АОА — антиокислительная активность

АОЗ — антиоксидантная защита

ВИЧ — вирус иммунодефицита человека

дв. св. —двойные связи

ДК — диеновые конъюгаты

ИФА — иммуноферментный анализ

КД — кетодиены

СОД — супероксиддисмутаза

СТ — сопряженных триенов

ТБК — тиобарбитуровая кислота

ТБК-АП — ТБК-активные продукты

HBV — вирус гепатита В

HCV — вирус гепатита С

Увеличение числа женщин, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), — характерная черта распространяющейся эпидемии ВИЧ-инфекции в мире, при этом около 60% находятся в возрасте 20—30 лет [1]. Иркутская область является одним из лидирующих регионов, где на 1 января 2014 г. насчитывалось более 40 тыс. инфицированных ВИЧ. По данным Иркутского областного центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями, в общей структуре заболеваемости постоянно растет доля женщин, из них 91% женщины детородного возраста, среди которых преобладает половой путь передачи инфекции (70,2%).

В последнее десятилетие отмечается увеличение числа пациенток с коинфекцией — ВИЧ + гепатит В и С. Вопрос о влиянии гепатитов на течение ВИЧ-инфекции изу-чен недостаточно, хотя имеется мнение, что гепатит приводит к быстрому прогрессированию ВИЧ-инфекции и развитию СПИДа [2]. Доказана возможность внепеченочной репликации вируса, в частности в иммунокомпетентных клетках, которые могут становиться резервуаром инфекции, источником повторного инфицирования гепатоцитов и причиной стойкой иммунной недостаточности [3]. Крайне мало информации о сочетанном влиянии гемоконтактных вирусных гепатитов и ВИЧ-инфекции на репродуктивное здоровье женщин [4]. Имеются лишь отдельные работы, посвященные течению и исходам беременности на фоне данных инфекций [5, 6].

Известно, что основой невосприимчивости к возбудителям инфекции являются реакции неспецифической резистентности организма [7—9]. Ряд исследований свидетельствуют о превалирующей роли параметров окислительного стресса в патогенезе ВИЧ-инфекции, причем прием антиоксидантов оказывает ингибирующее влияние на ее прогрессирование [10]. Большой интерес представляют исследования по изучению развития окислительного стресса и активности антиоксидантной защиты (АОЗ) у больных с ВИЧ-инфекцией и коинфекцией [11, 12]. Особенно это актуально для женщин фертильного возраста с ВИЧ, так как многие планируют рождение детей.

Цель работы: выявить особенности изменений пара-метров липопероксидации — антиоксидантной защиты и состояния репродуктивной системы у женщин фертильного возраста с моноинфекцией (ВИЧ) и коинфекцией (ВИЧ и гепатиты В и/или С).

Обследованы 53 женщины репродуктивного возраста с ВИЧ-инфекцией, которых разделили на 2 группы: 1-группа — 26 пациенток с моноинфекцией (средний возраст 30,58±5,35 года) и 2-группа — 27 пациенток с коинфекцией — ВИЧ + гепатиты В и/или С (средний возраст 31,67±3,51 года). Группу пациенток с ВИЧ коинфекцией составляли 6 (22,2%) женщин с ВИЧ и хроническим гепатитом В, 10 (37,1%) с ВИЧ и хроническим гепатитом С 11 (40,7%), ВИЧ и хроническими гепатитами В и С (p>0,05). В качестве контроля использовались данные 28 практически здоровых женщин (средний возраст 31,33±3,46 года) с отрицательными результатами анализов для выявления ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитов, в отсутствие острых или обострения хронических заболеваний на момент обследования. Пациенток с ВИЧ наблюдали амбулаторно в Иркутской областной инфекционной клинической больнице (главный врач — к.м.н. В.А. Хабудаев) и Иркутском областном центре СПИД (главный врач — к.м.н. Ю.К. Плотникова). Диагноз ВИЧ-инфекции установлен на основании эпидемиологических, клинических данных и подтвержден обнаружением специфических антител к белкам ВИЧ 1-го типа методом иммуноферментного анализа (ИФА) и иммунного блотинга. Содержание в сыворотке крови лимфоцитов CD4⁺ определяли с помощью метода проточной цитофлюорометрии на оборудовании «FACSCount» с использованием моноклональных антител фирмы «Beckton Dickinson» (США), вирусная нагрузка (РНК ВИЧ, ДНК вируса гепатита В — HBV, РНК вируса гепатита С — HCV) определялась с помощью метода полимеразной цепной реакции. Диагноз гепатита устанавливали на основании эпидемиологического анамнеза, клинических данных (наличие симптомокомплекса хронического гепатита, увеличение и уплотнение печени), результатов биохимико-серологических исследований (пигментные, ферментные, белковые тесты) и при выявлении маркеров HCV, HBV методом ИФА. Обследуемые клинические группы статистически значимо не различались по уровню вирусной нагрузки (2,5±0,31 и 5,85±1,53 log₁₀ копий/мл соответственно; p>0,05) и количеству лимфоцитов CD4⁺ (обе группы до 200 клеток/мл соответственно; p>0,05). Клинические группы сопоставимы по возрасту, индексу массы тела, употреблению алкоголя, табакокурению, употреблению наркотических средств, ранее не получали антиретровирусную терапию. При обследовании пациенток проведен анализ гормонального статуса с помощью радиоиммунологического и иммуноферментного методов с использованием приборов «Иммунотест» (Россия) Elx808 Ultra Microplate Reader Bio-Tek Instruments, ins (США). Использовали инструментальные методы исследования: кольпоскопия, ультразвуковое исследование органов малого таза, щитовидной железы, молочных желез на приборе Aloka-650.

Материалом служили сыворотка крови и гемолизат. Интенсивность окислительного стресса оценивали по содержанию его субстратов с сопряженными двойными связями (дв. св.), а также продуктов — диеновых конъюгат (ДК) и кетодиенов и сопряженных триенов (КД и СТ) по методу И.А. Волчегорского (1989). Содержание ТБК^​*​-активных продуктов (ТБК-АП) определяли флуориметрически по методу В.Б. Гаврилова и соавт. (1987). О состоянии системы АОЗ судили по общей антиокислительной активности (АОА) крови (метод Г.И. Клебанова и соавт., 1988), а также по содержанию ее компонентов: α-токоферола и ретинола по методу Р.Ч. Черняускене и соавт. (1984), активности фермента супероксиддисмутазы (СОД) методом H.P. Misra, I. Fridovich (1972). Регистрацию оптических плотностей и флуоресценцию проводили с помощью спектрофлуорофотометра SHIMADZU-1501 (Япония), состоящего из двух блоков: спектрофотометра UV-1650PC и спектрофлуориметра RF-1501.

Все пациентки подписывали информированное согласие на участие в исследовании. В работе с больными соблюдали этические принципы, предъявляемые Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации (1964, ред. Сеул, 2008).

Статистический анализ полученных данных проводили с помощью пакета статистических и прикладных программ Statistica 6.1 («Stat-Soft Inc», США). Для определения близости к нормальному закону распределения количественных признаков использовали визуально-графический метод и критерии согласия Колмогорова—Смирнова с поправкой Лиллиефорса и Шапиро—Уилка. Для анализа статистически значимых различий в случае нормального распределения использовали параметрический критерий Стьюдента, при распределении, отличном от нормального, — непараметрический критерий Манна—Уитни. Для сравнения непараметрических показателей использовали критерий χ² или точный критерий Фишера. Результаты представлены в виде среднегрупповых значений показателей и стандартного отклонения (M±σ, где M — среднее арифметическое, σ — стандартное отклонение). Различия считали статистически значимыми при p<0,05.

Данные, свидетельствующие об изменениях содержания компонентов про- и антиоксидантного статуса, представлены в таблице. Средние уровни первичных продуктов ПОЛ — ДК — статистически значимо увеличивались в группе с коинфекцией как по сравнению с контролем (в 1,57 раза; p=0,001), так и по отношению к данным группы с моноинфекцией (в 1,4 раза; p=0,027). Уровень вторичных продуктов — КД и СТ — возрастал у пациенток обеих клинических групп по сравнению с контролем в 2,16 раза (p=0,0002) и 2,43 раза (p<0,0001) соответственно. При этом показатели изолированных дв.св. и конечных ТБК-АП статистически значимо не менялись.

