Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Зорина Р.М.

НИЛ иммунохимии Новокузнецкого государственного института усовершенствования врачей

Маркина Л.А.

Городская клиническая больница №1, Новокузнецк

Зорина В.Н.

НИЛ иммунохимии Новокузнецкого государственного института усовершенствования врачей

Баженова Л.Г.

Кафедра акушерства и гинекологии

Чирикова Т.С.

НИЛ иммунологии Новокузнецкого государственного института усовершенствования врачей

Зорин Н.А.

НИЛ иммунохимии Новокузнецкого государственного института усовершенствования врачей

Некоторые острофазовые белки и цитокины в сыворотке крови у женщин с бесплодием воспалительного генеза при проведении программ экстракорпорального оплодотворения

Авторы:

Зорина Р.М., Маркина Л.А., Зорина В.Н., Баженова Л.Г., Чирикова Т.С., Зорин Н.А.

Подробнее об авторах

Журнал: Российский вестник акушера-гинеколога. 2010;10(4): 13‑16

Просмотров: 363

Загрузок: 5

Как цитировать:

Зорина Р.М., Маркина Л.А., Зорина В.Н., Баженова Л.Г., Чирикова Т.С., Зорин Н.А. Некоторые острофазовые белки и цитокины в сыворотке крови у женщин с бесплодием воспалительного генеза при проведении программ экстракорпорального оплодотворения. Российский вестник акушера-гинеколога. 2010;10(4):13‑16.
Zorina RM, Markina LA, Zorina VN, Bazhenova LG, Chirikova TS, Zorin NA. Some acute-phase proteins and cytokines in the serum of women with infertility of inflammatory genesis in the implementation of in vitro fertilization programs. Russian Bulletin of Obstetrician-Gynecologist. 2010;10(4):13‑16. (In Russ.).

?>

Трубно-перитонеальное бесплодие воспалительного генеза у женщин занимает ведущее место в структуре бесплодного брака и является самой сложной патологией с точки зрения восстановления репродуктивной функции [4]. В последние 25 лет при ее лечении [5] успешно используют вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ), но порог эффективности проводимых программ экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО и ПЭ) не превышает 35-40% [3]. Наряду с совершенствованием методик ВРТ эффективность программ ЭКО можно повысить путем улучшения диагностики и коррекции выявляемых патологических изменений у женщин до начала использования программы. Однако результаты подобных исследований пока немногочисленны и противоречивы. Так, по мнению одних авторов, плохое качество овоцитов и отрицательный результат программы сопровождаются повышенными сывороточными уровнями фактора некроза опухолей альфа (ФНО-α), интерферона гамма (ИФН-γ), интерлейкина-1 (ИЛ-1β) и интерлейкина-6 (ИЛ-6) [6, 7, 10]. По данным других - плохое качество овоцитов ассоциируется с низким уровнем ИЛ-1β в крови [8]. В фолликулярной жидкости женщин, у которых программы оказались нерезультативными, были обнаружены высокие уровни α2-макроглобулина (МГ), α1-антитрипсина, трансферрина, компонента С-3 комплемента и церулоплазмина. Однако другие исследователи показали, что степень зрелости овоцитов и успешное оплодотворение коррелируют с повышенным уровнем в фолликулярной жидкости МГ, α1-антитрипсина, а также фибриногена, фибронектина, плазмина и лактоферрина [11].

Таким образом, целью нашего исследования был поиск новых диагностических и прогностических критериев, позволяющих улучшить эффективность применения программ ЭКО и ПЭ, а также уточнить влияние изменений в уровнях сывороточных цитокинов и некоторых других маркеров воспалительной реакции на исход программ.

Материал и методы исследования

В исследовании приняли участие 25 женщин репродуктивного возраста (30,6±0,5 года) с верифицированным диагнозом трубно-перитонеального бесплодия. Причиной бесплодия являлись перенесенные воспалительные заболевания органов малого таза (сальпингоофорит, эндометрит - у 16 женщин, пельвиоперитонит - у 5 и тубоовариальный абсцесс - у 4), с манифестацией обострения воспаления за 2-5 лет до начала применения программ, при этом на момент проведения программ клинические проявления воспалительного процесса отсутствовали. Критериями включения в исследование, помимо наличия трубно-перитонеального бесплодия воспалительного генеза, верифицированного при помощи гистеросальпингографии и/или лапароскопии, были возраст не старше 42 лет, первая попытка ЭКО, применение для обеспечения фазы десенситизации агонистов гонадотропин-рилизинг гормона, достаточный ответ яичников на индукцию суперовуляции (не менее 4 фолликулов). При анализе результатов учитывались эффективность проведенных программ (у 15 из 25 женщин беременность не наступила), а также срок давности перенесенного обострения воспалительного процесса в органах малого таза. В качестве контрольной группы обследованы 40 практически здоровых женщин, включенных в исследование по результатам диспансеризации.

Забор образцов крови производился после стандартного клинико-лабораторного обследования до включения в программу. В полученной из образцов сыворотке изучались уровни двух белков семейства макроглобулинов - МГ и ассоциированного с беременностью α2-гликопротеина (АБГ), являющихся не только белками зоны беременности, но и маркерами воспаления (МГ), а также маркерами пролиферации (АБГ и, в меньшей степени, МГ) методом ракетного иммуноэлектрофореза [1]. Кроме того, было изучено содержание традиционных маркеров воспаления - альбумина (Алб) и общего белка (ОБ) классическими биохимическими методами с использованием специальных наборов, а также были исследованы концентрации менее изученных позитивных острофазовых реактантов - α1-антитрипсина (АТр) и лактоферрина (ЛФ) методами ракетного иммуноэлектрофореза [1] и твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) соответственно. Уровни провоспалительных ИЛ-1β, ФНО-α, иммунорегуляторного ИЛ-6 и противовоспалительного ИФН-γ оценивались, как и содержание ЛФ, с использованием тест-систем методом ИФА. Кроме того, были изучены уровни специфических иммунокомплексов МГ-IgG и ЛФ-IgG при помощи ИФА с модификациями [2]. Концентрацию IgG определяли методом иммунотурбодиметрии с использованием специальных наборов.

Статистический анализ полученных данных выполнен в центре Биостатистика (Томск) с помощью статистических пакетов SAS 9 и SPSS-16. Критическое значение уровня значимости при проверке нулевых гипотез равно 0,05. Парное межгрупповое сравнение показателей производилось по критерию параметрического дисперсионного анализа, а в отсутствие нормальности распределения признаков использовались непараметрические критерии Крускала-Уоллиса и Ван дер Вардена. Для оценки взаимосвязи между результирующей качественной переменной и набором качественных и количественных предикторов использовался метод логистической регрессии. Взаимосвязь между парами качественных признаков изучалась с помощью анализа таблиц сопряженности.

Результаты исследования

В результате проведенного исследования мы выявили, что у женщин, планирующих лечение методом ЭКО, еще до включения в программу среднестатистические уровни ОБ и Алб были значительно выше, чем в группе здоровых небеременных женщин (см. таблицу).

При этом концентрации обоих маркеров воспаления не зависели от характера перенесенного воспалительного заболевания гениталий. Кроме того, уровень Алб не зависел от срока давности последнего обострения, тогда как содержание ОБ у женщин с давностью обострения воспалительного процесса менее 3 лет было достоверно выше, чем у женщин, давность обострения у которых до включения в программу была более 5 лет (82,58±2,22 и 75,94±2,63 г/л соответственно; р<0,0001).

Средний уровень ЛФ у женщин до включения в программу был статистически значимо выше, чем у здоровых небеременных, и не зависел от характера перенесенного воспалительного заболевания органов малого таза. При этом уровни данного белка в сыворотке крови женщин с обострением воспалительного процесса, перенесенным менее 3 лет назад, были значительно выше, чем у женщин с давностью обострения заболевания более 5 лет (1,83±0,22 и 1,21±0,36 мг/л соответственно; р=0,023).

Сывороточная концентрация АТр у женщин - участниц программы ЭКО до начала ее проведения была статистически значимо выше, чем у здоровых небеременных женщин, и не зависела от характера воспалительного процесса и срока давности его последнего обострения.

Содержание МГ и АБГ было сопоставимым в группах обследованных и не зависело от характера и давности последнего обострения воспаления.

Уровни провоспалительного ИЛ-1β и иммунорегуляторного ИЛ-6 демонстрировали значительную индивидуальную вариабельность в группе пациенток, участвующих в программе ЭКО и ПЭ, что не позволило нам выявить статистически значимых отличий от уровней, характерных для здоровых, несмотря на достаточно высокие средние концентрации (см. таблицу). Напротив, сывороточные уровни провоспалительного ФНО-α и противовоспалительного ИФН-γ были статистически значимо повышены в группе женщин с трубно-перитонеальным бесплодием по сравнению с таковыми у здоровых небеременных женщин. Зависимости изменений уровней всех изученных цитокинов от характера перенесенного воспаления, срока давности его обострения и результативности программ не выявлено.

При изучении содержания специфических иммунокомплексов (ЛФ-IgG и МГ-IgG) показано, что их концентрация у пациенток до включения в программу ЭКО и ПЭ была достоверно повышена по сравнению с таковой у здоровых небеременных женщин и не зависела от характера перенесенного воспалительного процесса. В то же время при давности перенесенного обострения воспалительного процесса более 3 лет содержание иммунокомплексов МГ-IgG было значительно ниже, чем в группе, где срок после обострения составлял менее 3 лет (0,66±0,15 и 1,01±0,095 мкг/мл соответственно; р=0,05) и было сопоставимо с показателями у здоровых небеременных женщин (р=0,003). Концентрации ЛФ-IgG от срока давности обострения воспаления не зависели.

При этом общий уровень сывороточного IgG у здоровых женщин и пациенток, включенных в программу, не различался и не зависел от характера и срока давности перенесенного воспаления, послужившего причиной бесплодия.

