Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Зорина О.А.

ГБОУ ВПО "Первый МГМУ имени И.М. Сеченова"

Ганковская Л.В.

Кафедра акушерства и гинекологии педиатрического факультета, кафедра иммунологии (зав. — проф. Л.В. Ганковская) ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва, Россия

Балыкин Р.А.

Кафедра ГХС и ЧЛХ ПМГМУ им. И.М. Сеченова;
ЗАО "НПФ ДНК-Технология", Москва

Свитич О.А.

Кафедра акушерства и гинекологии педиатрического факультета, кафедра иммунологии (зав. — проф. Л.В. Ганковская) ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва, Россия

Иванюшко Т.П.

Кафедра ГХС и ЧЛХ ПМГМУ им. И.М. Сеченова;
ЗАО "НПФ ДНК-Технология", Москва

Экспрессия генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой оболочки при хирургическом лечении пародонтита

Авторы:

Зорина О.А., Ганковская Л.В., Балыкин Р.А., Свитич О.А., Иванюшко Т.П.

Подробнее об авторах

Журнал: Стоматология. 2016;95(4): 13‑15

Прочитано: 1158 раз


Как цитировать:

Зорина О.А., Ганковская Л.В., Балыкин Р.А., Свитич О.А., Иванюшко Т.П. Экспрессия генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой оболочки при хирургическом лечении пародонтита. Стоматология. 2016;95(4):13‑15.
Zorina OA, Gankovskaya LV, Balykin RA, Svitich OA, Ivaniushko TP. The expression of TLR4 and HBD3 in epithelial cells of oral mucosa by surgical treatment of periodontitis. Stomatology. 2016;95(4):13‑15. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/stomat201695413-15

Рекомендуем статьи по данной теме:
Ре­зуль­та­ты хи­рур­ги­чес­ко­го ле­че­ния фар­ма­ко­ре­зис­тен­тной эпи­леп­сии. Воп­ро­сы ней­ро­хи­рур­гии име­ни Н.Н. Бур­ден­ко. 2025;(5):28-36

В развитии воспалительных заболеваний пародонта важную роль играют защитные факторы слизистой оболочки полости рта (СОПР) [5, 8]. Эпителиальные клетки СОПР являются первой линией защиты организма от инфекции и играют решающую роль в отношении пародонтопатогенных бактерий [6, 11]. Они экспрессируют Toll-подобные рецепторы (TLR), которые распознают липополисахариды анаэробных бактерий, запускают экспрессию генов провоспалительных цитокинов, хемокинов, противомикробных пептидов-дефензинов и других медиаторов, регулирующих воспаление [6, 9, 12-14]. Продукция природных катионных пептидов-бета-дефензинов (HBD) является частью врожденного иммунитета и антимикробного иммунного барьера слизистых оболочек. HBD обладают широким спектром антимикробной активности, вызывая гибель микроорганизмов вследствие нарушения целостности их мембран [4, 7, 10].

Исследование факторов врожденного иммунитета при хирургическом лечении воспалительно-деструктивных поражений пародонта заключается в изучении их роли в процессе регенерации тканей пародонта, что позволит совершенствовать способы лечения больных с данной патологией.

Цель исследования - изучить роль экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках СО при хирургическом лечении воспалительно-деструктивных поражений пародонта.

Материал и методы

Определение уровня экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках СО пародонта проведено у 10 здоровых лиц и 35 пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом (ХГП) в возрасте от 35 до 55 лет: у 24 пациентов был ХГП средней тяжести, у 11 - ХГП тяжелой степени. Пациенты со средней тяжестью ХГП получили традиционное лечение: санацию ПР, местную противовоспалительную терапию, антибиотикотерапию, снятие над- и поддесневых зубных отложений, устранение супраконтактов и функциональное избирательное пришлифовывание по Дженкельсону. После окончания комплекса лечебных мероприятий 9 из этих пациентов не дали согласие на дальнейшее хирургическое лечение (1-я подгруппа). Остальным 15 пациентам в дальнейшем были проведены лоскутные операции (2-я подгруппа). Хирургическое лечение заключалось в предоперационной подготовке и проведении лоскутных операций по методике Видмана-Неймана. Для заполнения костных дефектов использовали остеопластический материал Bio-Oss.

