Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Баландин А.А.

Пермский государственный медицинский университет им. акад. Е.А. Вагнера

Железнов Л.М.

Кировский государственный медицинский университет

Баландина И.А.

Пермский государственный медицинский университет им. акад. Е.А. Вагнера

Баландин В.А.

Пермский государственный медицинский университет им. акад. Е.А. Вагнера

Бородулин Д.В.

Пермский государственный медицинский университет им. акад. Е.А. Вагнера

Морфологическая характеристика коры мозжечка в молодом возрасте и изменения ее цитоархитектоники при опиоидной зависимости

Авторы:

Баландин А.А., Железнов Л.М., Баландина И.А., Баландин В.А., Бородулин Д.В.

Подробнее об авторах

Просмотров: 1460

Загрузок: 59


Как цитировать:

Баландин А.А., Железнов Л.М., Баландина И.А., Баландин В.А., Бородулин Д.В. Морфологическая характеристика коры мозжечка в молодом возрасте и изменения ее цитоархитектоники при опиоидной зависимости. Судебно-медицинская экспертиза. 2021;64(2):18‑22.
A Balandin A, Zheleznov LM, Balandina IA, Balandin VA, Borodulin DV. Morphological characteristics of the cerebellar cortex at a young age and changes in its cytoarchitectonics in opioid dependence. Forensic Medical Expertise. 2021;64(2):18‑22. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/sudmed20216402118

Рекомендуем статьи по данной теме:
Ана­лиз ра­бо­ты Цен­тра кон­тро­ля ка­чес­тва им­му­но­гис­то­хи­ми­чес­ких ис­сле­до­ва­ний ФГБОУ ДПО «РМАНПО» Минздра­ва Рос­сии в 2023 го­ду. Ар­хив па­то­ло­гии. 2024;(3):38-45
Роль им­му­но­гис­то­хи­ми­чес­ко­го ана­ли­за в диф­фе­рен­ци­аль­ной ди­аг­нос­ти­ке ати­пи­чес­ких опу­хо­лей и кар­ци­ном око­ло­щи­то­вид­ных же­лез. Ар­хив па­то­ло­гии. 2024;(4):5-12
Аль­ве­оляр­ная аде­но­ма лег­ко­го. Ар­хив па­то­ло­гии. 2024;(4):38-41
Мо­ле­ку­ляр­ные аль­те­ра­ции по­до­ци­тов при пер­вич­ном фо­каль­но-сег­мен­тар­ном гло­ме­ру­лос­кле­ро­зе и IgA-неф­ро­па­тии. (Поис­ко­вое ис­сле­до­ва­ние). Ар­хив па­то­ло­гии. 2024;(5):21-32
Им­му­но­гис­то­хи­ми­чес­кие осо­бен­нос­ти и па­то­ге­нез ги­пер­рас­тя­жи­мых век. Плас­ти­чес­кая хи­рур­гия и эс­те­ти­чес­кая ме­ди­ци­на. 2024;(4):25-33
Объек­тив­ный струк­тур­но-фун­кци­ональ­ный кон­троль по­ли­пеп­тид­ной ре­ти­ноп­ро­тек­тор­ной те­ра­пии при ди­абе­ти­чес­кой ре­ти­но­па­тии. Вес­тник оф­таль­мо­ло­гии. 2024;(5):97-104
Пи­лот­ное ис­сле­до­ва­ние ас­со­ци­аций мар­ке­ров гли­аль­ной и ней­ро­наль­ной де­ге­не­ра­ции с ис­пол­ни­тель­ны­ми фун­кци­ями у па­ци­ен­тов с расстройства­ми, свя­зан­ны­ми с упот­реб­ле­ни­ем ал­ко­го­ля. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(10):74-79
Мик­со­ма сер­дца: би­оло­ги­чес­кие осо­бен­нос­ти, мор­фо­ло­гия, диф­фе­рен­ци­аль­ная ди­аг­нос­ти­ка. Ар­хив па­то­ло­гии. 2024;(6):74-81
Диф­фе­рен­ци­аль­ный ди­аг­ноз но­во­об­ра­зо­ва­ний ко­жи пе­ри­аналь­ной об­лас­ти. Кли­ни­чес­кая дер­ма­то­ло­гия и ве­не­ро­ло­гия. 2024;(6):673-678
Кли­ни­чес­кий слу­чай ВИЧ-ас­со­ци­иро­ван­ной фор­мы сар­ко­мы Ка­по­ши. Кли­ни­чес­кая дер­ма­то­ло­гия и ве­не­ро­ло­гия. 2024;(6):782-786

