Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Погорелова Т.Н.

ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России

Гунько В.О.

ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России

Никашина А.А.

ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России

Михельсон А.А.

ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России

Боташева Т.Л.

ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России

Палиева Н.В.

ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России

Значение дисбаланса белков околоплодных вод в развитии преждевременных родов

Авторы:

Погорелова Т.Н., Гунько В.О., Никашина А.А., Михельсон А.А., Боташева Т.Л., Палиева Н.В.

Подробнее об авторах

Журнал: Проблемы репродукции. 2022;28(6): 38‑43

Прочитано: 1326 раз


Как цитировать:

Погорелова Т.Н., Гунько В.О., Никашина А.А., Михельсон А.А., Боташева Т.Л., Палиева Н.В. Значение дисбаланса белков околоплодных вод в развитии преждевременных родов. Проблемы репродукции. 2022;28(6):38‑43.
Pogorelova TN, Gun’ko VO, Nikashina AA, Mikhelson AA, Botasheva TL, Palieva NV. Significance of amniotic fluid protein imbalance in the development of preterm labor. Russian Journal of Human Reproduction. 2022;28(6):38‑43. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/repro20222806138

Рекомендуем статьи по данной теме:
Опыт вы­пол­не­ния мет­роп­лас­ти­ки при placenta accreta в Рес­пуб­ли­ке Крым. Рос­сий­ский вес­тник аку­ше­ра-ги­не­ко­ло­га. 2025;(1):77-81

Введение

Проблема преждевременных родов является одной из наиболее актуальных в акушерстве в связи с высоким риском перинатальных потерь, а также значительной заболеваемостью новорожденных. Частота данной патологии до настоящего времени остается достаточно высокой [1—4], что обусловливает необходимость дальнейшего изучения функционально-молекулярных механизмов преждевременного развития родовой деятельности. Особенно информативным является исследование белков, выполняющих многочисленные клеточные функции. Важные сведения о течении беременности и состоянии плода дает изучение белков околоплодных вод — гестационной биосферы, занимающей центральное место в фетоплацентарной системе [5—7].

Цель исследования — изучить состав и модификации белков околоплодных вод, их значение в прогнозировании преждевременного развития родовой деятельности.

Материал и методы

Дизайн исследования

В проспективное исследование включены 60 беременных, из них 28 клинически здоровых женщин с неосложненным течением беременности и родами в срок (39—40 нед), составившие контрольную группу, и 32 женщины, у которых на сроке 34—37 нед произошли преждевременные роды (основная группа).

Критерии включения в контрольную группу: физиологическое течение беременности; доношенная беременность; возраст женщин от 23 до 32 лет. Критерии включения в основную группу: преждевременная родовая деятельность. Критерии исключения: инфекционные заболевания; декомпенсированные формы соматических болезней; признаки преэклампсии и задержки роста плода; отсутствие информированного добровольного согласия на расширенный протокол исследования.

Условия проведения

Исследование выполнено на базе клинических и научных подразделений НИИ акушерства и педиатрии ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России.

Продолжительность исследования

Исследование проведено в период с 2019 по 2021 г.

Описание медицинского вмешательства

Выполнены все необходимые клинические, клинико-лабораторные и функциональные исследования, регламентированные Приказом Минздрава России №572 от 01.11.12 «Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю «акушерство и гинекология» (за исключением использования вспомогательных репродуктивных технологий)» (в ред. Приказа Минздрава России от 11.06.15 №333н, от 12.01.16 №5н, от 21.02.20 №114н).

Основной исход исследования

Конечной точкой исследования явилась оценка изменения спектра белков околоплодных вод при преждевременных родах по сравнению с соответствующими показателями при физиологической беременности.

Дополнительные исходы исследования

Дополнительные исходы исследования отсутствуют, поскольку отклонения изученных параметров отражены в основном исходе.

Методы регистрации исходов

Материалом для исследования служили околоплодные воды, взятые в срок 16—18 нед беременности путем трансабдоминального амниоцентеза. Проведение этой процедуры осуществлялось для исключения хромосомной патологии плода (Приказ Минздрава России от 01.11.12 №572). Все плоды у женщин, включенных в исследование, имели нормальный хромосомный набор.

Белки фракционировали методом электрофореза в полиакриламидном геле, используя прибор Protein II xi Multi-Cell (Bio-Rad Laboratories, Inc., США). Количественную оценку электрофореграмм после окрашивания кумасси бриллиантовым голубым R-250 проводили на денситометре Camag TLC Scannes II (Швейцария) с интегратором фирмы Hewlett Packard (США). Для выявления природы и свойств белков использовали классические специфические красители [5, 6].

Статистический анализ

Размер выборки предварительно не рассчитывали. Статистическую обработку данных осуществляли с помощью лицензионного пакета программ Statistica v. 6.0 (StatSoft Inc., США). Оценка характера распределения данных с помощью критерия Шапиро—Уилка свидетельствует об их нормальном распределении. Исследованные показатели представлены в виде среднего значения (M), среднего квадратичного отклонения (SD) и средней квадратичной ошибки (m). Статистическую значимость различий между сравниваемыми данными определяли по критерию Стьюдента (t-критерию) для независимых выборок, а также по критерию c2 для сравнения категориальных переменных. Результаты оценивали как статистически значимые при p<0,05.

Этическая экспертиза

Информированное добровольное согласие на использование биоматериала для научных исследований получено от всех обследованных пациенток. Исследование проведено в соответствии с принципами, обозначенными в Хельсинкской декларации (2000 г.) и протоколе конвенции Совета Европы о правах человека и биомедицине (1999 г.) и одобрено этическим комитетом ФГБОУ ВО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздрава России (протокол №13/19 от 12.09.19).

Результаты и обсуждение

Сравниваемые группы (основная и контрольная) пациенток статистически значимо не различались по акушерскому и соматическому анамнезу (табл. 1). Полученные молекулярно-биохимические данные свидетельствуют о высокой гетерогенности белков околоплодных вод. У женщин контрольной группы они представлены 20—22 фракциями, в их числе фракции по электрофоретической подвижности (Rm), подобные сывороточным преальбуминам, альбуминам, α1-глобулинам, трансферринам, посттрансферринам, α2-глобулинам, β-глобулинам, гаптоглобинам и макроглобулинам.

Таблица 1. Клинико-анамнестическая характеристика пациенток

Показатель

Контрольная группа (n=28)

Основная группа (n=32)

p

Возраст, годы*

26,9 (11,2)

28,2 (12,4)

0,0514

Исходный ИМТ, кг/м2*

27,6 (7,67)

29,1 (7,94)

0,329

Первородящие, n (%)**

13 (46,7)

14 (44,1)

0,896

Повторнородящие, n (%)**

15 (53,3)

18 (55,9)

0,892

Аборты, n (%)**

7 (25,0)

9 (25,0)

0,814

Длина шейки матки, мм*

36,0 (10,9)

34,5 (9,5)

0,791

Наличие хронических заболеваний, n (%)**

11 (39,0)

12 (37,5)

0,765

Примечание. Данные представлены в виде: * — M±SD, t-тест; ** — в виде абсолютных чисел и относительных частот n (%), c2-тест; ИМТ — индекс массы тела. В табл. 1, 2: p — статистическая значимость различий между показателями у женщин контрольной и основной групп.

Сопоставление спектра белков околоплодных вод женщин контрольной и основной групп выявило значительные качественные и особенно количественные различия (табл. 2). Общее содержание белков при угрозе прерывания беременности на 27% ниже, чем у женщин контрольной группы. Число фракций в g-глобулиновой и гаптоглобиновой зонах снизилось с 4 до 2, а в α1-глобулиновой и преальбуминовой зонах, напротив, повысилось с 2 до 4. Модификация касается и электрофоретической подвижности отдельных фракций в зонах альбуминов и гаптоглобинов. Это может свидетельствовать об их структурных изменениях, в частности соотношения функциональных групп и состава концевых аминокислот [8]. Кроме того, у женщин основной группы по сравнению с женщинами контрольной группы снижается уровень белков во фракции, аналогичной альбумину (на 34,0%, p=0,01), а также в β-глобулиновой, трансферриновой и гаптоглобиновой зонах (на 37,1%, 38,2% и 43,3% соответственно, p=0,001).

Таблица 2. Содержание белков околоплодных вод в зонах с электрофоретической подвижностью (Rm) при физиологической беременности и при угрозе преждевременных родов (мг/100 мл)

Rm

Контрольная группа (n=28)

Основная группа (n=32)

p

0,60—1,0

0,74±0,04

0,79±0,05

0,85

0,48—0,51

4,62±0,27

1,57±0,10

0,010

0,37—0,41

2,71±0,21

3,81±0,25

0,001

0,30—0,34

2,50±0,17

1,55±0,11

0,001

0,23—0,27

3,28±0,23

3,39±0,24

0,79

0,20—0,24

5,23±0,34

5,01±0,35

0,65

0,15—0,18

4,37±0,30

2,75±0,21

0,001

0,07—0,11

5,82±0,41

3,32±0,24

0,001

0,04—0,05

6,81±0,45

6,67±0,52

0,91

Примечание. Данные представлены в виде среднего значения и средней квадратичной ошибки (M±m).