Обследование проводили до и после традиционного лечения, затем в динамике через 1, 3, 6 мес. Брали соскоб со слизистой десневого края для определения методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) экспрессии генов толл-рецепторов (TLR4) и противомикробных пептидов эпителия-бета-дефензинов (HBD-3). Из образцов была выделена РНК с использованием комплекта реагентов АмплиПРАЙМРибо-сорб («ИнтерЛабСервис», РФ) строго по протоколу. Для определения уровня экспрессии исследуемых генов была получена кДНК с помощью реакции обратной транскрипции - ОТ (набор ОТ-1, «Синтол», РФ). На следующем этапе исследования с полученной в результате реакции ОТ кДНК проводили ПЦР-РВ на приборе ДТ-96 (ДНК-Технология, РФ). Реакция проводилась с использованием комплекта реагентов для проведения ПЦР-РВ в присутствии интеркалирующего красителя SYBR Green I («Синтол», РФ). Последовательность праймеров для определения уровня экспрессии данных генов подбирали с помощью программы Vector NTI 8.0 (последовательности мРНК были получены в базе данных GeneBank). Системы для определения экспрессий генов TLR4 и HBD-3 были отработаны ранее [1, 2]. Уровень экспрессии исследуемых генов определяли относительно экспрессии гена GAP. Данные об экспрессии исследуемых генов представлены в виде количества копий соответствующего гена относительно 106 копий гена GAP (исследование экспрессии гена TLR4) и 103 копий гена GAP (исследование экспрессии гена HBD-3). Результаты выражали в медиане и процентилях (25-75-й). Для оценки достоверности различий применяли непараметрические критерии Вилкоксона и Манна-Уитни. Различие показателей считалось достоверным при р<0,05 [3].

Результаты и обсуждение

Показатели экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой пародонта представлены в табл. 1. У больных с воспалительно-деструктивными поражениями пародонта уровень экспрессии генов TLR4 и бета-дефензина (HBD-3) в эпителиальных клетках слизистой пародонта был повышен и достоверно отличался (p<0,05) от показателей у здоровых лиц.

Таблица 1. Показатели экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой пародонта Примечание. Здесь и в табл. 2: n - число зубов; * - различия со здоровыми достоверны (р<0,05).

У пациентов с ХГП средней тяжести уровень экспрессии генов TLR4 был повышен в 1,5-7,0 раза, а при тяжелой степени - в 4,5-20,5 раза, уровень экспрессии генов HBD-3 соответственно - в 1,5-5,0 и 2,0-6,5 раза.

Высокий уровень экспрессии генов распознающего рецептора TLR4 и дефензина HBD-3 эпителиальных клеток пародонта у пациента с ХГП по сравнению со здоровыми лицами свидетельствует о выраженной активности факторов врожденного иммунитета. При нарастании воспалительно-деструктивного процесса в пародонте экспрессия гена TLR4 в эпителиальных клетках резко возрастала (см. табл. 1). Изучаемые показатели можно рассматривать как маркеры воспалительной реакции в тканях пародонта.

В табл. 2 показаны уровни экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой пародонта после комплексного традиционного лечения у пациентов с ХГП средней тяжести. Анализ результатов свидетельствовал о нормализации показателей врожденного иммунитета в течение 1 мес. В сроки 3-6 мес у больных 1-й подгруппы отмечалась тенденция к повышению показателей врожденного иммунитета, что клинически совпадало с явлениями воспаления в пародонте.

Таблица 2. Уровень экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой пародонта до и после традиционного лечения Примечание. Здесь и в табл. 3: * - различия показателей до и после лечения (р<0,05).

Влияние хирургического лечения на уровень экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой пародонта у пациентов 2-й подгруппы представлено в табл. 3.

Таблица 3. Уровень экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой пародонта у пациентов 2-й подгруппы (n=45) после лоскутных операций Примечание. * - различия показателей до и после лечения достоверны при (р<0,05).

Изучение показателей в динамике после лоскутных операций свидетельствует о том, что до лечения они находились в пределах нормы (см. табл. 3). При проведении лоскутных операций уровень показателей в течение 1 мес снижался в среднем в 2 раза от исходного, затем в сроки 3-6 мес он повышался до нормальных значений.

Таким образом, при воспалительно-деструктивных поражениях пародонта экспрессия генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой пародонта повышена; изменения наиболее выражены при тяжелой степени заболевания, что указывает на активацию факторов врожденного иммунитета в ответ на патогены, т. е. активация экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой пародонта может рассматриваться как важный маркер нарушения механизмов защиты слизистой пародонта и развития хронического воспаления. Традиционное комплексное лечение, включающее в себя противовоспалительную терапию, положительно влияло на уровень экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой пародонта - он нормализовался в течение 1 мес, а в дальнейшем повышался, что клинически совпадало с явлениями воспаления в пародонте. Важное условие для проведения восстановительных операций на пародонте - нормальные показатели защитных факторов иммунитета. Хирургическое лечение, включающее в себя лоскутные операции с применением остеопластического материала, способствовало кратковременному снижению уровня экспрессии генов TLR4 и HBD-3 в эпителиальных клетках слизистой пародонта. Снижение данных показателей можно объяснить лечебными мероприятиями. Наблюдение пациентов в динамике в сроки от 3 до 6 мес показало, что послеоперационный период протекал на фоне нормальных показателей экспрессии генов TLR4 и HBD-3.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.