Наркотическая зависимость — одна из актуальных проблем, имеющая сегодня не только медицинское, но и социальное значение. Она «вшита» в жизнь современного общества настолько сильно, что корректировать ее губительное действие усилиями только медицины крайне сложно; необходимо участие специалистов из других сфер: психологии, социологии, педагогики [1, 2].

В течение последних 20 лет в мире быстро растет употребление новых психоактивных веществ (ПАВ). Среди потребителей наиболее популярными соединениями являются синтетические каннабиноиды и производные катинона, а на нелегальном рынке рекреационных наркотиков появились новые синтетические опиоиды [3].

В судебно-медицинской практике при определении возраста погибших для идентификации личности уделяют пристальное внимание изменениям в тканях [4]. Именно поэтому, на наш взгляд, наибольший интерес представляют исследования, посвященные изучению закономерностей трансформации структуры органа или ткани на клеточном уровне.

Применение морфологических методов исследования в судебно-медицинской идентификации личности существенно расширяет возможности установления общих и специфических признаков [4, 5]. Методики иммуногистохимии в странах с высокоразвитой морфологической диагностикой являются обязательной составляющей многих исследований. Например, их используют в онкоморфологии, так как только они обеспечивают специфическую визуализацию локализации в тканях различных клеток, их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеточного цитоскелета и даже отдельных генов [6].

Основополагающую роль в реализации всех процессов жизнедеятельности организма играет состояние центральной нервной системы (ЦНС) [7]. Мозжечок — один из важнейших отделов большого мозга, участвующий в обеспечении множества функций — от координационно-локомоторных до регуляции циркадного ритма и поддержки когнитивного статуса [8, 9].

Исследования, использующие технику визуализации процессов мозговой деятельности и нейропсихологические тесты, показывают, что фактически все ПАВ, принимаемые зависимыми, нарушают работу нейрофизиологической сети, вызывая снижение активности зон, ответственных за кратковременную память и внимание. Систематическое употребление ПАВ угнетает функции системы коркового контроля личности высшей психической деятельности. Это проявляется снижением потенциала обучаемости и способности удерживать внимание, нарушением координационно-двигательной сферы, особенно в периоды наркотического опьянения, а также «разбалансировкой» эмоционального компонента личности [10—12]. По этим причинам нас заинтересовала проблема исследования цитоархитектоники коры мозжечка при наркотической зависимости от синтетических опиоидов.

Цель исследования — установить особенности морфологической характеристики коры мозжечка в молодом возрасте при опиоидной зависимости в сравнении с условно здоровым человеком для улучшения качества судебно-медицинской экспертизы.

Материал и методы

Работа выполнена в танатологическом отделении государственного казенного учреждения здравоохранения особого типа Пермского края «Пермское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы» в период 2019—2020 гг. Она основана на анализе результатов комплексного морфологического исследования коры мозжечка человека, включающего гистологический, иммуногистохимический, морфометрический и статистический методы. Исследовали 69 трупов мужчин в возрасте от 21 года до 29 лет включительно.

На проведение исследования получено разрешение этического комитета Пермского государственного медицинского университета им. акад. Е.А. Вагнера (№10 от 22.11.17).

Выделили две группы. Первую группу составили 42 погибших в возрасте 21—29 лет, не имевших в анамнезе наркотической зависимости, а также патологии центральной и периферической нервных систем (условно здоровье). Причина их смерти — травмы или ранения груди и/или живота (какие-либо механические повреждения головы отсутствовали). Во 2-ю группу вошли 27 мужчин в возрасте 24—28 лет, умерших от передозировки наркотического препарата группы синтетических опиоидов. У всех умерших 2-й группы в анамнезе отмечен систематический прием синтетических опиоидов продолжительностью от 16 мес до 3 лет.

