Дефицит витaминa D — чacтoе явлeниe. Пo данным cтaтиcтики, в CШA дефицит витамина D нaблюдaeтcя у 40—60% нaceлeния, в Poccии показатели примерно такие же, в Beликoбpитaнии это состояние наблюдается у 20% [1—4]. В целом примерно 1 млpд населения испытывают дефицит витaминa D, и это является глобальной проблемой здравоохранения, поскольку ассоциируется с широким спектром острых и хронических заболеваний. Известно, что активные формы витамина D играют решающую роль в различных биологических процессах, включая регуляцию клеточного роста, дифференцировку и модуляцию метаболизма клеток.

Витамин D оказывает влияние на функционирование женской репродуктивной системы. Рецепторы к витамину D присутствуют во всех репродуктивных тканях, включая эндометрий, миометрий, яичники, цервикальный канал. Доказано, что витамин D, находясь в организме в достаточном количестве, положительно влияет на процесс имплантации [5—7]. Материнский (децидуальный) и плацентарный (трофобластический) компоненты плаценты имеют рецепторы к витамину D. Сывороточный уровень белка, связывающего витамин D, во время беременности увеличивается с 46 до 103%. Предполагается, что рецепторы к витамину D могут участвовать в управлении его метаболизмом во время беременности. Развитие и формирование плаценты играют важную роль в благополучном течении беременности, но ее неблагоприятные исходы может обусловить дефицит витамина D у будущей матери [8—10].

Исследования уровня витамина D у пациенток с преэклампсией показали наличие его дефицита [11—13], и в связи с этим нам представилось целесообразным изучить наличие рецепторов к витамину D в эндометрии при этой патологии.

Цель исследования — изучить экспрессию рецепторов к витамину D в клетках эндометрия у пациенток с преэклампсией.

В основную группу вошли 35 женщин с преэклампсией и сроком беременности 36—39 нед, которым производили оперативное родоразрешение путем кесарева сечения. Контрольную группу составили 30 женщин со сроком беременности 38—39 нед, которым выполняли плановое оперативное родоразрешение. Объектом исследования служили фрагменты эндометрия размером 1×0,5×0,5 см, полученные из края операционного разреза матки во время выполнения операции кесарева сечения.

Пациентки основной группы находились в возрасте 26—34 лет. Первые роды происходили у 16 из них, повторные — у 14. Показаниями к операции кесарева сечения служили преэклампсия средней степени тяжести в сочетании с наличием операции кесарева сечения в анамнезе (16 случаев), преэклампсия средней степени тяжести в сочетании с хориоретинальной дистрофией сетчатой оболочки глаза (6), преэклампсия тяжелой степени (13).

Пациентки контрольной группы находились в возрасте 26—32 лет. Первые роды были у 24 женщин, повторные — у 6. Показаниями к операции кесарева сечения служили наличие этой операции в анамнезе (4 случая); миопия высокой степени и хориоретинальная дистрофия сетчатой оболочки глаза (15); предполагаемый крупный плод в сочетании с анатомически узким тазом (3); неправильное положение плода (8). Клинических или лабораторных признаков преэклампсии у пациенток контрольной группы не выявлено.

После извлечения операционный материал фиксировали в 10% забуференном растворе формалина (pH 7,2—7,4) при температуре 23—26 °С в течение суток. Затем образцы промыли проточной водой, выполнили обезвоживание в спирте возрастающей концентрации и залили в парафин. Из тканевых блоков при помощи микротома изготовили поперечные срезы толщиной 5—7 мкм, которые поместили на предметные стекла, смазанные раствором полилизина, затем подсушили в термостате при температуре 37 °C в течение 2 сут.

Непрямым иммуногистохимическим методом выявлены рецепторы к витамину D. Срезы регидратировали, провели инактивацию эндогенной пероксидазы помещением препаратов в 0,1% раствор перекиси водорода на 10 мин. Затем срезы промыли в дистиллированной воде 2 раза по 5 мин и в трех порциях 0,05 М трис-буфера с добавлением 0,15 М натрия хлорида (TBS) с рН 7,2—7,6. Срезы инкубировали в поликлональных кроличьих антителах к рецептору витамина D (GTX104615, «GeneTex, Inc», США) в разведении 1:50 в TBS с добавлением 0,1% тритона Х-100 в течение 12 ч при комнатной температуре, затем промыты в трех порциях TBS по 20 мин в каждой. Далее произведена инкубация в антикроличьей визуализирующей системе EnVision+, конъюгированной с пероксидазой (К 4002, «Dako Cytomation», Дания). Путем определения пероксидазы с применением 3,3-диаминобензидина («Sigma Chemical», США) выявлено специфическое связывание антител. В результате этой процедуры обнаружено окрашивание продукта реакции в коричневый цвет. Для контроля специфичности иммуногистохимического окрашивания выполняли обработку срезов по такой же схеме, но с нормальной кроличьей сывороткой в конечной концентрации 1%. Проводили визуальную оценку результатов интенсивности иммуногистохимического окрашивания с помощью светового микроскопа Olympus CX-21, цифровой камеры Olympus Camedia 4040z.

