Долгие годы, рассматривая заболеваемость первичной увеальной меланомой (УМ), цитировали данные США: стабильный показатель составлял 5—7 случаев на 1 млн популяции [1, 2]. С начала XXI в. частота УМ в Европе (как в целом, так и в отдельной стране — Ирландии) составляет 9—10 человек на 1 млн населения [3, 4]. В Москве на протяжении 2008—2018 гг. частота первичной УМ колебалась в пределах 8,5—10,24 на 1 млн взрослого населения [5].

Под термином «увеальная меланома» подразумеваются опухоли хориоидеи и цилиарного тела, на которые приходится 90—92% всех УМ. Опухоль характеризуется высоким уровнем смертности. Как следует из литературы, практически у половины всех больных первичной УМ спустя 2—3 года после установления диагноза и начала лечения развиваются метастазы [6], к концу 5-го года наблюдения метастазы диагностируют у 31% пациентов с УМ [7]. Возможны метастазы и через 30 лет после лечения первичной опухоли [8]. Следует учитывать, что на момент постановки диагноза меланомы хориоидеи (МХ) до 2% пациентов уже имеют отдаленные метастазы, о чем в 1996 г. писали А.Ф. Бровкина и соавт.; спустя почти 25 лет это подтвердили G. Garg и соавт. [9]. Первым местом метастазирования, как правило, является печень (до 95% случаев), на втором месте — легкие. Эффективные методы лечения метастазов УМ все еще отсутствуют, и после их обнаружения 8—12-месячная выживаемость таких больных составляет не более 15% [10].

По генетическим признакам УМ гетерогенны, что связанно с нарушением регуляции многочисленных генов и различных сигнальных путей, нередко избыточных и аберрантных [11]. МикроРНК, лежащие в основе эпигенетических реакций, регулируют гены путем распада матричной РНК или ингибирования трансляции. Впервые микроРНК в ткани УМ после энуклеации описал L. Worley в 2008 г. Спустя 4 года доказано присутствие микроРНК и в плазме крови больного УМ [12]. К настоящему времени, согласно данным литературы, изучена экспрессия 100 микроРНК в плазме крови больных УМ. Пока установлена роль 13 микроРНК, участвующих в онкогенезе опухоли (см. таблицу).

Характер экспрессии микроРНК в плазме крови пациентов с УМ

Следует оговориться, что авторы, приводя в публикациях в основном сведения о характере экспрессии микроРНК, лишь констатируют наличие меланомы, без четкой ее характеристики. В 2021 г. C. Yang и соавт. впервые указали на увеличение экспрессии семи микроРНК в плазме крови больных УМ на фоне ее прогрессирования, что позволило рекомендовать использовать эти микроРНК в качестве биомаркеров для ранней диагностики опухоли и прогноза при этом заболевании [13]. Однако однотипна ли реакция микроРНК в плазме крови у больных с одиночным узлом и при наличии гематогенных метастазов? Имеются публикации, в которых утверждается отсутствие связи между характером экспрессии микроРНК и витальным прогнозом [14]. Наряду с этим есть утверждения о тесной связи изменения экспрессии микроРНК с витальным прогнозом УМ [15, 16].

Анализ имеющейся литературы позволил сформулировать цель настоящей работы — проанализировать характер экспрессии микроРНК-223 и микроРНК-126 у пациентов с локальной МХ с учетом биометрических показателей при условии отсутствия метастазов.

Материал и методы

Исследована плазма крови 84 больных МХ M₀N₀ в возрасте 35—86 лет (в среднем — 63,4±1,2 года). Основание для постановки диагноза МХ — результаты офтальмологического обследования, оптической когерентной томографии и ультразвукового сканирования. Гематогенные метастазы во всех случаях были исключены по результатам обследования органов грудной клетки и брюшной полости методами компьютерной или магнитно-резонансной томографии. У всех 84 больных МХ M₀N₀ была представлена одиночным узлом толщиной от 0,77 до 17,19 мм. С целью выявления значимости экспрессии уровня микроРНК и роли ее в диагностике УМ у больных осуществляли забор венозной крови объемом 4 мл. Исследование проводили методом количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Экспрессию микроРНК в плазме крови фиксировали в относительных единицах, равных 2^–ΔCt, где ΔCt — рабочие значения изменения цикла получения продукта относительно внутреннего контроля экспрессии микроРНК cel-miR-39-3р. Контрольную группу составили 28 волонтеров в возрасте 45—78 лет (в среднем — 62,9±1,42 года), 14 мужчин и 14 женщин. Критерием включения в контрольную группу было отсутствие опухолевых, аутоиммунных, хронических воспалительных процессов, инсульта, инфаркта миокарда и сахарного диабета 1-го или 2-го типа.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью стандартных методов с использованием программного обеспечения Microsoft Office Excel и пакета прикладных программ Statistica v.13.0 (StatSoft Inc., США). Критический уровень значимости принимали равным 5%, отвергая нулевую гипотезу при p<0,05. Уровень экспрессии рассчитывали в процентах по отношению к контролю для каждой микроРНК (принятой за 100%) в каждом конкретном случае. С целью выявления наиболее чувствительной микроРНК проводили ROC-анализ.

