Влияние циклоферона на цитокиновый профиль крови и продукцию провоспалительных цитокинов в культурах мононуклеаров периферической крови больных хроническим тонзиллитом

В настоящее время хронический тонзиллит (ХТ) является одной из наиболее важных проблем современной оториноларингологии, что вызывает повышенный интерес к изучению его патогенеза [1—3]. Так, существенное внимание уделяется сдвигам цитокинового профиля крови (ЦПК) у больных с ХТ и другой патологией ЛОР-органов [4]. В работах последних лет особенности клинического течения и исходов ХТ соотносят с иммунным статусом больных хронической тонзиллярной патологией и динамикой иммунологических показателей под влиянием проводимого лечения [5]. Так, наблюдающееся за последнее время существенное возрастание частоты возникновения гнойно-некротических осложнений ХТ связывают с наличием вторичных иммунодефицитных состояний, в том числе на фоне сахарного диабета и ожирения [6]. Именно иммунным нарушениям у больных ХТ придается наиболее важное значение в патогенезе формирования как тонзиллярной патологии, так и ее осложнений [7, 8].

В наших предыдущих исследованиях конкретизированы некоторые основные механизмы иммунологических расстройств в патогенезе ХТ и повторных ангин [9—12]. В ходе разработки рациональных подходов к патогенетически обоснованной терапии больных с обострениями ХТ было установлено, что применение общепринятых медикаментозных препаратов, и прежде всего антибиотиков, при лечении больных с данной патологией не только не обеспечивает восстановление иммунологического гомеостаза, но, напротив, может способствовать усугублению иммунодефицита [5, 12].

При разработке патогенетически обоснованных подходов к терапии ХТ наше внимание привлекла возможность использования современного иммунотропного препарата циклоферона (производство ООО «Полисан», РФ), который обладает также противовоспалительной активностью [13].

Циклоферон — препарат, который относится к гетероароматичным соединениям класса акридионов, обладающий интерферониндуцирующими свойствами [13]. В экспериментальных условиях и клинических исследованиях установлена способность циклоферона регулировать антителообразование, естественную киллерную активность Т-лимфоцитов и стимулировать фагоцитоз, что сочетается с выраженным противовоспалительным эффектом препарата. Иммуномодулирующий эффект циклоферона проявляется в коррекции иммунного статуса организма при иммунодефицитных состояниях различного генеза, при этом в зависимости от типа нарушений имеет место активация тех или других звеньев иммунной системы [14]. Известны отдельные работы, касающиеся оценки эффективности местного применения циклоферона в профилактике обострений ХТ и синуситов [15], однако механизмы его фармакологического действия у больных ХТ остаются недостаточно изученными.

Цель настоящей работы — оценка эффективности современного иммунотропного препарата циклоферона при лечении больных ХТ.

Под наблюдением было 88 больных с обострениями ХТ, из них 40 мужчин и 48 женщин в возрасте от 19 до 56 лет. С учетом существенной роли бактериологических исследований в диагностике ХТ [16] и ведущей роли стрептококковой инфекции в тонзиллярной патологии [17] нами были отобраны пациенты с установленным этиологическим диагнозом ХТ. При проведении бактериологического исследования содержимого лакун небных миндалин были выделены следующие возбудители: Str. рyogenes — 45 (51,1%) штаммов, Str. angunosus — 24 (27,3%) культуры, Str. viridans — 19 (21,6%) штаммов.

Обследованные больные были объединены в две группы — 1-ю (основную — 46 лиц) и 2-ю (контрольную — 42 пациента), рандомизированные по полу, возрасту, тяжести течения обострения и этиологии ХТ. Лечение пациентов обеих групп включало антибактериальные препараты (антибиотики пенициллинового ряда или цефалоспорины (при отсутствии в анамнезе аллергических реакций); противовоспалительные (мефенаминовая кислота) и антигистаминные препараты (цетрин, лоратидин, фенкарол и др.), аскорутин или аскорбиновую кислоту [11]. В основной группе пациентов дополнительно к общепринятой терапии назначали циклоферон внутримышечно в виде 12,5% раствора по 2 мл 1 раз в день на протяжении 5 дней подряд, далее по 2 мл через день осуществляли еще 5—7 инъекций препарата. При необходимости в дальнейшем в амбулаторных условиях использовали поддерживающую дозу циклоферона — по 150 мг препарата 2 раза в неделю внутрь на протяжении 2—4 нед.

Для реализации цели исследования в обеих группах обследованных изучали уровень провоспалительных цитокинов (ЦК) — IL-1β и TNFα, а также их продукцию в системе in vitro. Определение концентрации IL-1β и TNFα в сыворотке крови и в надосадочной жидкости культур мононуклеаров после ее центрифугирования осуществляли методом иммуноферментного анализа (ИФА) на иммуноферментном анализаторе PR2100 фирмы «Sanofi Diagnostic Pasteur» (Франция) с использованием наборов для ИФА производства ООО «Протеиновый контур» (РroCon) (СПб, Россия) — РroConIL-1β и РroConTNFα [18]. Инкубация клеточной суспензии мононуклеаров периферической крови с концентрацией клеток 1,5·10⁶/мл среды осуществлялась в течение суток в СО₂-инкубаторе при температуре +30 °С [19]. При этом инкубация каждой клеточной культуры проводилась в двух вариантах: без стимуляции (для определения спонтанной продукции ЦК) и со стимуляцией фитогемагглютинином (ФГА). Статистическую обработку полученных цифровых данных осуществляли на персональном компьютере Intel Core 2 Duo с использованием одно- и многофакторного дисперсионного анализа (применялись пакеты лицензионных программ Microsoft Windowsxp professional, Microsoft Office 2007, Microsoft Excel Stadia 6.1 Statistica); при этом учитывались принципы использования статистических методов в оценке клинической эффективности лекарственных средств [20].

