Варианты микрофлоры ротовой жидкости у практически здоровых детей и подростков

Микрофлора человека представляет собой эволюционно сложившуюся экологическую систему разнообразных микроорганизмов, населяющих открытые полости организма. Микрофлора выполняет важные для жизнедеятельности организма функции — колонизационную резистентность, иммуномодулирующую, синтетическую, детоксикационную, пищеварительную, антимутагенную, антиканцерогенную, а также поддерживает биохимическое, метаболическое и иммунное равновесие, необходимое для сохранения постоянства внутренней среды и здоровья человека в целом [1—4].

Ротовая полость — отдел желудочно-кишечного тракта, который определяет колонизационную резистентность и формирование микробиоты других биотопов пищеварительной и бронхолегочной систем в целом и может рассматриваться как интегральный показатель здоровья человека [5, 6].

Бактериальной составляющей микробиоты пищеварительного тракта, в частности челюстно-лицевой области, и ее роли в норме и при патологии посвящено достаточное количество исследований, в то время как ее вирусный компонент и его соотношение с бактериальным у здоровых людей остается малоизученным [7—11].

Цель работы — определить бактериально-вирусные ассоциации в ротовой жидкости — РЖ (смешанной слюне), состояние иммунной резистентности у практически здоровых подростков и установить возможность использования данных показателей как признаков уровня здоровья на этапе проведения диспансеризации и превентивных мероприятий.

Обследованы 127 практически здоровых подростков 12—18 лет, которых для выявления влияния возрастного фактора разделили на две группы: 1-ю — 41 школьник в возрасте 12—16 лет, 2-ю — 86 студентов 17—18 лет (группы статистически сопоставимы по полу). У родителей школьников 12—14 лет и всех обследуемых старше 14 лет было получено информированное согласие на обследование и забор материала.

Все обследованные относились к I—II группам здоровья согласно Приказу Минздрава Р.Ф. № 621 от 30.12.03. Группы здоровья устанавливали при участии сотрудников лаборатории подросткового возраста Тверского государственного медицинского университета в рамках НИР «Проблемы формирования здоровья детей подросткового возраста в современных социально-средовых условиях» на базе научной платформы «Педиатрия», проводимой в порядке выполнения приказа МЗ РФ от № 281 30.04.13. Все учащиеся прошли комплексное обследование с участием узких специалистов и осуществлением ряда функциональных исследований (кардио-респираторные нагрузочные пробы, спирография, УЗИ щитовидной железы и органов брюшной полости и ряд других). Критериями включения в исследование явились также: наличие у обследуемых интенсивности кариеса зубов, не превышающей средневозрастных показателей для Твери; отсутствие признаков гингивита и ортодонтической патологии, а также обширных реставраций.

Для исследования бактериальной составляющей микробиоты проводилось определение качественного и количественного состава микрофлоры РЖ, являющейся интегральной средой полости рта, с использованием классических методик, позволяющих выделить известные представители индигенной, факультативной и транзиторной микрофлоры.

Вирусную составляющую оценивали с помощью молекулярно-генетического исследования РЖ на наличие ДНК представителей герпес-вирусов. Для амплификации нуклеиновых кислот использовали комплекты реагентов АмплиСенс EBV/CMV/HHV6-скрин-FL (амплификация ДНК вируса Эпштейна—Барр, цитомегаловируса и вируса герпеса человека 6-го типа), АмплиСенс HSV-typing-FL (амплификация вирусов простого герпеса 1-го и 2-го типов) с гибридизационно-флюоресцентной детекцией в режиме реального времени Центрального НИИ эпидемиологии и Роспотребнадзора и амплификатор AppliedBioSystem.

Для определения состояния резистентности в РЖ исследовали уровни лизоцима (турбодиметрия), секреторного IgA и авидности антител с использованием иммуноферментного анализа («Вектор-Бест»).

Статистическая обработка полученных данных осуществлялась с применением пакета компьютерных программ Excel.

Исследование микробиоты РЖ выявило широкий спектр микроорганизмовбактериальной составляющей, включая представителей родов Streptococcus, Enterococcus, Staphylococcus, Lactobacillus, Candida, Micrococcus, Neisseria, Bifidobacterium, Peptostreptococcus, Peptococcus, Bacillus, Actinomyces, Clostridium, Veillonella, Bacteroides, Leptotrichia, семейства Enterobactericeae и др.

Анализ качественных и количественных параметров бактериальной микрофлоры позволил выделить 3 варианта нормального микробиоценоза, различающихся особенностями сочетания и количеством доминирующей облигатной и факультативной условно-патогенной микрофлоры — УПМ (табл. 1).

Для 1-го варианта характерно наличие Streptococcus spp., не обладающих гемолитической активностью, в количестве 5—6 lg КОЕ/мл, Lactobacillusspp. (3—4 lg КОЕ/мл) и отсутствие УПМ. При 2-м варианте наблюдается увеличение количества негемолитических Streptococcus spp. до 6—7 lg КОЕ/мл, снижение количества Lactobacillusspp. до 2—3 lg КОЕ/мл и появление УПМ в количестве не выше 3—4 lg КОЕ/мл. У лиц с 3-м вариантом микробиоценоза количество негемолитических Streptococcus spp. также не превышает 6—7 lg КОЕ/мл; наблюдается более выраженное снижение количества Lactobacillusspp. (до 1—2 lg КОЕ/мл или их полное отсутствие) и повышение уровня УПМ, обладающей узким спектром ферментативной активности, коррелирующей с патогенностью в количестве до 4—5 lg КОЕ/мл.

