; 3,29]# | 3,2 [2,85; 3,4]# | |||
| CD68 | 4,49±0,1 (0,46) | 4,43±0,1 (0,49) | –1,116 | 0,264 |
| 4,5 [4,2; 4,7]# | 4,4 [4,2; 4,65]# | |||
| TL4/GATA3 | 6,66±3,14 (14,4) | 4,47±1,5 (6,62) | –0,651 | 0,515 |
| 3,7 [0,1;13,2]# | 2,5 [1,28; 7,66]# | |||
| TNF-α/IL18 | 0,71±0,09 (0,43) | 0,49±0,06 (0,29) | –1,343 | 0,179 |
| 0,35 [0,47; 0,86]# | 0,41 [0,35; 0,63] | |||
| IL-10/IL18 | 144,73±53,45 (244,94) | 82,81±20,62 (89,9) | –0,474 | 0,635 |
| 82,5 [33,24; 256,23]# | 58,3 [39,47; 126,15]# | |||
| IL-1B/CD68 | 0,89±0,33 (1,5) | 3,93±3,41 (14,5) | –0,339 | 0,735 |
| 0,25 [0,2; 1,5]# | 0,28 [3,27;11,14]# | |||
| IL-1B | 4,04±0,16 (0,73) | 3,8±0,15 (0,67) | 0,705 | 0,242 |
| 4 [3,7; 4,3] | 3,7[3,56; 4,21] |
Примечание.* — средние значения представлены в виде μ±SE (SD), где SE — стандартная ошибка среднего; SD — стандартное отклонение; # — распределение признака, отличное от нормального.
При анализе уровней экспрессии м-РНК генов врожденного иммунитета не установлены статистически значимые различия в подгруппах пациенток в зависимости от наступления беременности. У 14 пациенток с бесплодием в анамнезе проведен анализ экспрессии генов врожденного иммунитета до и после лечения. В табл. 5 представлен локальный цитокиновый профиль эндометрия пациенток с длительным бесплодием в анамнезе до и после лечения.
Таблица 5. Локальный цитокиновый профиль эндометрия пациенток с длительным бесплодием до и после комплексной терапии
| Показатель | До лечения (n=14) | После лечения (n=14) | Z | p |
| Индекс воспаления, % | 87,79±4,72 (17,6) | 79±6,8 (25,4) | –1,538 | 0,124 |
| 90,37 [77,58; 98,003]# | 84 [64,3; 93,6]# | |||
| IL-10 | 2,11±0,14 (0,51) | 2±0,24 (0,94) | –0,623 | 0,533 |
| 2,1 [1,78; 2,44] | 2,45 [1,46; 2,53]# | |||
| TNF-α | 2,72±0,18 (0,7) | 3,15±0,14 (0,54) | –1,433 | 0,152 |
| 2,85 [2,3; 3,12] | 3,25 [2,84; 3,47]# | |||
| TL4 | 2,72±0,18 (0,7) | 3,56±0,2 (0,78) | –1,189 | 0,234 |
| 2,85 [2,3; 3,12] | 3,7 [3,1; 4]# | |||
| GATA3 | 2,77±0,16 (0,6) | 3,08±0,14 (0,55) | –1,1 | 0,271 |
| 2,8 [2,42; 3,13] | 3,25 [2,76; 3,4]# | |||
| CD68 | 4,08±0,16 (0,6) | 4,3±0,21 (0,79) | –0,723 | 0,470 |
| 4,1 [3,73; 4,43] | 4,6 [3,83; 4,76]# | |||
| TL4/GATA3 | 5,38±2,32 (8,7) | 7±2,41 (9,05) | –1,475 | 0,140 |
| 2,75 [0,35; 10,4]# | 4,3 [1,77; 12,23]# | |||
| TNF-α/IL-18 | 0,4±0,059 (0,22) | 0,26±0,04 (0,15) | –1,852 | 0,064 |
| 0,35 [0,27; 0,52]# | 0,24 [0,18; 0,35] | |||
| IL-10/IL-18 | 91,09±32,14 (120,28) | 30,6±9,33 (34,9) | –2,166 | 0,030 |
| 26,45 [21,64; 160,54]# | 16,7 [10,45; 50,77]# | |||
| IL-1B/CD68 | 0,599±0,21 (0,78) | 8,01±5,32 (19,91) | –0,565 | 0,572 |
| 0,19 [0,14; 1,05] | 0,18 [3,48;19,5]# | |||
| IL-1B | 3,49±0,19 (0,72) | 3,73±0,16 (0,6) | –0,839 | 0,417 |
| 3,3 [3,07; 3,9] | 3,65 [3,38; 4,08] | |||
| IL-18 | 3,15±0,18 (0,49) | 3,77±0,13 (0,51) | –2,360 | 0,035 |
| 3,3 [2,747; 3,5] | 3,8 [3,47; 4,07] |
Примечание.* — средние значения представлены в виде μ±SE (SD), где SE — стандартная ошибка среднего; SD — стандартное отклонение; # — распределение признака, отличное от нормального.
При анализе соотношений экспрессии генов врожденного иммунитета установлены значимые различия между показателями IL-18 и профилем IL-10/IL-18. Уровень IL-18 после лечения стал существенно выше по сравнению с показателем до лечения, что составило 3,8 [3,47; 4,07] и 3,3 [2,747; 3,5] соответственно, p<0,05. А соотношение IL-10/IL-18 до лечения составило 26,45 [21,64; 160,54], что выше по сравнению с показателем после лечения — 16,7 [10,45; 50,77], p<0,05.