Уменьшение концентрации гаптоглобинов и трансферринов, обладающих выраженными антиоксидантными свойствами, может приводить к усилению процессов перекисного окисления липидов, влияющих на синтез простагландинов при преждевременных родах [6].

В области β-глобулинов находится медьсодержащий белок — церулоплазмин [9], также оказывающий сильное антиоксидантное действие и влияющий на стабилизацию клеточных мембран. В связи с этим снижение его количества усугубляет свободнорадикальные процессы. Ранее полученные данные свидетельствуют о том, что уровень церулоплазмина в околоплодных водах снижается и при плацентарной недостаточности, зачастую регистрируемой при преждевременной инициации процессов родовозбуждения [10]. В свою очередь, уменьшение количества белка в альбуминовой зоне околоплодных вод отрицательно сказывается на развитии плода.

Противоположная направленность изменения характерна для α1-глобулинов, содержание которых повышается на 40,5% (p=0,01). К фракции этих белков относится белок, связывающий инсулиноподобный фактор роста — ИПФР (ИПФРСБ-1). Увеличение содержания данного белка, очевидно, снижает количество самого фактора, угнетая тем самым его ингибирующее действие на высвобождение плацентарных простагландинов [11].

Помимо этого, уменьшение уровня ИПФР, являющегося одним из ключевых регуляторов роста и развития плода, нарушает эти процессы. Следует отметить, что, согласно современным представлениям, плоду отводится определенная роль в инициации родов. Причем ухудшение условий его обитания в результате усиления гипоксии в комплексе «мать — плод» может ускорить процессы преждевременного развития родовой деятельности.

Гетерогенность белков околоплодных вод подтверждается также наличием сложных протеинов в виде комплексов с различными небелковыми соединениями. Наиболее высокое содержание обнаружено для гликопротеинов: у женщин контрольной группы выявлено 16 фракций углеродно-белковых комплексов, 10 фракций липопротеинов и 8 нуклеопротеинов. У пациенток основной группы количество гликопротеинов снижается на 35,6% (в норме данная величина составляет 45,31±2,72 мкмоль/мг белка, при угрозе преждевременных родов — 29,17±1,93 мкмоль/мг белка, p=0,01). Особенно негативное влияние такого уменьшения связано с тем фактом, что в их составе находится ряд специфических белков беременности, участвующих в осуществлении важнейших клеточных функций [12]. Аналогичная направленность изменений имеет место и для липопротеинов, содержание которых снижается на 38,5% (с 39,86±2,91 мкмоль/мг белка у женщин контрольной группы до 24,50±1,52 мкмоль/мг белка у женщин основной группы, p=0,01). Уменьшение количества липопротеинов в околоплодных водах, осуществляющих параплацентарный обмен, ухудшает снабжение организма плода этими важными белками, необходимыми для его трофики и обеспечения баланса оксидантных и антиоксидантных процессов.

Что касается нуклеопротеинов, особенно РНК-нуклеопротеинов, то их содержание снижено в меньшей степени, чем других сложных белков, — на 23,7% (у женщин контрольной группы их уровень составляет 25,32±1,55 мкмоль/мг белка, у женщин основной группы — 19,32±1,35 мкмоль/мг белка, p=0,01). Однако это не уменьшает значимости такого изменения, влияющего на трансляционный уровень регуляции протеосинтеза. Последнее может служить ведущим звеном в цепи молекулярных повреждений, приводящих к развитию осложненной гестации.

Проведенные нами исследования выявили также в околоплодных водах при преждевременных родах перераспределение белков в зонах с различными величинами молекулярных масс. Если у женщин контрольной группы при значениях молекулярных масс 290 кДа, 75 кДа и 20 кДа содержание белков составляет соответственно 52%, 36%, 12%, то у беременных основной группы содержание высокомолекулярных и среднемолекулярных белков снижается до 48% и 32%, а низкомолекулярных, напротив, повышается до 20%.

Такое перераспределение белков происходит за счет ограниченной деструкции макромолекул с освобождением более мелких фрагментов, переходящих в зоны белков с меньшими молекулярными массами.

Анализ приведенных данных позволяет полагать, что нарушение состава и свойств белков в околоплодных водах при преждевременных родах происходит в результате модификации различных уровней структуры белков. Совокупность этих изменений снижает функциональную активность белков и приводит к повреждению их многогранных регуляторных возможностей.

