Увеальная меланома (УМ) — одна из наиболее часто встречающихся внутриглазных злокачественных опухолей. Несмотря на значительный прогресс в области лучевой и химиотерапии УМ, примерно у 40-50% пациентов с большим первичным опухолевым узлом развиваются отдаленные метастазы, а смерть от опухолевой прогрессии наступает в первые годы после операции. В связи с отсутствием лимфатического дренирования увеального тракта, УМ метастазирует только гематогенным путем преимущественно в печень (95%), легкие (24%), кости (16%) и кожу (11%). В последнее 10-летие активно обсуждаются увеличение доли молодых пациентов (до 20-35 лет) с диагнозом УМ на фоне общего снижения возрастной планки при постановке диагноза (от 55-60 лет) и влияние различных морфологических факторов на прогноз в этой группе. При этом активно изучается экспрессия различных иммуногистохимических маркеров (Ki-67, p53 и p16, TGFb и EGFR, и MMP9) и их роль в патогенезе меланомы сосудистого тракта.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Определить иммуногистохимические особенности УМ в зависимости от гистологического типа, степени инвазии и возраста пациентов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Исследование проведено на архивном материале от 42 пациентов МНИИ глазных болезней им. Г. Гельмгольца за период с января 2011 по июль 2012 г. Из них 24 мужчины и 18 женщин в возрасте от 15 до 74 лет (основной возраст постановки диагноза 58 лет, средний возраст 44,5 года). Все пациенты были разделены на 3 возрастные группы: до 35 лет (7 пациентов), от 35 до 55 лет (13 пациентов) и от 55 лет (22 пациента). Образцы опухоли, взятые из боковой колодки глаза после энуклеации, фиксировали в 10% забуференном формалине в течение 24-72 ч и заливали в парафиновые блоки. С каждого блока были изготовлены 4-μк срезы, которые монтировали на высокоадгезивные стекла. Иммуногистохимическое окрашивание и обработку материала проводили с использованием автостейнера Dako. Депарафинирование и регидратацию проводили с помощью системы En Visison Flex ("Dako", Дания) при температуре 95-98 °С и pH 9,0 в течение 20 мин в модуле предобработки к автостейнеру (PT-module). В качестве хромогена использовали DAB. Анализ результатов проводился с использованием программы Stata 12 по методу Краскела-Уоллиса, который является многомерным обобщением U-теста Манна-Уитни для ранговых данных. Для оценки уровня корреляции использовался тест Спирмена, который также является ранговым. Уровень значимости (р) принимался равным 0,1 для каждого из методов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В результате исследования подтвердилось наличие достоверной корреляции между количеством митозов и высокой экспрессией TGFb (по тесту Спирмена p=0,059), при этом уровень экспрессии TGFb обратно пропорционален уровню p16. Генетические исследования зарубежных авторов выявили, что для пациентов с УМ характерно наличие мутаций в хромосоме 3p22, которая кодирует в том числе ген TGFbR2, который в свою очередь ведет к изменениям в SMAD-каскаде (а именно SMAD типов 2, 3 и 4), запускающих синтез целого семейства ингибиторов Cdk. На основании приведенных данных можно предположить, что полученные результаты свидетельствуют в пользу того, что патогенез УМ напрямую связан с мутациями в генах, кодирующих TGFb и его рецепторы, которые ведут к нарушению регуляции клеточного цикла через угнетение синтеза p16 и как следствие увеличению количества митозов. Нами установлено, что высокий уровень экспрессии p16 ассоциирован с более поздним выявлением УМ (по тесту Краскела-Уоллиса p=0,068). На основании вышеизложенного можно сделать вывод, что в норме с возрастом количество p16 должно увеличиваться, угнетая тем самым пролиферацию меланоцитов пигментного эпителия сетчатки. Но с увеличением возраста пациента вероятность диагностировать УМ резко возрастает. Более того, по нашим данным не выявлено корреляции между уровнем p16 и степенью атипии в опухоли (по тесту Краскела-Уоллиса p=0,924). Для подтверждения гипотезы необходимо проведение дальнейших генетических исследований мутаций в гене p16 с учетом возраста постановки диагноза. Относительно влияния различных маркеров на клеточный тип опухоли, нами выявлена тенденция к увеличению уровня EGFR с уменьшением доли эпителиоидных клеток в опухоли (по тесту Краскела-Уоллиса p=0,1). Помимо этого, высокая экспрессия MMP9 коррелирует с более благоприятным клеточным типом опухоли (по тесту Краскела-Уоллиса p=0,1), что противоречит данным литературы о наличии связи между высоким уровнем MMP9 и EGFR и большей доли эпителиоидных клеток в опухоли. Примечательно, что экспрессия маркеров MMP9, TGFb и EGFR связана с начальным этапом инвазии опухоли в структуры глаза. Наши данные противоречат существующей в литературе гипотезе об активации MMP9 на более поздних этапах диссеминирования УМ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании полученных результатов можно предположить, что возможное использование таргетных препаратов рациональнее всего проводить при более доброкачественных формах УМ и начальных этапах инвазии как возможный способ избежать энуклеации пораженного глаза.