Анализ антиоксидантного статуса показал статистически значимые различия по общей АОА в сторону снижения его значений в группе с моноинфекцией в 1,28 раза (p=0,0273). Незначительное снижение активности основного антиоксидантного фермента — СОД (p=0,0077 при сравнении с контролем и p=0,0035 при сравнении с группой с моноинфекцией), а также уровня α-токоферола в 1,22 раза (p=0,0235 при сравнении с контролем) и в 1,25 раза (p=0,0130 при сравнении с моноинфекцией) обнаруживалось в группе с коинфекцией. При этом отмечали повышенное содержание ретинола в данной группе (в 1,29 раза выше, чем в контроле; p=0,0322).

В группах с моно- и коинфекцией нами проведена оценка частоты развития нарушений репродуктивной системы (см. рисунок). Обнаружено статистически значимое увеличение числа пациенток с недостаточностью лютеиновой фазы в группе с коинфекцией по сравнению с таковым у женщин с моноинфекцией (46 и 78%, соответственно; p=0,0354). В отношении частоты расстройств менструального цикла и наличия бесплодия статистически значимых различий в группах не выявлено. В группе с коинфекцией у большинства пациенток зарегистрирована недостаточность важнейшего антиоксидантного фактора — α-токоферола (в 85%; p=0,0153).

Анализ полученных результатов свидетельствует о дисбалансе в системе ПОЛ—антиоксиданты у пациенток обеих клинических групп, что подтверждается увеличением токсичных метаболитов липопероксидации и снижением активности факторов АОЗ. Причем наибольшая степень накопления продуктов ПОЛ отмечалась в группе с коинфекцией в виде статистически значимого увеличения содержания первичных (ДК) и вторичных (КД и СТ) продуктов липопероксидации. Выявлено, что оба вируса, находясь одновременно в организме человека, оказывают на него более выраженное воздействие и в дальнейшем могут провоцировать развитие фиброза печени [13]. Аналогичные данные получены в других исследованиях по коинфекции ВИЧ и гепатитов [14]. Известно, что в зависимости от силы и длительности патологического процесса окислительный стресс может вызывать как гибель клеток, так и включение адаптивных защитных механизмов, которые приводят к росту клеточного редокс-статуса и появлению нового соотношения активные формы кислорода/антиоксиданты [15]. Установлено, что у пациенток с коинфекцией по сравнению как с контролем, так с ВИЧ-моноинфекцией отмечалось статистически значимое уменьшение уровня основного фермента — СОД и неферментативного компонента — α-токоферола. При вирусном поражении печени происходит активация фагоцитарных клеток и соответственно усиление цитотоксического действия свободных радикалов на мембраны клетки, что может лежать в основе дефицита АОЗ при гепатитах [16]. Сходные результаты получены в ряде подобных исследований [17, 18].

При оценке репродуктивной системы у пациенток двух групп мы не обнаружили статистически значимых различий по частоте нарушений менструального цикла и бесплодия, хотя незначительная тенденция к их росту и у пациенток с коинфекцией наблюдалась. Ранее проведены исследования, согласно которым у ВИЧ-инфицированных женщин развиваются нарушения менструального цикла, овуляции, снижение овариального резерва [19, 20]. При этом у пациенток с низким уровнем лимфоцитов CD4⁺ и высокой вирусной нагрузкой отмечалось развитие полименореи [21]. В нашем исследовании мы выявили повышенную частоту развития и недостаточность лютеиновой фазы (78% случаев) у пациенток с коинфекцией. Данный синдром относят к причинам репродуктивных расстройств, связанных с нарушением функции яичников. Имеются исследования, свидетельствующие о взаимосвязи антиоксидантной недостаточности и репродуктивной системы женщины вследствие причастности антиоксидантов к работе всех звеньев регуляции гонадотропной функции гипофиза [10]. Мы можем предположить, что нарушения менструального цикла у пациенток с коинфекцией могут быть связаны в 85% случаев с выраженной недостаточностью α-токоферола. Выяснено, что активность СОД — фермента, играющего центральную роль в АОЗ, также тесно связана со стероидогенезом в яичниках человека [22].

Наличие коинфекции при ВИЧ характеризуется более выраженным окислительным стрессом и недостаточностью антиоксидантных факторов, чем у пациенток с ВИЧ-моноинфекцией. Данные изменения могут способствовать развитию нарушений репродуктивной системы, в частности недостаточности лютеиновой фазы. Вероятно, у женщин с ВИЧ и коинфекцией (гепатиты В и/или С) в комплексную патогенетическую терапию необходимо включать препараты антиоксидантного действия, что будет способствовать сохранению способности к деторождению.

Конфликт интересов отсутствует.