При использовании метода логистической регрессии удалось показать, что среди всех изученных показателей у женщин, обследованных до участия в программе ЭКО и ПЭ, только сывороточные концентрации ЛФ были связаны с результативностью проведенных программ: в программах с наступившей беременностью уровень ЛФ составил 1,28±0,22 мг/л; а в программах, где беременность не наступила, - 2,06±0,20 мг/л (р=0,013).

Обсуждение результатов

Повышенные сывороточные уровни ЛФ, АТр и ФНО-α у пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием воспалительного генеза еще до включения их в программу ЭКО могут свидетельствовать о наличии скрытого (вялотекущего) воспалительного процесса в женских половых органах, достаточно выраженного, чтобы повлиять на уровни высокочувствительного ЛФ и склонного к постепенному накоплению при длительном процессе АТр, но недостаточного для того, чтобы спровоцировать диагностируемые клинические проявления заболевания. Однако другие выявленные изменения свидетельствуют не только о наличии воспалительного процесса, но и дисбалансе синтеза ряда сывороточных показателей у женщин, страдающих трубно-перитонеальным бесплодием воспалительного генеза. Так, повышение концентраций классического провоспалительного ФНО-α сопровождалось увеличением содержания противовоспалительного ИФН-γ, а уровни ИЛ-1β и ИЛ-6 демонстрировали столь выраженную индивидуальную вариабельность, что, несмотря на явную тенденцию к повышению, их содержание в среднем не отличалось от такового у здоровых. Кроме того, наблюдалось накопление ОБ и Алб в сыворотки крови, хотя при выраженном воспалении их уровни должны снижаться. Данные парадоксальные реакции вполне могут быть последствием нарушения структуры и функций регуляторно-транспортных белков. К их числу относятся белки семейства макроглобулинов, в первую очередь, МГ [2], являющийся признанным универсальным регулятором межклеточных взаимодействий посредством активного транспорта цитокинов к клеткам-мишеням. Помимо семейства макроглобулинов, в транспорте и утилизации многих регуляторных субстанций участвуют Алб и ЛФ. Известно, что МГ и в меньшей степени АБГ могут быть окислены продуктами воспалительной реакции, что нарушает их структурную целостность, сродство к цитокинам и клеточным рецепторам [9], и накопление данных окисленных белков в циркуляторном русле при активном либо очень длительном процессе способствует их превращению в иммуногенные субстанции [7]. О наличии подобного процесса свидетельствует повышение концентрации иммунных комплексов МГ-IgG и ЛФ-IgG в циркуляторном русле у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием на фоне неизмененного общего уровня IgG.

При этом в ряде случаев решающее значение имеет давность перенесенного обострения воспалительного процесса. Так, повышение содержания ОБ, ЛФ и иммунокомплексов МГ-IgG было значительно более выраженным у пациенток при давности обострения менее 3 лет, а при давности обострения более 3-5 лет перечисленные показатели практически не отличались от уровней, характерных для здоровых небеременных женщин.

В целом полученные данные позволяют предположить, что на момент включения в программу ЭКО не все женщины с трубно-перитонеальным бесплодием воспалительного генеза являются относительно здоровыми, что отражается на эффективности применения данного метода лечения. Особенно наглядно это проявляется в группе женщин, которые стали участницами программы ЭКО спустя менее 3 лет после обострения воспалительного процесса. По всей вероятности, сохраняются остаточные проявления воспалительных процессов, не регистрирующиеся обычными стандартными клиническими тестами, но приводящие к ряду патологических изменений: нарушению нормального функционирования регуляторно-транспортных белков и накоплению различных цитокинов и других регуляторных факторов роста в циркуляторном русле без реализации необходимых эффектов, что, в конечном итоге, негативно отражается на результативности программ ЭКО и ПЭ.

Выводы

1. Сывороточные концентрации ОБ, Алб, АТр, ЛФ, иммунокомплексов ЛФ-IgG и МГ-IgG, а также ФНО-α, γ-ИФН повышены в крови большинства женщин с трубно-перитонеальным бесплодием воспалительного генеза до включения их в программу ЭКО и ПЭ.

2. Максимально высокие концентрации ОБ, ЛФ, а также комплексов МГ-IgG в крови выявляются у женщин, перенесших воспалительные заболевания органов малого таза менее 3 лет назад.

3. Определение уровня сывороточного ЛФ у женщин до включения их в программу ЭКО и ПЭ может использоваться в качестве прогностического критерия результативности программы. Уровень ЛФ, не превышающий 1,3 мг/л, является благоприятным признаком и свидетельствует о высокой вероятности имплантации эмбриона.

4. Выявление в период подготовки к применению программы ЭКО сывороточных уровней ФНО-α более 1,0 пг/мл, ИФН-γ более 13,0 пг/мл, концентрации ЛФ более 1,3 мг/л, ОБ более 73 г/л, Алб более 47 г/л и АТр более 2,4 г/л является основанием для углубленного обследования пациентки и проведения курсов противовоспалительной и/или реабилитационной терапии до включения ее в программу ЭКО и ПЭ.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail