Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Кулакова Е.В.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова»

Драпкина Ю.С.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова»

Макарова Н.П.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России

Екимов А.Н.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова»

Калинина Е.А.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова»

Значение преимплантационного генетического тестирования на анеуплоидии в программах вспомогательных репродуктивных технологий

Авторы:

Кулакова Е.В., Драпкина Ю.С., Макарова Н.П., Екимов А.Н., Калинина Е.А.

Подробнее об авторах

Просмотров: 1160

Загрузок: 69


Как цитировать:

Кулакова Е.В., Драпкина Ю.С., Макарова Н.П., Екимов А.Н., Калинина Е.А. Значение преимплантационного генетического тестирования на анеуплоидии в программах вспомогательных репродуктивных технологий. Профилактическая медицина. 2022;25(2):7‑12.
Kulakova EV, Drapkina YuS, Makarova NP, Ekimov AN, Kalinina EA. Significance of preimplantation genetic testing for aneuploidy in assisted reproductive technology programs. Russian Journal of Preventive Medicine. 2022;25(2):7‑12. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/profmed2022250217

Рекомендуем статьи по данной теме:
Ме­ры пер­вич­ной про­фи­лак­ти­ки ко­ло­рек­таль­но­го ра­ка и тех­но­ло­гии их внед­ре­ния в прак­ти­чес­кое здра­во­ох­ра­не­ние. Про­фи­лак­ти­чес­кая ме­ди­ци­на. 2024;(6):111-117
Осо­бен­нос­ти ло­каль­ной экспрес­сии ге­нов мРНК про- и про­ти­во­вос­па­ли­тель­ных ци­то­ки­нов при до­но­шен­ной бе­ре­мен­нос­ти. Рос­сий­ский вес­тник аку­ше­ра-ги­не­ко­ло­га. 2024;(3):6-13
Проб­ле­ма са­хар­но­го ди­абе­та в аку­шерстве. Рос­сий­ский вес­тник аку­ше­ра-ги­не­ко­ло­га. 2024;(3):25-29
Вза­имос­вязь меж­ду бе­ре­мен­нос­тью и рис­ком раз­ви­тия зло­ка­чес­твен­ных но­во­об­ра­зо­ва­ний жен­ской реп­ро­дук­тив­ной сис­те­мы. Рос­сий­ский вес­тник аку­ше­ра-ги­не­ко­ло­га. 2024;(3):48-54
Оцен­ка эф­фек­тив­нос­ти ком­прес­си­он­ной те­ра­пии у бе­ре­мен­ных с ва­ри­коз­ной бо­лез­нью по­ло­вых ор­га­нов. Рос­сий­ский вес­тник аку­ше­ра-ги­не­ко­ло­га. 2024;(3):60-65
Опыт ком­би­ни­ро­ван­но­го ле­че­ния па­ци­ен­ток с бес­пло­ди­ем, опе­ри­ро­ван­ных по по­во­ду на­руж­но­го ге­ни­таль­но­го эн­до­мет­ри­оза. Рос­сий­ский вес­тник аку­ше­ра-ги­не­ко­ло­га. 2024;(3):77-81
Прог­но­зи­ро­ва­ние рис­ка сни­же­ния ова­ри­аль­но­го ре­зер­ва пос­ле хи­рур­ги­чес­ко­го ле­че­ния па­ци­ен­ток с глу­бо­ким ин­фильтра­тив­ным эн­до­мет­ри­озом с ис­поль­зо­ва­ни­ем ис­кусствен­но­го ин­тел­лек­та. Рос­сий­ский вес­тник аку­ше­ра-ги­не­ко­ло­га. 2024;(3):92-102
Кли­ни­чес­кое наб­лю­де­ние ус­пеш­ной бе­ре­мен­нос­ти и ро­дов при ги­гантской хо­риоан­ги­оме пла­цен­ты. Рос­сий­ский вес­тник аку­ше­ра-ги­не­ко­ло­га. 2024;(3):103-107
На­ру­ше­ния сна при бе­ре­мен­нос­ти. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. Спец­вы­пус­ки. 2024;(5-2):99-104
Вспо­мо­га­тель­ные реп­ро­дук­тив­ные тех­но­ло­гии и риск при­ра­ще­ния пла­цен­ты. Проб­ле­мы реп­ро­дук­ции. 2024;(3):43-49

Введение

В настоящее время в России одним из способов профилактики наследственных заболеваний считают медико-генетическое консультирование и скрининг, которые проводят в два этапа: пренатальный — во время беременности и неонатальный — в течение 28 дней после рождения ребенка. Пренатальный и неонатальный скрининги позволяют проводить мероприятия по вторичной профилактике различных наследственных заболеваний у плода или новорожденного. Развитие вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) с использованием преимплантационного генетического тестирования (ПГТ) с высокой степенью вероятности предоставляет возможность выбора наиболее перспективного/здорового эмбриона и может гарантировать супружеской паре благоприятный исход беременности. Это приводит к значительному прогрессу в лечении различных форм бесплодия, повышает востребованность ВРТ и способствует первичной профилактике различных генетически обусловленных заболеваний [1].

В зависимости от целей определения генетических нарушений у эмбриона выполняют следующие тесты: ПГТ-А, ПГТ-М и ПГТ-СП. Проведение ПГТ-А эмбриона позволяет определить анеуплоидию или нарушения в количественном наборе хромосом, ПГТ-М — нарушения и мутации в последовательности ДНК одного гена и ПГТ-СП — структурные аномалии одной или нескольких хромосом [2]. Учитывая, что анеуплоидии являются самыми распространенными вариантами хромосомных аномалий у эмбриона и основной причиной потери плода во время беременности, во многих центрах медико-генетического тестирования в подавляющем большинстве случаев проводят исследование ПГТ-А [3].

Согласно данным прогностической математической модели проведение ПГТ-А эмбриона в рамках программ ВРТ может предотвратить до 45% рождений детей с хромосомными нарушениями [4]. В то же время результаты проводимых среди женщин циклов экстракорпорального оплодотворения/интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в ооцит (ЭКО/ИКСИ) и ПГТ-А у эмбриона могут варьировать и зависеть от возраста, причин бесплодия и данных анамнеза супружеской пары, проходящей лечение бесплодия методом ЭКО [5]. В утвержденных клинических рекомендациях по диагностике и лечению бесплодия, опубликованных в 2019 г., проведение ПГТ-А у эмбриона рекомендовано в следующих клинических ситуациях [6]:

— женщинам старшего репродуктивного возраста (37 лет и старше);

— наличие двух и более самопроизвольных прерываний беременности в анамнезе;

— повторные неудачные попытки переноса «свежих» или размороженных эмбрионов;

— тяжелые нарушения сперматогенеза у мужчин.

Несмотря на повышение стоимости программы ВРТ с применением ПГТ-А, опубликованы данные, которые свидетельствуют, что проведение биопсии трофэктодермы эмбриона с целью определения его хромосомного статуса может быть экономически выгодным [7—9]. Так, проведение ПГТ-А эмбриона у женщин старше 35 лет увеличивает частоту живорождения в 3 раза, при этом наибольшая эффективность теста отмечается в возрастной группе 36—39 лет [7]. Расчеты показывают, что 1% дополнительного живорождения позволяет сэкономить до 45% средств, затраченных на проведение всего протокола ЭКО/ИКСИ [8]. Имеются данные, что у женщин с привычными выкидышами в анамнезе проведение ПГТ-А повышает частоту живорождения в 2,4 раза, а у пациенток 30—39 лет с нормальным индексом массы тела (ИМТ не более 24 кг/м2) — до 5 раз [9]. Если бесплодием страдает мужчина, то при патозооспермии проведение ПГТ-А эмбриона супружеских пар по программе ВРТ повышает частоту наступления беременности в 5,7 раза и частоту живорождения в 3,8 раза [10]. Таким образом, для повышения эффективности программы ВРТ с использованием ПГТ-А эмбриона необходимо иметь детальное описание клинических данных супружеских пар, обращающихся для лечения бесплодия.

Цель исследования — оценить значение и возможности применения ПГТ-А у супружеских пар разных возрастных групп при лечении бесплодия методом ВРТ.

Материал и методы

Подготовка супружеских пар к комплексной процедуре ЭКО/ИКСИ+ПГТ-А

За период 2016—2021 гг. на базе отделения вспомогательных репродуктивных технологий в лечении бесплодия им. профессора Б.В. Леонова ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России женщинам в возрасте 22—46 лет выполнено 13 595 процедур ЭКО/ИКСИ и проведено 3092 ПГТ-А эмбрионов. Женщины были распределены на 3 возрастные группы: в 1-ю группу включены женщины в возрасте от 22 до 30 лет, во 2-ю — от 31 до 36 лет, в 3-ю — от 37 до 46 лет. Всего было выполнено 1 108 протоколов, включавших полный комплекс процедур ЭКО/ИКСИ+ПГТ-А. До проведения комплекса процедур, предусмотренных протоколом, все супружеские пары прошли опрос и медицинское обследование согласно положениям приказов Минздрава России от 30.08.12 №107н и от 31.07.20 №803н [11, 12].

Подготовка к трансвагинальной пункции (овариальная стимуляция)

Для получения ооцитов женщинам проводили гормональную стимуляцию функции яичников. В одних случаях, начиная со 2—4-го дня менструального цикла, использовали протокол, позволяющий проводить стимуляцию антагонистом гонадотропин-рилизинг-гормона (антГнРГ) и использованием рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона (р-ФСГ) или человеческого менопаузального гонадотропина (ЧМГ). В других случаях, при необходимости, использовали протокол с введением агониста гонадотропин-рилизинг-гормона (аГнРГ) на 21—22-й день цикла с последующим назначением р-ФСГ или ЧМГ на 2—4-й день последующего менструального цикла. Выбор протокола и препарата для овариальной стимуляции осуществлял лечащий врач индивидуально в каждом конкретном случае. Продолжительность стимуляция функции яичников составляла от 8 до 12 дней. На фоне гормональной стимуляции при достижении диаметра фолликулов 18 мм в качестве триггера финального созревания ооцитов использован хорионический гонадотропин (ХГ) в дозе от 5000 до 10 000 ЕД. При симптомах гиперстимуляции яичников, включающих жалобы, соответствующие показатели овариального резерва и данные ультразвукового исследования органов малого таза, пациенткам с мультифолликулярными яичниками проводили замену триггера финального созревания ооцитов на введение аГнРГ в дозе 0,2 мг подкожно (комментарий авторов: аГнРГ может быть использован как триггер финального созревания ооцитов у пациенток с риском гиперстимуляции яичников). Через 35—36 ч после введения триггера проводили трансвагинальную пункцию фолликулов. Из 1 108 проведенных комплексных процедур ВРТ по стандартным протоколам с ПГТ-А в 953 случаях оплодотворение полученных ооцитов было выполнено только методом ИКСИ, а в остальных 155 случаях — методом ИКСИ с селекцией сперматозоидов по их физиологическим особенностям (physiological ICSI, ПИКСИ), представляющим собой дополнительную эмбриологическую методику отбора зрелых и качественных сперматозоидов для оплодотворения яйцеклетки. Оценку наступления стадии двух пронуклеусов для формирования зиготы проводили через 14—16 часов после оплодотворения ооцита.

Культивирование эмбриона

Проведение ПГТ-А эмбриона осуществляли после оплодотворения яйцеклетки на 5—6-е сутки. Для этого произведена биопсия клеток трофэктодермы эмбриона хорошего/отличного качества соответственно морфологическим критериям оценки (3-6 АВ, 3-6 ВА, 1-2 АА, 3-6 АА) с последующей его криоконсервацией [13]. При проведении молекулярно-генетической диагностики исследуемых образцов биопсии полученные клетки трофэктодермы переносили в пробирки типа Эппендорф, содержащие лизирующий буфер. Все этапы культивирования эмбриона в индивидуальных каплях по 25 мкл проходили в мультигазовых инкубаторах. Следует отметить, что в период 2016—2017 гг. в отделении для проведения ПГТ-А использован хромосомный микроматричный анализ (CGH, comparative genomic hybridization), а с 2018 г. — метод высокопроизводительного секвенирования ДНК нового поколения (NGS, next-generation sequencing).

Перенос эмбриона в полость матки и оценка наступления беременности

После получения положительного результата по хромосомному статусу эмбрионов с помощью циклической гормональной терапии препаратами эстрадиола была проведена подготовка эндометрия. Циклическая гормональная терапия не проводилась при естественном менструальном цикле и наличии доминантного фолликула в день осмотра пациентки. Всем пациенткам был выполнен перенос 1 эуплоидного эмбриона. Исключение составили 5 пациенток, которым, по настойчивому обоюдному желанию супружеской пары, выполнен перенос двух эуплоидных эмбрионов. Эмбрионы переносили в полость матки на 19—22-й день менструального цикла при толщине эндометрия более 8 мм. Ведение и поддержку лютеиновой фазы цикла, а также посттрансферного периода выполняли по стандартной методике [2]. На 14-й день после переноса эмбриона в полость матки для диагностики беременности определяли содержание в крови бета-субъединиц хорионического гонадотропина человека (β-ΧГЧ). Через 21 день после переноса эмбриона при положительном результате анализа крови на β-ХГЧ для диагностики клинической беременности выполняли трансвагинальное ультразвуковое исследование. Дальнейшее наблюдение и ведение беременности осуществлялось в индивидуальном порядке лечащим врачом.

Статистические методы

Статистическая обработка данных выполнена с помощью таблиц Microsoft Excel и статистической программы SPSS Statistics 22 (США). Для сравнения полученных результатов исследований в разных возрастных группах супружеских пар проводили статистический анализ с помощью χ2-теста. Для описания категориальных бинарных данных использовали абсолютные величины (n) и процентные доли (%) от общего числа пациенток в группе. За величину порогового уровня статистически значимых различий показателей в исследуемых группах принимали значения p≤0,05.

Результаты

За период 2016—2021 гг. проведено 1108 протоколов, включавших комплексные программы ЭКО/ИКСИ- ПИКСИ+ПГТ-А. В зависимости от возрастной группы лечение по соответствующему протоколу получили 190 женщин 1-й группы, 387 женщин 2-й группы, 531 женщина 3-й группы. Самыми частыми причинами лечения бесплодия с проведением процедуры ПГТ-А были: старший (37 лет и более) репродуктивный возраст — 531 (48%) женщина, нарушения сперматогенеза — 387 (35%) мужчин, множественные неудачные попытки ЭКО в анамнезе — 222 (20%) женщины, а также наличие наружного генитального эндометриоза у 80 (15%) женщин старшего репродуктивного возраста. В меньшем количестве случаев обнаружены несбалансированные хромосомные транслокации численностью 6, 1 и 2 в каждой возрастной группе соответственно, а также дополнительно 1 полисомия по Y хромосоме во 2-й группе и 1 носитель мозаичного кариотипа (46 ХХ/47ХХХ) — в 3-й группе. Использование процедуры ПГТ-А способствовало тому, что ВРТ с проведением программы ЭКО/ИКСИ стали более востребованными среди супружеских пар разного репродуктивного возраста. Так, в процентном соотношении относительное число таких программ, которые сопровождались и процедурой ПГТ-А, увеличивалось с каждым годом и составило 6% в 2016 г., по 8% в 2017 и 2018 гг., 14% в 2019 г. и по 13% в 2020 и 2021 гг.

При анализе эффективности лечения бесплодия методом ВРТ были изучены частота переноса в полость матки криоконсервированных эуплоидных эмбрионов и наступления беременности, число живорождений у пациенток разных возрастных групп (таблица). За период 2016—2021 гг. на фоне циклической гормональной терапии или при естественном менструальном цикле удалось выполнить 627 криопротоколов, которые включали перенос в полость матки криоконсервированного эуплоидного эмбриона, прошедшего процедуру ПГТ-А, что составило 56,6% от всего комплекса процедур ВРТ. Женщинам 1-й группы таких криопротоколов выполнено 117, 2-й группы — 282, 3-й группы — 228. При этом доля криопротоколов была наибольшей (72,9%) во 2-й группе.

Эффективность программ лечения бесплодия методом вспомогательных репродуктивных технологий

Результат

1-я группа (22—30 лет)

2-я группа (31—36 лет)

3-я группа (37—46 лет)

Всего (22—46 лет)

Протокол комплекса ЭКО/ИКСИ-ПИКСИ+ПГТ-А

190

387

531

1108

Криопротоколы, n (%)

117 (61,6)

282 (72,9)

228 (42,9)

627 (56,6)

Положительная имплантация эмбриона/наступление беременности, n (%)

46 (39,3)

115 (40,8)

84 (36,8)

245 (39,1)

Роды/живорождение, n (%)

33 (71,7)

94 (81,7)

64 (76,2)

191 (78)

Примечание. Протокол ЭКО/ИКСИ-ПИКСИ+ПГТ-А: экстракорпоральное оплодотворение/интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида в ооцит и преимплантационное генетическое тестирование эмбриона на определение анеуплоидий. Данные представлены в количественном выражении (n) и в виде относительных (%) частот от числа женщин, прошедших процедуру, представленную ранее в данной возрастной группе. Исследуемые показатели статистически значимо не различались, при их сравнении в разных возрастных группах, p>0,05.

При переносе эуплоидного эмбриона в полость матки достигнутый положительный результат имплантации эмбриона практически не различался в группах и находился в пределах 40%: у 46 (39,3%) женщин 1-й группы, у 115 (40,8%) женщин 2-й группы и у 84 (36,8%) женщин 3-й группы. Вследствие положительной имплантации эмбриона разрешилась родами живым плодом 191 (78%) женщина, при этом количество женщин с живорождением было практически одинаковым в разных возрастных группах — в пределах 70—80%. У 11 из 33 женщин 1-й группы (22—30 лет) с живорождениями роды произведены путем операции кесарева сечения. У остальных 13 женщин 1-й группы диагностированы 8 неразвивающихся беременностей на раннем сроке, 4 биохимических беременности, выявленные методом определения бета-ХГ в сыворотке крови или в моче, и 1 внематочная беременность. У женщин 2-й группы было 94 родов живым плодом, из которых 46 — путем операции кесарева сечения, у 1 женщины — роды двойней. У остальных 21 женщины 2-й группы отмечены следующие исходы: беременность шеечной локализации (у 1 женщины), биохимическая беременность (у 12), неразвивающаяся беременность (у 8). Успешное разрешение беременности живым плодом зарегистрировано у 64 женщин 3-й группы, из которых у 30 — путем операции кесарева сечения, а у двоих — роды двойней. У оставшихся 20 женщин этой возрастной группы были следующие исходы: 13 неразвивающихся беременностей и 7 биохимических беременностей.

При сравнении показателей (%) наступления беременности и живорождения у женщин разных возрастных групп, получивших комплексное лечение бесплодия методом ВРТ по программе ЭКО/ИКСИ-ПИКСИ+ПГТ-А, статистически значимых различий выявлено не было (p>0,05).

Обсуждение

Эффективность выполнения программ ЭКО/ИКСИ- ПИКСИ+ПГТ-А зависит от клинических данных супружеских пар, диагностических и терапевтических возможностей [2, 4, 5]. Современное развитие технологий, позволяющих проводить диагностику патологических изменений на хромосомном уровне доимплантационного этапа развития эмбриона, способствует повышению эффективности и востребованности ВРТ и является экономически выгодной стратегией лечения бесплодия [7—10]. В нескольких исследованиях показано, что максимальная эффективность программ ВРТ с применением ПГТ-А отмечена у пациенток в возрасте до 40 лет и составляет 36—45% [7, 10, 14]. Наиболее вероятно, что снижение эффективности программы ЭКО/ИКСИ с применением ПГТ-А у пациенток старшего репродуктивного возраста обусловлено малым числом получаемых в ходе стимуляции функции яичников ооцитов и, соответственно, эмбрионов, а также высокой частотой отмены переноса эмбриона в полость матки, в связи с выявлением у него анеуплоидий [14]. В настоящем исследовании сопоставимая частота живорождения у пациенток разных возрастных групп, вероятнее всего, связана с тем, что для анализа использованы протоколы супружеских пар, у которых в стимулированном цикле ЭКО/ИКСИ-ПИКСИ получен как минимум один эуплоидный качественный/здоровый эмбрион. Это может свидетельствовать о том, что наибольший вклад в эффективность программы ВРТ вносит наличие эуплоидного здорового эмбриона для переноса в полость матки и, в меньшей степени, отягощенный акушерско-гинекологический анамнез. К отягощенному акушерско-гинекологическому анамнезу относили: изменения эндометрия вследствие многочисленных диагностических гистероскопий, выскабливаний полости матки после неудачных/нежелательных беременностей или другой внутриматочной патологии (полипов, гиперплазии эндометрия и т.д.).

Заключение

Увеличение количества программ вспомогательных репродуктивных технологий с выполнением протоколов экстракорпорального оплодотворения/интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в ооцит с селекцией сперматозоидов по особенностям их физиологии, сопровождающихся определением хромосомного статуса эмбриона путем ПГТ-А, свидетельствует о повышении качества таких программ и, соответственно, их востребованности. Совершенствование диагностической точности проведения ПГТ-А на определение анеуплоидий эмбриона позволит расширить показания и будет способствовать увеличению частоты назначения данного исследования супружеским парам, нуждающимся в применении вспомогательных репродуктивных технологий.

Участие авторов: концепция и дизайн исследования — Н.П. Макарова, Е.В. Кулакова, Е.А. Калинина; сбор и обработка материала — Ю.С. Драпкина, Е.В. Кулакова, А.Н. Екимов; написание текста — Ю.С. Драпкина, Н.П. Макарова; редактирование — Е.В. Кулакова, А.Н. Екимов, Н.П. Макарова, Е.А. Калинина.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.