Исследование методом FISH за один день. Опыт оценки статуса гена HER2 c помощью нового набора HER2 IQFISH pharmDx

Авторы:

Лариса Эдуардовна Завалишина,

Петров А.В.,

Павленко И.А.,

Горелик М.З.

Журнал: Архив патологии. 2013;75(1):52-53.

DOI:

Прочитано: 3076 раз

Скачать PDF

Резюме

Определение HER2-статуса опухолевых клеток при раке желудка и молочной железы - рутинный диагностический метод. В большинстве случаев для оценки достаточно иммуногистохимического исследования. Однако при пограничных результатах выполняется уточняющее молекулярно-генетическое исследование методом FISH. В статье описана новая методика - IQFISH, позволяющая получать результаты за один рабочий день.

Ключевые слова

ген HER2
рак молочной железы
FISH

Дата публикации: 04.05.2020

Введение

В настоящее время при патоморфологическом исследовании больных раком молочной железы или желудка в большинстве случаев проводится определение HER2-статуса опухоли. Это исследование определяет возможность проведения таргетной терапии трастузумабом и имеет прогностическое значение. Процедура определения HER2-статуса хорошо описана, валидирована и стандартизована [1, 2]. В тех случаях, когда опухолевые клетки по данным иммуногистохимического исследования имеют неопределенный HER2-статус (экспрессия HER2 на уровне 2+), обязательно проводится определение наличия или отсутствия амплификации гена HER2 методом флюоресцентной гибридизации in situ (FISH). Этот метод обладает высокой точностью и надежностью, однако трудоемок и продолжителен по срокам проведения. Последнее связано с необходимостью гибридизации исследуемого образца с ДНК-зондами в течение 14—20 ч. Таким образом, для исследования методом FISH необходимы одни астрономические сутки, и полученный результат можно оценить лишь на следующий рабочий день.

В связи с последними научными разработками появилась возможность проводить FISH-исследование и оценивать результаты в течение одного рабочего дня.

В настоящей работе описан опыт по оценке HER2-статуса с применением нового набора HER2 IQFISH pharmDx фирмы «DAKO» (Дания).

Материал и методы

Материалом для исследования служили образцы опухолей в парафиновых блоках, полученные от 40 пациентов МНИОИ им. П.А. Герцена, ГБУ Ростовской области «Патологоанатомическое бюро», ГБУЗ «Приморское краевое патологоанатомическое бюро» с установленным гистологическим диагнозом «инфильтрирующая карцинома молочной железы», направленных в 2012 г. для определения HER2-статуса. У всех пациентов, по данным иммуногистохимического исследования, имелась экспрессия белка HER2/neu на уровне 2+. FISH проводили с помощью набора HER2 IQFISH pharmDx («DAKO», Дания) согласно инструкции производителя тест-системы. В качестве контроля использовали утвержденный FDA и широко применяющийся в России набор HER2 FISH pharmDx («DAKO», Дания).

Результаты и обсуждение

Статус гена HER2 был успешно определен у всех 40 пациентов с помощью обеих тест-систем. При анализе результатов, полученных с помощью нового набора и «классического» набора для FISH — HER2 FISH pharmDx, они полностью совпали. В препаратах специфические сигналы были компактными и яркими, примерно одинаковой интенсивности. Окраска ядер опухолевых клеток красителем DAPI была детальной и контрастной, а при использовании набора HER2 IQFISH pharmDx более яркой, что облегчает выбор участка опухоли для оценки амплификации гена HER2. Количественный учет и интерпретация результатов не вызывали затруднений как при амплификации гена HER2, так и без нее (см. рисунок, а, б).

Рисунок 1. IQFISH HER2-иccледование (×630). а — отсутствие амплификации гена HER2; б — наличие амплификации гена HER2. Зеленые сигналы — зонд к центромерному участку хромосомы 17, красные — ДНК-зонд к гену HER2.

Состав набора, за небольшим исключением, также мало изменился, и схема приготовления рабочих реагентов осталась прежней. Однако новый набор содержит в 4 раза больше пепсина для протеолитической обработки срезов, а также специальный буфер для его разведения, что крайне удобно при одновременном окрашивании большой партии образцов. Собственно методологических изменений в новом наборе три:

1) новая программа для денатурации и гибридизации образцов (денатурация при 66 °C — 10 мин и гибридизация при 45 °С — 60—120 мин вместо «классической» программы: денатурация при 82 °С — 5 мин и гибридизация при 45 °С — 14—20 ч);

2) сниженная до 63 °С (вместо 65 °С в «классическом» наборе) температура раствора для отмывки несвязавшихся зондов;

3) новый состав гибридизационной смеси для зондов (без использования формамида), который позволяет существенно уменьшить общее время гибридизации и является более безопасным для персонала. Хранить смесь зондов необходимо при –18 °С.

Использование тест-системы HER2 IQFISH pharmDx позволяет получать результаты FISH за 4,5—5,0 ч, т.е. за один рабочий день, что сопоставимо с временны`ми затратами на иммуногистохимическое исследование и значительно меньше, чем при использовании «классического» набора. Это позволяет пациенту быстрее получать результат и увеличивает число исследований, производимых в лаборатории. При этом качество результатов остается высоким.

Заключение

Таким образом, в наборе HER2 IQFISH pharmDx удачно сочетаются высокое качество «классической» тест-системы и меньшее время, необходимое для выполнения данного исследования. Все это способствует более широкому внедрению метода FISH в повседневную практику, переводя его из разряда малодоступного и длительного исследования в метод повседневной, рутинной работы современного врача-патологоанатома.