Критерии включения: давность смерти, не превышающая 24—36 ч; хранение трупов до исследования в одинаковых условиях при температуре 2 °C; отсутствие макроскопических признаков патологии ткани большого мозга при заборе материала.

Для исследования взяли ткани центральной части нижней полулунной дольки мозжечка. Кусочки фиксировали в 10% растворе забуференного по Лилли формалина (pH 7,2) в течение 24 ч, промыли в проточной воде в течение 30 мин, а затем подвергли обезвоживанию и заливке в парафин по схеме: спирт 60% — 2 части (далее — ч), спирт 70% — 2 ч, спирт 96% — 2 ч, спирт + ксилол (1:1) — по 2 ч, ксилол + парафин (1:1) — по 2 ч, парафин I 56º — 2 ч, парафин II 56º — 1 ч. На ротационном микротоме из парафиновых блоков изготовили гистологические срезы толщиной 4—6 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином и по методу Ниссля (по Снесареву).

Количественный (морфометрический) анализ образцов проводили с использованием программного пакета BioVision, version 4,0 (Австрия). Захват изображений обеспечивали использованием цифровой камеры для микроскопа «CAM V200», («Vision», Австрия).

При иммуногистохимическом исследовании образцов использовали панель антител к белку Vimentin (виментин). Иммуногистохимические исследования выполняли по стандартным протоколам. Применяли концентрированные первичные моноклональные мышиные антитела к протеинам Vimentin, клон V9-DBS («Lab Vision», США), рабочее разведение 1:100, система визуализации KP50L («Diagnostic BioSystems», USA). Парафиновые срезы наклеивали на предметные стекла с адгезивным полилизиновым покрытием («Thermo Scientific», Menzel-Glaser Polysine® Slides 25×75×1,0 mm, Gerhard Menzel, GmbH).

Для восстановления антигенных детерминант после формалиновой фиксации депарафинизированные срезы подвергали нагреванию: срезы помещали в 0,01 М цитратный буфер (pH 6,0) и кипятили в течение 20—30 мин, затем на 5 мин переносили в трис-буфер (pH 7,5), обрабатывали 0,3% раствором пероксида водорода (пероксидазный блок), после чего проводили инкубацию с первичными антителами в течение 10—30 мин во влажной камере. Перед использованием концентрированные антитела разводили растворителем антител (Primary Antibody Diluent, «Diagnostic BioSystems», USA) в титре 1:100 согласно инструкции фирмы-производителя антител. В период иммуногистохимических исследований проводили позитивные контроли, рекомендованные фирмой-производителем. Затем срезы троекратно промывали в трис-буфере, после чего подвергали экспозиции со вторичными антителами (мышиные и кроличьи биотинилированные антитела, «Diagnostic BioSystems», USA) в течение 10 мин, промывали в трис-буфере, обрабатывали конъюгированным с пероксидазой стрептавидином в течение 10 мин и окрашивали DAB+ (3,3’-диаминобензидин, «DiagnosticBioSystems», USA) в течение 1—2 мин, не допуская появления фонового окрашивания. Промывали в 2—3 порциях дистиллированной воды в течение 10—15 мин и докрашивали гематоксилином Майера. Затем срезы заключали в канадский бальзам. При просмотре препаратов на светооптическом уровне антигенпозитивные клетки идентифицировали по появлению коричневого окрашивания цитоплазмы.

Результаты и обсуждение

При использовании рутинных гистологических методик существенного различия ткани коры мозжечка в двух группах не выявили. В 1-й группе (условно здоровые) клетки Пуркинье, как правило, имели правильную грушевидную форму и длинные выраженные отростки. Во 2-й группе обнаружили примерно на 30% больше клеток Пуркинье с нечеткими стенками и гомогенной цитоплазмой. Ядра таких клеток находились в состоянии кариопикноза или кариорексиса (рис. 1 на цв. вклейке).

Рис. 1. Фрагменты мозжечка трупов условно здорового мужчины 22 лет (а) и мужчины 26 лет с опиоидной зависимостью (б).

Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 300.

Расстояние между телами клеток Пуркинье в сравниваемых группах не имело статистически достоверного различия: в правом полушарии мозжечка t(p)=0,26, в левом — t(p)=0,76. Расстояние между телами клеток Пуркинье во 2-й группе в правом полушарии мозжечка было на 5,16%, а в левом полушарии на 1,29% больше, чем в 1-й группе соответственно (табл. 1).

Таблица 1. Расстояние (в микрометрах) между телами клеток Пуркинье в коре мозжечка

Полушарие мозжечка

1-я группа, M±m

2-я группа, M±m

t(p)

Правое

187,4±4,6

197,6±7,8

1,13 (p>0,05)

Левое

191,7±6,5

194,2±4,9

0,31 (p>0,05)

Более информативная морфологическая характеристика коры мозжечка оказалась при использовании иммуногистохимического метода исследования с антителами к виментину. Выявили статистически достоверное увеличение иммунопозитивных тел клеток Пуркинье во 2-й группе (с наркотической зависимостью): в правом полушарии t(p)=1,99, в левом — t(p)=1,97.

Таким образом, во 2-й группе количество иммунопозитивых к виментину клеток Пуркинье в правом полушарии на 52%, а в левом — на 52,9% превышало количество таких клеток в 1-й группе соответственно (табл. 2) (рис. 2 на цв. вклейке).

Таблица 2. Количество (в процентах) иммунопозитивных клеток Пуркинье к виментину

Полушарие мозжечка

1-я группа, M±m

2-я группа, M±m

t(p)

Правое

17,6±3,7

69,6±9,8

4,96 (p<0,01)

Левое

19,9±4,1

72,8±6,1

7,20 (p<0,01)

Рис. 2. Фрагменты мозжечка условно здорового мужчины 24 лет (а) и мужчины 27 лет с опиоидной зависимостью (б).

Иммунопозитивные к виментину клетки Пуркинье. Ув. 150.

Количество иммунопозитивных тел клеток Пуркинье у лиц сравниваемых групп имеет статистически достоверное различие: в правом полушарии t(p)=1,99, в левом — t(p)=1,97.

Наиболее известной функцией промежуточных нитей белка является обеспечение механической целостности клеток. У трупов с опиоидной зависимостью в обоих полушариях мозжечка обнаружили около 70% иммунопозитивных к виментину клеток Пуркинье. Это позволяет трактовать полученной результат как признак нейродегенерации, так как сверхэкспрессия виментина объясняется действием компенсаторных механизмов, протекающих в нейронах. Динамика формирования нитей виментина, определяющая структурную организацию белка в клетке, по мнению исследователей [13—15], важна для поддержания механической целостности клеток, особенно во время их миграции и стресса. Надо также отметить, что в исследованиях, выполненных на лабораторных мышах с нарушенными двигательными функциями, установлено, что виментин проявляет себя в качестве нейротрофического фактора, усиливающего аксональную активность и компенсирующего восстановление локомоции [16]. Таким образом, исследование показало, что нарастание экспрессии виментина в клетках Пуркинье можно использовать для распознавания наличия повреждения нейронной сети при опиоидной зависимости [16].

Полученные данные позволяют более качественно дать характеристику погибшему с опиоидной зависимостью при судебно-медицинской экспертизе.

Выводы

1. При исследовании коры мозжечка с использованием рутинных гистологических методик существенного различия ее цитоархитектоники у лиц с опиоидной зависимостью и условно здоровых не отмечается.

2. Расстояние между телами клеток Пуркинье у лиц с опиоидной зависимостью и условно здоровых не имеет статистически достоверного различия.

3. У лиц с опиоидной зависимостью в обоих полушариях мозжечка около 70% клеток Пуркинье иммунопозитивны к виментину.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.