Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Завалишина Л.Э.

ФГБУ "Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена" Минздравсоцразвития России

Петров А.В.

ФГУП «Государственный НИИ особо чистых биопрепаратов» ФМБА России, Санкт-Петербург, Россия

Павленко И.А.

ГБУ Ростовской области "Патологоанатомическое бюро", Ростов-на-Дону

Горелик М.З.

ГБУЗ "Приморское краевое патологоанатомическое бюро", Владивосток

Исследование методом FISH за один день. Опыт оценки статуса гена HER2 c помощью нового набора HER2 IQFISH pharmDx

Авторы:

Завалишина Л.Э., Петров А.В., Павленко И.А., Горелик М.З.

Подробнее об авторах

Журнал: Архив патологии. 2013;75(1): 52‑53

Просмотров: 844

Загрузок: 26

Как цитировать:

Завалишина Л.Э., Петров А.В., Павленко И.А., Горелик М.З. Исследование методом FISH за один день. Опыт оценки статуса гена HER2 c помощью нового набора HER2 IQFISH pharmDx. Архив патологии. 2013;75(1):52‑53.
Zavalishina LÉ, Petrov AV, Pavlenko IA, Gorelik MZ. A FISH analysis in one day. Experience in evaluating HER2 gene status by means of a new HER2 IQFISH pharmDx kit. Arkhiv Patologii. 2013;75(1):52‑53. (In Russ.).

?>

Введение

В настоящее время при патоморфологическом исследовании больных раком молочной железы или желудка в большинстве случаев проводится определение HER2-статуса опухоли. Это исследование определяет возможность проведения таргетной терапии трастузумабом и имеет прогностическое значение. Процедура определения HER2-статуса хорошо описана, валидирована и стандартизована [1, 2]. В тех случаях, когда опухолевые клетки по данным иммуногистохимического исследования имеют неопределенный HER2-статус (экспрессия HER2 на уровне 2+), обязательно проводится определение наличия или отсутствия амплификации гена HER2 методом флюоресцентной гибридизации in situ (FISH). Этот метод обладает высокой точностью и надежностью, однако трудоемок и продолжителен по срокам проведения. Последнее связано с необходимостью гибридизации исследуемого образца с ДНК-зондами в течение 14—20 ч. Таким образом, для исследования методом FISH необходимы одни астрономические сутки, и полученный результат можно оценить лишь на следующий рабочий день.

В связи с последними научными разработками появилась возможность проводить FISH-исследование и оценивать результаты в течение одного рабочего дня.

В настоящей работе описан опыт по оценке HER2-статуса с применением нового набора HER2 IQFISH pharmDx фирмы «DAKO» (Дания).

Материал и методы

Материалом для исследования служили образцы опухолей в парафиновых блоках, полученные от 40 пациентов МНИОИ им. П.А. Герцена, ГБУ Ростовской области «Патологоанатомическое бюро», ГБУЗ «Приморское краевое патологоанатомическое бюро» с установленным гистологическим диагнозом «инфильтрирующая карцинома молочной железы», направленных в 2012 г. для определения HER2-статуса. У всех пациентов, по данным иммуногистохимического исследования, имелась экспрессия белка HER2/neu на уровне 2+. FISH проводили с помощью набора HER2 IQFISH pharmDx («DAKO», Дания) согласно инструкции производителя тест-системы. В качестве контроля использовали утвержденный FDA и широко применяющийся в России набор HER2 FISH pharmDx («DAKO», Дания).

Результаты и обсуждение

Статус гена HER2 был успешно определен у всех 40 пациентов с помощью обеих тест-систем. При анализе результатов, полученных с помощью нового набора и «классического» набора для FISH — HER2 FISH pharmDx, они полностью совпали. В препаратах специфические сигналы были компактными и яркими, примерно одинаковой интенсивности. Окраска ядер опухолевых клеток красителем DAPI была детальной и контрастной, а при использовании набора HER2 IQFISH pharmDx более яркой, что облегчает выбор участка опухоли для оценки амплификации гена HER2. Количественный учет и интерпретация результатов не вызывали затруднений как при амплификации гена HER2, так и без нее (см. рисунок, а, б).

Рисунок 1. IQFISH HER2-иccледование (×630). а — отсутствие амплификации гена HER2; б — наличие амплификации гена HER2. Зеленые сигналы — зонд к центромерному участку хромосомы 17, красные — ДНК-зонд к гену HER2.

Состав набора, за небольшим исключением, также мало изменился, и схема приготовления рабочих реагентов осталась прежней. Однако новый набор содержит в 4 раза больше пепсина для протеолитической обработки срезов, а также специальный буфер для его разведения, что крайне удобно при одновременном окрашивании большой партии образцов. Собственно методологических изменений в новом наборе три:

1) новая программа для денатурации и гибридизации образцов (денатурация при 66 °C — 10 мин и гибридизация при 45 °С — 60—120 мин вместо «классической» программы: денатурация при 82 °С — 5 мин и гибридизация при 45 °С — 14—20 ч);

2) сниженная до 63 °С (вместо 65 °С в «классическом» наборе) температура раствора для отмывки несвязавшихся зондов;

3) новый состав гибридизационной смеси для зондов (без использования формамида), который позволяет существенно уменьшить общее время гибридизации и является более безопасным для персонала. Хранить смесь зондов необходимо при –18 °С.

Использование тест-системы HER2 IQFISH pharmDx позволяет получать результаты FISH за 4,5—5,0 ч, т.е. за один рабочий день, что сопоставимо с временны`ми затратами на иммуногистохимическое исследование и значительно меньше, чем при использовании «классического» набора. Это позволяет пациенту быстрее получать результат и увеличивает число исследований, производимых в лаборатории. При этом качество результатов остается высоким.

Заключение

Таким образом, в наборе HER2 IQFISH pharmDx удачно сочетаются высокое качество «классической» тест-системы и меньшее время, необходимое для выполнения данного исследования. Все это способствует более широкому внедрению метода FISH в повседневную практику, переводя его из разряда малодоступного и длительного исследования в метод повседневной, рутинной работы современного врача-патологоанатома.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail