Милованов А.П.

Лаборатория патологии женской репродуктивной системы НИИ морфологии человека РАМН, Москва

Расстригина И.М.

Лаборатория патологии женской репродуктивной системы ФГБУ "НИИ морфологии человека" РАМН, Москва

Фокина Т.В.

Лаборатория патологии женской репродуктивной системы ФГБУ "НИИ морфологии человека" РАМН, Москва

Морфометрическая оценка плотности распределения и диаметра клеток вневорсинчатого трофобласта в течение условно неосложненной беременности

Журнал: Архив патологии. 2013;75(3): 18-21

Просмотров : 12

Загрузок :

Как цитировать

Милованов А. П., Расстригина И. М., Фокина Т. В. Морфометрическая оценка плотности распределения и диаметра клеток вневорсинчатого трофобласта в течение условно неосложненной беременности. Архив патологии. 2013;75(3):18-21.

Авторы:

Милованов А.П.

Лаборатория патологии женской репродуктивной системы НИИ морфологии человека РАМН, Москва

Все авторы (3)

Цитотрофобластическая инвазия (ЦТИ) — основополагающий механизм становления нормальной беременности. В ЦТИ участвуют три типа клеток — интерстициальный цитотрофобласт (ИЦ) [1—3], многоядерные гигантские клетки (МГК) [4, 5], внутрисосудистый цитотрофобласт (ВЦ). Трофобластические клетки мигрируют из пролифератов в основаниях якорных ворсин [6], проникают вначале в эндометрий, затем в миометрий, лизируя их матрикс. Инвазивные клетки достигают стенок спиральных артерий (не затрагивая вен), разрушают мышечный слой, частично встраиваются в эндотелиальную оболочку сосуда. В итоге происходит трансформация спиральных и радиальных артерий матки в широкие маточно-плацентарные артерии, что сопровождается выходом материнской крови в межворсинчатое пространство плаценты.

По регуляции ЦТИ существует много исследований, в которых дается качественная характеристика инвазивных клеток. Существуют лишь единичные работы, в которых предприняты попытки морфометрии ЦТИ в различные сроки беременности. Классической является работа R. Pijnenborg и соавт. [7], основанная на изучении уникальной коллекции маток, удаленных в течение I триместра и до конца 18-й недели постменструального срока (п.м.). Разделив участок контакта плаценты с маткой (маточно-плацентарная область — МПО) на центральную и периферическую зоны, авторы выявили максимальную плотность инвазивных интерстициальных клеток в центре МПО и показали, что МГК формируются по окончании инвазии и являются тупиковыми клетками. Однако использование срезов, окрашенных гематоксилином и эозином, снижало объективность полученных данных, поскольку ИЦ порой трудно дифференцировать от децидуальных клеток. В 2002 г. была выполнена морфометрия ИЦ, визуализированного с помощью цитокератина-8 на серийных срезах в стандартном объеме МПО в доношенном сроке у женщин с преэклампсией и анемией беременных [8]. В 2010 г. нами охарактеризованы темпы ЦТИ в процессе неосложненной беременности с учетом иммуномаркера цитокератина-7, но без морфометрии [2]. Следует подчеркнуть значительные трудности сбора такого материала по срокам условно неосложненной беременности.

Целью настоящего исследования являлась морфометрическая оценка двух основных видов иммуногистохимически верифицированных инвазивных клеток (ИЦ и МГК) на различных сроках условно неосложненной беременности.

Материал и методы

Для исследования были подобраны следующие группы в зависимости от срока беременности: 1) медицинские аборты (n=5), проведенные по желанию здоровых пациенток на сроке 6—7 нед гестации (после оплодотворения — п.о.); 2) медицинские аборты с 8-й по 9-ю неделю (п.о.; n=5); 3) медицинские аборты с 10-й по 11-ю неделю гестации (п.о.; n=7) и ампутированные матки аналогичного срока (n=2) по поводу артифициальных повреждений во время криминальных абортов; 4) поздние медицинские аборты (n=5) с 22-й по 24-ю неделю п.м. с помощью внутривенного введения энзапроста, произведенные в связи с психическими заболеваниями матери или по социальным причинам; 5) ампутированные матки при крупных миоматозных узлах (n=4; 25-я неделя п.м.); 6) матки при условно неосложненной беременности 31 нед п.м., ампутированные по поводу разрыва по рубцу и крупной миомы (n=2); 7) матки, ампутированные при условно неосложненной беременности по поводу послеродового кровотечения (n=3) и биопсии плацентарного ложа (n=2), взятые во время кесарева сечения по поводу узкого таза (38—40 нед п.м.).

Всего исследовали 35 объектов. В каждом случае отобрано не менее 6 фрагментов. Материал фиксировали в формалине, обрабатывали по стандартной схеме и заливали в парафин. Все препараты окрашивали гематоксилином и эозином для предварительного обзора (микроскоп Leica DM2500) на наличие МПО. После депарафинизации на серийных срезах проводили иммуногистохимическую реакцию с использованием антител к цитокератину-8 (Novocastra, клон TS1, код: RTU-CK8-TS1; система визуализации фирмы «Thermo Scientific Ultravision Detection System Anti-Olyvalent», HRP/DAB). С помощью цитокератина-8 визуализировали два инвазивных элемента: ИЦ — отдельные клетки округлой или вытянутой формы среди желез, децидуальной оболочки и прилежащих пучков миоцитов [1—3] и МГК — клетки, имеющие более 3 ядер с общим ободком иммуноэкспрессии цитокератина [4, 5]. ВЦ оценивали только качественно, так как для его адекватной морфометрии нужно больше материала.

Определяли плотность распределения ИЦ и МГК в 110 стандартных полях зрения при увеличении 200. Рассчитывали площадь поля зрения (785 000 мкм2). Для исследования величины инвазивных клеток определяли цену деления линейки в 1 мкм при увеличении 200, а затем измеряли их поперечный размер в плоскости среза, проходящей через ядро. Для этого исследования было пригодно большее количество полей зрения (188 полей), в каждом из которых исследовали по 5 клеток МГК и ИЦ. Статистическую обработку данных из-за неоднородности материала и разных интервалов гестационных сроков не проводили.

Результаты

На сроке 6—7 нед гестации (п.о.) соскобы из полости матки при медицинских абортах представляли собой разрозненный материал, в котором мы находили МПО по наличию слоя фибриноида Рора на границе межворсинчатого пространства и децидуальной оболочки матки, якорных ворсин, прилежащих непосредственно к слою фибриноида, а также инвазивных клеток по визуализации цитокератином-8. С его помощью четко выявляются группы ИЦ, плотно расположенного в зоне поверхностного фибриноида и распространяющегося вглубь децидуальной оболочки с концентрацией вокруг спиральных артерий. ИЦ проникает в стенку артерий, некоторые клетки выходят на линию эндотелия, в отдельных местах замещая его. МГК также достигают адвентиции спиральных артерий, но не проникают в их стенки. В целом плотность распределения двух типов инвазивных клеток достаточно велика, с явным преобладанием ИЦ (табл. 1).

Форма и величина ИЦ разнообразны. Величина поперечного диаметра ИЦ на в этом сроке минимальна и в среднем составляет около 12 мкм, а МГК — 23 мкм (табл. 2).
Таким образом, речь идет о начальном этапе ЦТИ с многократным преобладанием мелкого ИЦ. Клетки другого типа — МГК встречаются в 14—15 раз реже, обычно в более глубоких отделах децидуальной оболочки и составляют до 15 клеток в стандартной величине среза.

На 8—9-й неделе гестации п.о. плотность распределения ИЦ увеличилась за счет перехода этих клеток из поверхностной зоны фибриноида в область спиральных артерий (см. табл. 1). Они чаще «атакуют» стенки сосудов и выявляются на линии эндотелиального слоя с постепенным его замещением. В отдельных спиральных артериях начинается формирование цитотрофобластических пробок, но с частичным сохранением просвета. Отмечено незначительное увеличение размера ИЦ при сохранении такого же диапазона разброса, как в предыдущей группе (см.табл. 2). Количество МГК в стандартной площади среза несколько уменьшилось (см. табл. 1), а диаметр — незначительно увеличился (см. табл. 2). Просвет спиральных артерий стал шире за счет лизиса эластомышечных элементов.

В конце I триместра беременности (10—11 нед. п.о.) плотность распределения ИЦ достигает максимального значения в диапазоне от 129 до 468 клеток в стандартном поле. Клетки проникают вглубь децидуальной оболочки через зону гибнущих эндометриальных желез, выявляются в просветах преформированных спиральных артерий (см. рисунок, а)

Рисунок 1. Иммуногистохимическая визуализация интерстициального цитотрофобласта и многоядерных гигантских клеток в разные сроки условно неосложненной беременности. а — 11—12 нед п.о. — высокая плотность интерстициального трофобласта с проникновением его в просветы спиральных артерий (×) цитокератин-8, ×100; б — 39—40 нед п.м. — единичный сохранившийся цитотрофобласт, цитокератин-8, ×100; в — 11—12 нед п.о. — многоядерные клетки и интерстициальный трофобласт среди пучков миоцитов, цитокератин-8, ×200; г — 39—40 нед п.м. — сохранение многоядерных гигантских клеток с увеличением их диаметра в два раза, цитокератин-8, ×200.
в виде рыхлых цитотрофобластических пробок. Это свидетельствует о возможности проникновения небольших порций материнской крови через частично обтурированные пробками сосуды в межворсинчатое пространство. МГК стало меньше в поле зрения, но их размеры несколько увеличились (см. табл. 2; рисунок, в). Изучение плацентарного ложа 5 удаленных маток на этом же гестационном сроке существенно дополнило картину ЦТИ: на границе эндометрия и первых пучков миоцитов наблюдалось скопление ИЦ и МГК, которые уже достигают адвентиции более крупных радиальных артерий, но еще не проникают в их стенки.

На 22—25-й неделе п.м. в МПО чуть снижается плотность распределения ИЦ с некоторым увеличением их размеров, а также плотность распределения МГК, которые проникают за пределы первых пучков миоцитов и достигают радиальных артерий, расположенных во внутренней трети миометрия. Мощным дополнительным механизмом инвазии становится ВЦ, который выявляется во многих радиальных артериях и способствует расширению их просветов. Информацию о данной группе женщин существенно дополнили 4 случая ампутированных маток, в которых выявлены сходная плотность распределения ИЦ и его инвазия по соединительнотканным прослойкам вглубь миометрия.

В двух ампутированных матках на 31-й неделе п.м. отмечено уменьшение плотности распределения ИЦ в 2,5 раза (см. табл. 1), но его проникновение в мышечную стенку радиальных артерий при сохранении количества МГК с преимущественной их локализацией в средней трети миометрия.

На 38—40-й неделе п.м. беременности отмечается резкое уменьшение плотности распределения ИЦ (см. табл. 1) при явном уменьшении иммуноэкспрессии цитокератина-8 (см. рисунок, б), отсутствии в широких радиальных артериях ВЦ, увеличении плотности распределения МГК (см. табл. 1 и 2) и их максимального размера (см. рисунок, г).

Заключение

Несмотря на разнородность исследованного материала и относительную условность физиологического течения беременности, впервые с помощью морфометрии ИЦ и МГК в стандартном поле зрения МПО удалось детализировать клеточный состав ЦТИ. Оказалось, что максимальная плотность инвазивных клеток с огромным преобладанием ИЦ регистрируется в I триместре беременности, т.е. в период гестационной перестройки спиральных артерий в составе децидуальной оболочки (первая условная волна ЦТИ). Количество МГК оказывается минимальным в стандартной площади среза. По данным некоторых исследователей [9], современные эхосканеры визуализируют кровоток в резко расширенных спиральных артериях и межворсинчатом пространстве плаценты с 8—9-й недели п.о. с увеличением объема материнской крови в конце I триместра, что соответствует максимальному значению ИЦ (см. табл. 1). В середине беременности плотность инвазирующего ИЦ уменьшается при незначительном приросте МГК и их диаметров. В III триместре цитотрофобластическая инвазия резко замедляется со снижением в 2,5 раза плотности ИЦ на 31-й неделе п.м. и в 4 раза — в конце беременности. Плотность распределения и размеры МГК, напротив, постепенно растут и достигают максимума на 38—40-й неделе. Путем перерасчета фактической площади среза и плотности распределения ИЦ (2,44) в работе М. Кадырова [8] получены результаты (2,05) в МПО в конце беременности, сопоставимые с нашими данными. Эти морфометрические данные являются первым этапом в изучении ЦТИ при разнообразной акушерской патологии.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail