Лейкоплакия представляет собой одну из разновидностей кератозов, характеризующихся хроническим течением и поражающих слизистую оболочку полости рта и красную кайму губ. Факторы, приводящие к развитию лейкоплакии, полиэтиологичны. Это курение, травмы механического, химического, термического генеза, генетическая предрасположенность. В то же время выявлена связь лейкоплакии с хронической кандидозной инфекцией и заболеваниями желудочно-кишечного тракта [4, 8]. Для лейкоплакии характерно наличие очагов гиперкератоза с явлениями хронического воспаления в зонах, в норме не подвергающихся ороговению [5]. Общепризнана принадлежность лейкоплакии к предракам как длительно существующим атрофически-дегенеративным пролиферативным изменениям ткани неспецифической природы.

А.Л. Машкиллейсон в 1970 г. предложил классификацию, в которой выделил 4 клинические формы лейкоплакии: плоскую, веррукозную, эрозивную и лейкоплакию курильщиков Таппейнера (никотиновый стоматит) [6]. Плоская лейкоплакия — наиболее распространенная форма заболевания, представляющая собой резко ограниченный очаг сплошного помутнения слизистой оболочки бледно-серого или белого цвета, не возвышающийся над здоровой слизистой оболочкой. При веррукозной форме появляются либо возвышающиеся над слизистой оболочкой белые гладкие бляшки (бляшечная форма), либо плотноватые бугристые серо-белые, выступающие на 2—3 мм бородавчатые разрастания, чаще — на фоне плоской лейкоплакии (бородавчатая форма). Веррукозная лейкоплакия обладает значительно большей, чем плоская лейкоплакия, потенциальной злокачественностью — до 20% случаев [7]. При эрозивной лейкоплакии эрозии имеют разную форму и величину и образуются в очагах плоской и веррукозной лейкоплакии. Эрозивная лейкоплакия наиболее злокачественная (25,5% случаев). Чаще всего отмечаются поражения слизистой оболочки щек и дна полости рта. Лейкоплакию Таппейнера описывают в литературе как самостоятельную клиническую форму заболевания, никогда не подвергающуюся малигнизации и быстро проходящую после отмены курения.

Между локализацией процесса и степенью его потенциальной злокачественности установлена определенная взаимосвязь. Наиболее высок риск злокачественного перерождения очагов лейкоплакии в области языка и дна полости рта. Риск трансформации возрастает в случаях длительно существующих, не поддающихся лечению очагов лейкоплакии, а также при появлении язв и атрофии. Злокачественная трансформация веррукозной формы наступает в сроки от 1 года до 5 лет от начала заболевания; длительность заболевания до трансформации в рак индивидуальна [5, 10]. О начинающемся озлокачествлении можно судить по ряду клинических признаков — уплотнению в основании очага, усилению ороговения, внезапному эрозированию с кровоточивостью.

Цель исследования — повышение качества диагностики предраковых изменений на фоне лейкоплакии и определение степени неоплазии эпителия на ранних стадиях заболевания с помощью иммуногистохимического (ИГХ) исследования.

Для достижения поставленной цели в отделении заболеваний слизистой оболочки полости рта ЦНИИС и ЧЛХ было проведено комплексное клинико-лабораторное обследование 32 пациентов (15 мужчин и 17 женщин) в возрасте от 35 до 60 лет.

Диагноз лейкоплакии ставили, исходя из данных клинического осмотра, оптической когерентной томографии, гистологических и ИГХ-исследований.

Гистологическое исследование считают «золотым стандартом» диагностики заболеваний СОПР, дающим объективную информацию о структурных изменениях ткани. Преимуществом биопсии является возможность изучения патологического процесса на клеточном уровне, а главным недостатком — инвазивность. Успех гистологического исследования и объективность диагноза в большой мере зависят от правильно выбранного места взятия биоптата [1, 9].