При анализе частоты встречаемости микроэкологических изменений в возрастном аспекте оказалось, что в обеих возрастных группах превалировал 2-й вариант микробиоты, но 1-й вариант достоверно чаще (р≤0,05) встречался у школьников, а 3-й у студентов (табл. 2). Это может свидетельствовать о том, что с увеличением возраста даже у практически здоровых людей происходит изменение микроэкологии ротовой полости с достоверным снижением количества лактобацилл и повышением количества УПМ с узким спектром ферментативной активности, коррелирующей с патогенностью.

Изучение вирусной составляющей микробиоты полости рта (ПР) позволило выявить наличие ДНК ряда вирусов, спектр и частота которых имели ряд особенностей в зависимости от возраста практически здоровых учащихся (табл. 3).

Сравнительный анализ данных таблицы свидетельствует о том, что количество вируспозитивных образцов было достоверно выше (р≤0,05) у студентов 17—18 лет. Анализ качественного состава вирусного компонента микробиоты в РЖ показал, что в обеих группах доминировали вирус герпеса 6-го типа и вирус Эпштейна—Барр, однако частота встречаемости вируса Эпштейна—Барр, герпеса 6-го типа и ассоциации вирусов у студентов была статистически значима по сравнению со старшими школьниками (р≤0,05).

При сопоставлении результатов молекулярно-генетического исследования вирусного компонента у обследованных с разными вариантами бактериальной микрофлоры выявлен ряд особенностей (табл. 4). Количество вирус-позитивных образцов достоверно выше (р≤0,05) у лиц с 3-м вариантом, чем с 1-м и 2-м вариантами микробиоты. Частота выявления ДНК вируса Эпштейна—Барр и вируса герпеса 6-го типа была достоверно выше (р≤0,05) у лиц с 3-м вариантом, чем с 1-м. Вирус простого герпеса 1-го типа выявлен у 6,7% лиц со 2-м вариантом микробиоты. Ассоциации вирусов преобладали у лиц со 2-м и 3-м вариантами бактериальной нормомикробиоты. Эти данные указывают на увеличение вирусного компонента на фоне нарастания микроэкологических изменений в бактериальном звене.

Исследование показателей местной иммунной резистентностив возрастном аспекте показало, что уровень лизоцима у 87,2—87,8% учащихся находился в диапазоне референсных значений и в среднем составил в возрасте 12—16 и 17—18 лет соответственно 22±0,54 и 24±0,36 мкг/мл, а средний уровень секреторного IgA (sIgA) — 0,33±0,03 и 0,43±0,01 мг/мл. Достоверных различий авидности антител в возрастном аспекте не выявлено, однако наблюдалась тенденция к увеличению показателя на 10% у студентов.

Сопоставление показателей местной резистентности в ПР у молодых людей с разными бактериально-вирусными вариантами нормального микробиоценоза достоверных различий не выявило, однако установлена тенденция к снижению уровня лизоцима и повышению sIgA, что сопровождалось уменьшением авидности антител при 3-м варианте микробиоты, который характеризуется снижением количества лактобацилл и увеличением условно-патогенной бактериальной и вирусной микрофлоры. Эти данные указывают на взаимосвязь микроэкологических особенностей и факторов резистентности и позволяют считать, что определение бактериально-вирусной составляющей микробиоты может служить одним из показателей здоровья человека.

Проведенное исследование позволило выделить в РЖ у практически здоровых учащихся 3 варианта микробиоты, различающиеся особенностями соотношения облигатной, факультативной и условно-патогенной бактериально-вирусной микрофлоры, частота выявления которой зависит от возраста.

Нормомикробиоценоз, соответствующий 1-му варианту, характеризуется оптимальным содержанием индигенной микрофлоры (Lactobacillus spp. — 3—4 lg КОЕ/мл), отсутствием УПМ и единичными вирусами. При 2-м варианте наблюдается снижение количества лактобацилл до 2—3 lg КОЕ/мл, появление УПМ не более 3—4 lg КОЕ/мл и нарастание количества вирусов. У лиц с 3-м вариантом микробиоты выявлено более выраженное снижение количества Lactobacillus spp. — до 1—2 lg КОЕ/мл или их полное отсутствие, повышение уровня УПМ, обладающей узким спектром ферментативной активности, коррелирующей с патогенностью в количестве до 4—5 lg КОЕ/мл и увеличением встречаемости вирусов Эпштейна—Барр и герпеса 6-го типа. С возрастом статистически значимо снижается (р≤0,05) количество лиц с наиболее оптимальным 1-м бактериально-вирусным вариантом и увеличение числа лиц с 3-м вариантом микробиоты.

Микробиота в ПР находится в динамической взаимосвязи с состоянием его иммунной резистентности, поскольку нарастание микроэкологических изменений сопровождается снижением уровня лизоцима на фоне увеличения уровня sIgA и уменьшением авидности антител.

Определение бактериально-вирусного варианта микробиоты РЖ может служить одним из показателей здоровья человека и применяться для установления групп риска возникновения воспалительных бактериально-вирусных стоматологических заболеваний. При определении 3-го варианта микробиоты возможно превентивное назначение лактосодержащих препаратов и лизоцима для нормализации иммунной резистентности организма.