Результаты и обсуждение

Анализ характера экспрессии микроРНК-223 в плазме крови пациентов с МХ N₀M₀ показал ее увеличение по сравнению с контролем в 3,72 раза (рис. 1). Но, по данным литературы, в плазме крови онкологических больных микроРНК-223 характеризовалась противоречивой реакцией. Уменьшение уровня экспрессии микроРНК-223 в плазме крови больных гепатоцеллюлярным раком связывают с подавлением иммунного надзора за опухолью [17, 18]. В то же время доказано увеличение экспрессии микроРНК-233 у больных раком желудка, пищевода, яичников, шейки матки, области головы и шеи [19, 20]. На фоне метастазирования рака желудка экспрессия микроРНК-223 в плазме крови больных увеличивается, что сопровождается усилением пролиферации и миграции клеток опухоли [21]. Рост экспрессии микроРНК-223 отмечен и у пациентов с УМ по мере проявления метастазирования [22]. Таким образом, микроРНК-223, принимая активное участие в онкогенезе, может выступать в роли и онкосупрессора, и онкогенного драйвера [23].

Рис. 1. Графическое изображение уровней экспрессии микроРНК-223 и микроРНК-126 в плазме крови пациентов с МХ (n=84) в сравнении с показателями пациентов контрольной группы (n=28).

Что касается микроРНК-126, то ее относят к ангиогенным микроРНК, так как она участвует в регуляции целого ряда генов-мишеней, вовлеченных в ангиогенез. Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) — сигнальный белок, вырабатываемый многими клетками, — при некоторых опухолях участвует в клеточной адгезии, ангиогенезе и инвазии. Доказано подавление этих процессов при участии микроРНК-126 [24], а низкий уровень экспрессии микроРНК-126 связывают с плохой общей выживаемостью и наличием рецидива опухоли [25]. Экспрессия микроРНК-126 (рис. 1) оказалась невысокой и в плазме крови наших больных МХ (увеличение всего в 1,15 раза).

Публикаций, посвященных участию микроРНК в онкогенезе УМ, пока немного, освещены лишь вопросы уточненной диагностики УМ как при наличии одного внутриглазного узла, так и на фоне метастазирования. Оставался неразрешенным вопрос, меняется ли уровень микроРНК в зависимости от величины первичного узла опухоли при отсутствии гематогенных метастазов. Для решения этого вопроса все МХ были разделены на три группы с учетом их размера на момент исследования. Группа начальных МХ характеризовалась толщиной опухоли до 3 мм (16 глаз), толщина опухолей средних размеров составляла от 3,11 до 4,99 мм (13 глаз), большие меланомы имели толщину от 5 до 17,9 мм (55 глаз). Уровни экспрессии микроРНК-223 и микроРНК-126 в зависимости от размеров опухоли представлены на рис. 2.

Рис. 2. Графики распределения уровней экспрессии исследуемых микроРНК с учетом толщины первичного узла МХ.

Как следует из рис. 2, в группе начальных МХ зафиксирована самая низкая экспрессия микроРНК-223 (12%). Однако по мере увеличения толщины опухоли уровень экспрессии микроРНК-223 резко возрастает, и при больших меланомах, по сравнению с начальными МХ, он увеличивается в 39,7 раза (результаты статистически значимы; p<0,05). Показательным оказался значительный рост экспрессии и микроРНК-126 в группе начальных МХ по сравнению с контрольной группой (на 73%). Но при больших МХ экспрессия микроРНК-126 увеличилась всего в 1,3 раза (результаты статистически значимы; p<0,05). Существует мнение, что микроРНК-126 играет жизненно важную роль в канцерогенезе различных видов рака: она подавляет активность ангиогенеза, клеточной адгезии и инвазии [24], и поэтому низкий уровень экспрессии микроРНК-126 связывают с плохой общей выживаемостью, поздней стадией рака и возникновением рецидива [25].

Представленные на рис. 3 диаграммы подтверждают характер изменения экспрессии микроРНК-223 и микроРНК-126 по мере увеличения толщины узла МХ, подчеркивая нарастающую агрессивность опухоли.

Рис. 3. Сравнение уровня экспрессии микроРНК-223 (а) и микроРНК-126 (б) в плазме крови пациентов с МХ (по группам) и лиц контрольной группы.

Столбчатые диаграммы размаха («ящик с усами») отражают разброс (дисперсию) от минимального до максимального значения. В центре ящика — темная линия (медиана). Звездочки и кружочки — выбросы (наблюдения, имеющие значения, выходящие за пределы ящиков).

Заключение

В исследовании выявлено значимое увеличение уровня экспрессии микроРНК-223 и микроРНК-126, обусловленное присутствием МХ, а также доказана корреляция уровней экспрессии обеих микроРНК с проминенцией меланомы. Это свидетельствует об участии данных микроРНК в онкогенезе УМ, а рост экспрессии на фоне увеличения проминенции меланомы — о нарастающей агрессивности опухолевого процесса, проявляющейся гематогенным метастазированием. В клинической практике исследование уровней микроРНК-223 и микроРНК-126 в плазме крови пациентов с УМ может быть использовано с целью не только уточнения диагноза меланомы, но и прогнозирования возникновения гематогенных метастазов.

Участие авторов.

Концепция и дизайн исследования: А.Б.

Сбор и обработка материала: Н.Ц.

Статистическая обработка данных: Н.Ц.

Написание текста: А.Б.

Научное редактирование: А.Б.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

¹Патент на изобретение №2021123797 от 10.08.2021 «Способ диагностики начальных меланом хориоидеи». Бровкина А.Ф., Цыбикова Н.Д.