Согласно классификации ВОЗ (2005), выделяют лейкоплакию без атипии, лейкоплакию SIN1, SIN2 и SIN3 (Squamous Intraepithelial Neoplasia). ИГХ-исследование позволяет охарактеризовать патологический процесс в различных слоях эпителия СОПР на молекулярном уровне [2, 3].

Забор биопсийного материала для исследования осуществлялся с письменного согласия больных. ИГХ-исследование проводилось в соответствии со стандартным протоколом. Ткани фиксировали в 10% нейтральном формалине (pH 7,4) и после проводки в спиртах заливали в парафин с температурой плавления 54 °С. Для гистологического и ИГХ-исследования серийные срезы толщиной 5 мкм монтировали на стекла, покрытые поли-L-лизином. С помощью моноклональных мышиных антител выявляли тканевые антигены к Ki-67 (клон — MM 1, Diagnostic Biosystems — 1:200), к кератину-8 (клон — TS1, Thermo scientific — 1:100) и с помощью очищенных антител кроличьей антисыворотки — к клаудину-1 (Thermo scientific — 1:200).

Иммунные комплексы определяли, используя безбиотиновую систему детекции на основе пероксидазы хрена («BioGenex», США); срезы докрашивали гематоксилином Майера [3].

Из обследованных нами 32 пациентов у 20 была диагностирована плоская лейкоплакия и у 12 — веррукозная.

Гистологические повреждения слизистой при клиническом диагнозе «лейкоплакия» могут варьировать от гиперплазии до инвазивного рака. Поверхностный кератиновый слой может располагаться над доброкачественным, зрелым многослойным эпителием плоского либо псевдоэпителиоматозного типа или на слизистой со слабой, средней или выраженной дисплазией (SIN 1, SIN 2 или SIN 3).

При гиперплазии отмечается утолщение эпителия вследствие увеличения одного из его компонентов — базального, шиповатого (акантоз) или поверхностного (гипер-, паракератоз) клеточных слоев, без клеточной атипии. Небольшое увеличение плотности клеток и клеточная атипия вазможны на фоне воспаления.

При гистологическом исследовании очагов веррукозной лейкоплакии на фоне утолщения поверхностного кератинового слоя наблюдается расширение слоя шиповатых клеток с дискератическими изменениями. В подэпителиальной соединительнотканной основе встречаются отдельные лимфомакрофагальные инфильтраты.

ИГХ-исследование у пациентов с диагнозом плоской лейкоплакии неопластической трансформации эпителиальных клеток не выявило; основные изменения эпителия характеризовались гиперплазией с пролиферацией клеток (ядерная локализация белка Ki-67) в базальном и парабазальном клеточных слоях, отсутствием эктопической экспрессии в эпителиальных клетках кератина-8 и хорошо развитыми межклеточными контактами (клаудин-1).

У пациентов с веррукозной формой лейкоплакии по данным ИГХ-диагностики получены следующие результаты: у 9 — SIN 1, у 1 — SIN 2 и у 2 — SIN 3.

При SIN 1 экспрессия белка Ki-67 отмечалась в ядрах эпителиальных клеток нижней трети слизистой оболочки, в этой же зоне выявлены эктопическая экспрессия кератина-8 и отсутствие мембранного окрашивания клеток на клаудин-1. У пациентов с SIN 2 определялись ядерная экспрессия белка Ki-67, кератина-8 и снижение экспрессии клаудина-1 в нижних ²/₃ слизистой. У 2 пациентов с SIN 3 пролиферативная активность клеток по белку Ki-67 и эктопическая экспрессия кератина-8 наблюдались во всех слоях эпителия слизистой оболочки на фоне отсутствия экспрессии белка межклеточных контактов клаудина-1.

Таким образом, клинический осмотр и ИГХ-исследование биопсийного материала на белки Ki-67, кератин-8 и клаудин-1 представляют собой наиболее информативные методы диагностики различных форм лейкоплакии, при которых возможно озлокачествление.