Интенсивность окрашивания оценивали как слабую (светло-коричневое окрашивание), среднюю (коричневое окрашивание) и сильную (темно-коричневое окрашивание). Статистическую значимость различий в интенсивности окрашивания структур эндометрия в зависимости от количества рецепторов к витамину D определяли с помощью критерия χ². Различия между изучаемыми параметрами признавали статистически значимыми при p<0,05.

У пациенток основной и контрольной групп изучена экспрессия рецепторов к витамину D в ядрах клеток эндометрия, наличие которой определяли по степени интенсивности коричневого окрашивания ядер.

У 22 (62,9%) из 35 пациенток основной группы специфическое окрашивание ядер клеток эндометрия было светло-коричневым и расценено как слабое. У 8 (22,9%) окрашивание ядер клеток эндометрия было коричневым и расценено как среднее. У 5 (14,3%) отмечено более интенсивное окрашивание и расценено как сильное, ядра клеток эндометрия выглядели темно-коричневыми. У 4 (13,3%) из 30 пациенток контрольной группы ядра клеток эндометрия были светло-коричневыми — слабое окрашивание. У 19 (63,3%) отмечено коричневое окрашивание ядер клеток эндометрия и расценено как среднее; у 7 (23,3%) — темно-коричневое и расценено как сильное.

Количество рецепторов к витамину D в клетках эндометрия пациенток с преэклампсией значительно ниже, чем в клетках эндометрия пациенток с физиологическим течением беременности (см. рисунок).

В результате нашего исследования экспрессии рецепторов к витамину D в ядрах клеток эндометрия выявлено, что у пациенток основной группы ядра со средней и сильной степенью окрашивания встречаются реже, чем у пациенток контрольной группы. Следовательно, у пациенток основной группы наблюдается снижение экспрессии рецепторов к витамину D в ядрах клеток эндометрия, то есть количество рецепторов к витамину D в клетках эндометрия уменьшено по сравнению с клетками эндометрия пациенток контрольной группы. Выявлена высокая степень статистической значимости различий результатов исследования у пациенток основной и контрольной групп (χ² =70,12; p<0,001).

Таким образом, сниженное количество рецепторов к витамину D в клетках эндометрия, возможно, является одной из причин неполноценной инвазии трофобласта и в дальнейшем может обусловливать развитие преэклампсии.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Сведения об авторах

Самойлова Алла Владимировна — д.м.н., проф., зав. каф. акушерства и гинекологии ФБГОУ ВО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова», Чебоксары, Россия, 428015; e-mail: allasamoi@mail.ru

Васильева Эльвира Николаевна — к.м.н., доц. каф. акушерства и гинекологии ФБГОУ ВО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова», 428000, г. Чебоксары, Россия, 428000; e-mail: elnikvas@mail.ru

Мальцева Лариса Ивановна — д.м.н., проф., зав. каф. акушерства и гинекологии №1, филиал РМАПО «Казанская государственная медицинская академия» Минздрава России, Казань, Россия, 420012

Гунин Андрей Германович — д.м.н., проф. каф. акушерства и гинекологии ФБГОУ ВО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова», Чебоксары, Россия, 428015; e-mail:drgunin@mail.ru

Денисова Тамара Геннадьевна — д.м.н., проф., проректор по научной работе и информатизации ГАУ ДПО «Институт усовершенствования врачей» Минздрава Чувашии; профессор кафедры акушерства и гинекологии ФБГОУ ВО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова». Чебоксары, Россия, 428015; e-mail: tomadenisova@rambler.ru

Герасимова Людмила Ивановна — д.м.н., проф., зав. каф. общественного здоровья и здравоохранения ГАУ ДПО «Институт усовершенствования врачей» Минздрава Чувашии, Чебоксары, Россия, 428000; e-mail: profgera@mail.ru