Введение

Метод дозревания ооцитов вне организма (in vitro maturation — IVM) основан на получении у пациентов, которым не выполняли гормональную стимуляцию, клеток на стадии GV с дальнейшим дозреванием ооцитов до стадии метафазы II. Широкого распространения этот метод не имеет из-за низкой эффективности и небольшой частоты дозревания клеток, но для некоторых пациентов он является единственной возможностью получения ооцитов. К данной группе относятся женщины с резистентностью яичников к стимуляции, с противопоказаниями к стимуляции из-за онкологических заболеваний, заболеваний сердечно-сосудистой системы. В подобных случаях реализуется программа IVM с последующим оплодотворением клеток и получением эмбрионов. Но существуют группы пациентов, у которых по разным причинам (отсутствие полового партнера, отсутствие согласия партнера на оплодотворение) невозможно криоконсервировать эмбрионы, в таких ситуациях возможна криоконсервация дозревших ооцитов на стадии MII. По мнению G. Fasano и соавт. (2017), в среднем частота дозревания ооцитов от стадии GV до стадии MII составляет 28—87% и зависит от используемых вариантов метода [1]. M.A. Khalili и соавт. (2017) показали, что одинакова доля выживших ооцитов, которые криоконсервировали на стадии GV, и ооцитов, которые дозревали до стадии MII, а потом их криоконсервировали, — она составляет 85—86% [2]. В то же время клетки, которые замораживали на стадии GV, в отличие от клеток, криоконсервированных на стадии MII, позволяют получить меньшую долю бластоцист. M. Grynberg и соавт. (2020) упоминают о небольшом количестве случаев наступления беременности после использования криоконсервированных ооцитов, полученных в программах IVM [3].

Клинический случай

Пациентка, 27 лет, первично обратилась в лечебное учреждение по поводу отсутствия беременности в течение 1 года. Диагноз синдрома поликистозных яичников у пациентки подтвержден согласно Роттердамским критериям пересмотра 2018 г., выявлены клинические и биохимические симптомы гиперандрогении; нарушения менструального цикла (ановуляция), в анамнезе олигоменорея, а также ультразвуковые признаки поликистозных яичников. У мужа нормозооспермия. Пациентка поступила в наше учреждение по транспортной схеме из г. Мурманска с жалобами на отсутствие беременности в течение регулярной половой жизни без контрацепции в браке на протяжении 5 лет. Нарушения менструального цикла по типу олигоменореи, с задержками до 50 дней. Супруги направлены для дообследования и выбора дальнейшей тактики лечения.

По месту жительства ранее проведены три попытки индукции овуляции с применением антиэстрогенных препаратов и одна попытка внутриматочной инсеминации спермой супруга — без результата.

Результаты гормонального исследования крови: во 2-й день менструального цикла содержание антимюллерова гормона составило 20,03 нг/мл, тестостерона (свободного) — 4,7 нмоль/л, лютеинизирующего гормона — 7,8 мМЕ/л, фолликулостимулирующего гормона — 5,8 мМЕ/л. На 20-й день менструального цикла содержание прогестерона — 14 нмоль/л, эстрадиола — 298 пмоль/л, пролактина — 277 мМЕ/л.

Учитывая длительное бесплодие в браке и наличие в анамнезе нескольких безуспешных попыток индукции овуляции и внутриматочной инсеминации, приняли решение провести лечение с применением методов вспомогательных репродуктивных технологий. В связи с высоким риском развития осложнений после овариальной стимуляции яичников (гиперстимуляции) и категорическим отказом пациентки от применения препаратов гонадотропинов запланировано проведение процедуры IVM с последующим оплодотворением дозревших ооцитов нативной спермой супруга. Однако в связи со служебными обстоятельствами муж пациентки не смог остаться в клинике до момента оплодотворения ооцитов, от криоконсервации спермы супруг также отказался, в связи с чем после дозревания до стадии MII ооциты витрифицированы.

Процедура заключалась в следующем. На 8-й день цикла пунктированы фолликулы размером 3—5 мм, получено 13 яйцеклеток на стадии GV. Яйцеклетки помещены в среду IVM (ORIGIO MediCult Media, Дания), содержащую гормоны. Через 24 ч получено 2 яйцеклетки на стадии MII, остальные клетки оставлены дозревать. Через 36 ч дозрели еще 6 клеток, которые заморожены методом витрификации (среды для витрификации Kitazato). Полученные 6 клеток разморожены, выживаемость клеток составила 100%. Ооциты оплодотворены методом инъекции сперматозоида в цитоплазму яйцеклетки, 4 из 6 клеток оплодотворились. Из четырех оплодотворенных зигот до стадии бластоцисты дорос один эмбрион. На 4-й день культивирования осуществлен лазерный хэтчинг оболочки эмбриона. Эмбрион достиг качества 3ВВ (по системе оценки Gardner), на 6-й день культивирования методом биопсии получен образец трофэктодермы.

Анализ биоптата проводили методом NGS (генетический секвенатор MiSeq). Преимплантационное генетическое тестирование на хромосомные аномалии у пациентов молодого возраста выполнено исключительно по желанию супругов с целью исключения эмбрионов с возможным анеуплоидным статусом. В результате полногеномного секвенирования получены данные о том, что эмбрион эуплоидный. Подготовка к переносу криоконсервированного эмбриона выполнена с использованием заместительной гормональной терапии препаратами эстрадиола валерата 6 мг в сутки со 2-го дня менструального цикла и микронизированного прогестерона интравагинально 600 мг в сутки с 14-го дня менструального цикла. Продолжительность поддерживающей терапии препаратами эстрогенов — до 9 нед беременности, прогестероном — до 12 нед беременности. После переноса эмбриона в полость матки наступила клиническая беременность. Угроза прерывания беременности в первом триместре при сроке 9—10 нед купирована в стационаре. Второй и третий триместры беременности протекали без осложнений. Родоразрешение через естественные родовые пути в срок 40,3 нед, масса тела ребенка 3850 г, рост 56 см.

Заключение

Существует потребность в использовании метода созревания яйцеклеток вне организма у пациентов с онкологическими заболеваниями и пациентов, резистентных к гормональной стимуляции. В таких случаях можно криоконсервировать не только эмбрионы, но и ооциты, использование которых в дальнейшем после размораживания дает шанс на получение клинической беременности.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

The authors declare no conflicts for interest.