Имплантация — это процесс, включающий в себя развитие, прикрепление и инвазию бластоцисты в эндометрий. Успех имплантации зависит от надлежащего взаимодействия эмбриона и эндометриальной ткани. Для достижения иммунной толерантности во время беременности важно наличие баланса между уровнями провоспалительных и противовоспалительных цитокинов.
В нашем исследовании при проведении контрольного анализа локального цитокинового профиля эндометрия у пациенток после комплексной терапии с внутриматочным введением аутологичных мононуклеарных клеток периферической крови отмечено увеличение уровня экспрессии IL-18, который после лечения оказался выше по сравнению с показателем до лечения, что составило 3,8 [3,47; 4,07] и 3,3 [2,747; 3,5] соответственно (p<0,05). Q. Luo и соавт. (2006) отметили увеличение экспрессии IL-18 в секреторную фазу в эндометрии здоровых женщин при сравнении с женщинами с эндометриозом [10]. Показано, что IL-18 может обеспечивать защиту от патогенных микроорганизмов и модулировать локальную сеть цитокинов для инвазии трофобласта [11]. По данным многих авторов, при взаимодействии бластоцисты и эндометрия доминирует продукция провоспалительных цитокинов, в основном IL-1, IL-2, IL-12, IL-15 и IL-18, и специфических факторов роста (фактор роста эндотелия сосудов VEGF, и фактор ингибирования лейкемии LIF), которые незаменимы на ранних стадиях имплантации. Далее для поддержания беременности иммунный профиль эндометрия регулируется противовоспалительными цитокинами Th2 (IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13 и GM-CSF) [12—15].
Результатом нашего исследования также стало изменение профиля противовоспалительных и провоспалительных цитокинов IL-10/IL-18. Этот показатель уменьшился после лечения: соотношение IL-10/IL-18 до лечения составляло 26,45 [21,64; 160,54], что выше по сравнению с показателем после лечения — 16,7 [10,45; 50,77], p<0,05.Полученный результат свидетельствует о значительном уменьшении выраженности воспалительного процесса в полости матки. Следует отметить, что нормально протекающая беременность, как правило, связана со снижением регуляции адаптационных процессов. Уже к моменту имплантации важна иммунологическая толерантность эндометрия, способного принять эмбрион. Сложно устроенная система защиты от отторжения плода является определенным регулирующим фактором в поддержании иммунологического баланса во время всего периода гестации [16].
В настоящее время описаны разные причины повторных неудач имплантации, которые в большинстве случаев связаны с совокупностью факторов, как микробных, так и иммунных. Предложено много вариантов лечения повторных неудач имплантации, имеющих неоднозначные результаты. В нашем исследовании после комплексной терапии лиофилизатом секретома мононуклеаров периферической крови (препарат Суперлимф) достигнут результат в виде повышения уровня экспрессии генов, кодирующих провоспалительный цитокин IL-18, который характерен для секреторной фазы, когда наблюдается максимальная толщина эндометрия. Нам также удалось добиться снижения выраженности воспалительной реакции эндометрия, о чем свидетельствует изменение профиля IL-10/IL-18. Данные показатели являются важными иммунологическими факторами, необходимыми для успешной имплантации.
Примененный нами препарат Суперлимф является иммуномодулятором, представляющим собой естественный комплекс природных противомикробных пептидов и цитокинов — универсальных стимуляторов иммунной системы, секретируемых лейкоцитами периферической крови свиньи. Обладает противовирусным, противомикробным и противогрибковым действием, стимулирует функциональную активность клеток фагоцитарного ряда (моноцитов и нейтрофилов): активирует фагоцитоз, выработку цитокинов (IL-1, TNF-α), индуцирует противоопухолевую цитотоксичность макрофагов, регулирует миграцию клеток в очаг воспаления, увеличивает активность естественных киллеров. Препарат обладает антиоксидантной активностью, снижает развитие воспалительных реакций, стимулирует регенерацию и эпителизацию. Нами уже описан успешный опыт применения естественного комплекса природных противомикробных пептидов и цитокинов (препарат Суперлимф) в комплексном лечении хронического эндометрита у пациенток с бесплодием. Добавление к противомикробной терапии локальной цитокинотерапии привело к более высоким показателям элиминации микробных агентов из полости матки и статистически значимо снизило степень выраженности хронического эндометрита [17].
Внутриматочное введение секретома мононуклеаров периферической крови потенциально показало себя как хороший способ модуляции восприимчивости эндометрия. При анализе соотношений экспрессии генов врожденного иммунитета установлены статистически значимые различия между показателями IL-18 и профилем IL-10/IL-18. Уровень IL-18 после лечения стал существенно выше по сравнению с показателем до лечения. Показатель соотношения IL-10/IL-18 после проведенного лечения значительно снизился.
Таким образом, стратегия в области иммунотерапии нуждается в дальнейшем изучении для лучшего понимания иммунотолерантности эндометрия матери к имплантации эмбриона. Коррекция иммунологических нарушений при имплантации эмбриона путем внутриматочного введения мононуклеаров периферической крови представляется многообещающим решением при повторных неудачах имплантации.
Финансирование. Исследование выполнено в рамках ПНИ № 1024062500021-3-3.2.2 (FGWN-2024-0020).
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Литература / References:
Подтверждение e-mail
На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.
Подтверждение e-mail
Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.