Заключение

Полученные результаты свидетельствуют о том, что преждевременные роды развиваются на фоне дисбаланса в составе белков околоплодных вод. Модификация спектра белков, играющих центральную роль во всех клеточных процессах, несомненно, влияет на нарушение общего гомеостаза в системе «мать — плацента — плод — околоплодные воды», приводящее в дальнейшем к преждевременному развитию родовой деятельности.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Погорелова Т.Н.

Сбор и обработка материала — Никашина А.А., Михельсон А.А.

Статистический анализ данных — Гунько В.О.

Написание текста — Погорелова Т.Н., Никашина А.А., Боташева Т.Л.

Редактирование — Погорелова Т.Н., Никашина А.А., Палиева Н.В.

Исследование выполнено в рамках плановой НИР госзадания «Проведение прикладных научных исследований» от 26.12.20.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Литература / References:

  1. Савельева Г.М., Шалина Р.И., Курцер М.А., Клименко П.А., Сичинава Л.Г., Панина О.Б., Плеханова Е.Р., Выхристюк Ю.В., Лебедев Е.В. Преждевременные роды, как важнейшая проблема современного акушерства. Акушерство и гинекология. 2012;8-2:4-10. 
  2. Савельева Г.М., Курцер М.А., Панина О.Б., Сичинава Л.Г., Алексеенкова М.В., Коноплянников А.Г., Латышкевич О.А. Прегравидарная подготовка в профилактике преждевременных родов. Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2017;16(6):24-29.  https://doi.org/10.20953/1726-1678-2017-6-24-29
  3. Белоцерковцева Л.Д., Коваленко Л.В., Иванников С.Е. Преждевременные роды. Кому помогут токолитики? Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2017;16(2):12-16.  https://doi.org/10.20953/1726-1678-2017-2-12-16
  4. Коваленко А.Е., Калинина Н.И., Алексеенкова М.В., Панина О.Б., Савельева Г.М. Биохимические маркеры угрожающих преждевременных родов. Акушерство и гинекология. 2013; 3:43-47. 
  5. Hassan MI, Kumar V, Singh TP, Yadav S. Proteomic analysis of human amniotic fluid from Rh(–) pregnancy. Prenatal Diagnosis. 2008;28(2):102-108.  https://doi.org/10.1002/pd.1941
  6. Park JS, Oh KJ, Norwitz ER, Han JS, Choi HJ, Seong HS, Kang YD, Park CW, Kim BJ, Jun JK, Syn HC. Identification of proteomic biomarkers of preeclampsia in amniotic fluid using SELDI-TOF mass spectrometry. Reproductive Sciences. 2008;15(5): 457-468.  https://doi.org/10.1177/1933719108316909
  7. Погорелова Т.Н., Гунько В.О., Никашина А.А., Авруцкая В.В., Ларичкин А.В. Информативность содержания и свойств белков-маркеров молекулярно-клеточных процессов в околоплодных водах для оценки состояния фетоплацентарного комплекса. Российский вестник акушера-гинеколога. 2018;18(1):10-14.  https://doi.org/10.17116/rosakush201818110-14
  8. Погорелова Т.Н., Гунько В.О., Никашина А.А., Михельсон А.А., Аллилуев И.А., Ларичкин А.В. Протеиногенные аминокислоты околоплодных вод и их роль в качестве инициаторов преждевременных родов. Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2019;18(2):101-106.  https://doi.org/10.20953/1726-1678-2019-2-101-106
  9. Linder MC. Ceruloplasmin and other copper binding components of blood plasma and their functions: An update. Metallomics: Integrated Biometal Science. 2016;8(9):887-905.  https://doi.org/10.1039/c6mt00103c
  10. Погорелова Т.Н., Гунько В.О., Никашина А.А., Михельсон А.А., Боташева Т.Л., Каушанская Л.В. Нарушение баланса свободных металлов и металлсодержащих белков в околоплодных водах при плацентарной недостаточности. Клиническая лабораторная диагностика. 2021;66(5):266-270.  https://doi.org/10.51620/0869-2084-2021-66-5-266-270
  11. Loukovaara M, Koistinen R, Kalme T, Kurki T, Leinonen P, Seppälä M. Serum insulin-like growth factor-I and insulin-like growth factor binding protein-3 in premature rupture of membranes Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica. 2002;81(10):905-908.  https://doi.org/10.1034/j.1600-0412.2002.811002.x
  12. Than GN, Bohn H, Szabó DG, eds. Advances in Pregnancy-Related Protein Research: Functional and Clinical Application. CRC Press; 2020. https://doi.org/10.1201/9780367812164

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.