При проведении иммунологических исследований на фоне клинической манифестации обострения ХТ установлено, что содержание изученных провоспалительных ЦК в сыворотке крови пациентов обеих групп до начала лечения было существенно повышенным. Так, при норме концентрации TNFα 39,6±2,1 пг/мл, в этот период обследования уровень TNFα в сыворотке составлял у больных 1-й группы 216,5±9,4 пг/мл, т.е. был повышен в среднем в 5,47 раза (p<0,001), а во 2-й группе — 208,6±8,6 пг/мл, что в 5,27 раза превышало норму (p<0,001). Уровень IL-1β в сыворотке крови при норме 18,8±1,3 пг/мл был повышен в основной группе в среднем в 4,6 раза относительно нормы и составлял 86,5±3,6 пг/мл (p<0,001), в группе сопоставления концентрация IL-1β была повышена в 4,44 раза относительно нормы и равнялась при этом 82,7±3,5 пг/мл (p<0,001).

Спонтанная продукция IL-1β в культуре мононуклеаров у больных ХТ 1-й группы была повышена в среднем в 6,17 раза относительно нормы (p<0,001) и составляла в среднем 227,3±4,6 пг/мл, во 2-й группе уровень спонтанной продукции IL-1β был в 5,93 раза выше нормы (p<0,001) и равнялся 218,1±5,4 пг/мл. При стимуляции ФГА продукции IL-1β уровень данного ЦК в надосадочной жидкости увеличивался у больных ХТ 1-й группы в среднем в 1,2 раза по сравнению с исходной концентрацией (p<0,05), во 2-й группе — в 1,27 раза (p<0,05). При этом содержание IL-1β в надосадочной жидкости культур мононуклеаров у больных 1-й группы превышало норму в 2,56 раза (p<0,001), а во 2-й группе — в 2,62 раза (p<0,001). Поскольку у практически здоровых лиц кратность увеличения продукции IL-1β мононуклеарами при стимуляции ФГА составляла 2,88±0,12 раза, можно считать, что при существенном повышении исходной спонтанной продукции данного ЦК ответ на стимуляцию мононуклеаров введением в клеточную культуру ФГА у больных ХТ был существенно снижен — в среднем в 2,4±0,12 раза в 1-й группе (p<0,001) и в 2,27±0,11 раза во 2-й группе (p<0,001).

Аналогичная тенденция была выявлена при изучении способности клеточных культур мононуклеаров периферической крови больных ХТ к синтезу TNFα. Уровень спонтанной продукции данного ЦК в основной группе был в 2,88 раза выше нормы (p<0,001) и составлял в среднем 140,2±4,2 пг/мл, в группе сопоставления спонтанная продукция TNFα была в 2,8 раза выше нормы и достигала 136,7±4,8 пг/мл (p<0,001). При стимуляции продукции TNFα путем введения ФГА в клеточную культуру мононуклеаров уровень данного ЦК в надосадочной жидкости увеличивался у больных 1-й группы в среднем в 2,26 раза по сравнению с исходной концентрацией (p<0,001), у больных 2-й группы — в 2,35 раза (p<0,001). У больных ХТ 1-й группы уровень данного ЦК составлял в среднем 316,4±3,5 пг/мл, что было в 2,2 раза выше нормы (p<0,001), у больных 2-й группы — в среднем 320,6±2,4 пг/мл, что превышало норму в 2,25 раза (p<0,001). Поскольку у практически здоровых лиц кратность увеличения спонтанной продукции TNFα в клеточных культурах мононуклеаров составляет 2,9±0,12 раза, выявлено достоверное увеличение спонтанной продукции этого ЦК у больных ХТ, что характерно для заболеваний с наличием хронического воспалительного процесса [21]. В то же время ответ на стимуляцию мононуклеаров больных ХТ неспецифическим митогеном (ФГА) можно считать существенно сниженным, поскольку кратность увеличения концентрации TNFα в ответ на стимуляцию ФГА в 1-й группе была ниже нормы в 1,3 раза (p<0,05) и во 2-й группе — в 1,29 раза (p<0,05).

Было установлено позитивное влияние иммуноактивного препарата циклоферона на уровень провоспалительных ЦК у больных ХТ. Так, в 1-й группе больных, которые получали циклоферон, отмечено снижение содержания TNFα и IL-1β в сыворотке крови до верхней границы нормы (p>0,05). При этом концентрация TNFα на момент завершения лечения с применением циклоферона составляла в среднем 45,1±2,5 пг/л, т.е. в ходе лечения снижалась в 4,8 раза (p<0,001). Во 2-й группе в процессе терапии обострения ХТ концентрация TNFα снижалась в среднем в 3,7 раза по сравнению с исходным показателем, однако при этом оставалась достоверно выше нормы в 1,42 раза (p<0,05), составляя при этом 56,4±2,1 пг/мл. Уровень TNFα в этот период обследования в сыворотке крови у больных 1-й группы был в среднем в 1,25 раза ниже, чем у пациентов 2-й группы (p<0,05) и соответствовал верхней границе нормы.

Концентрация IL-1β в сыворотке крови на момент завершения лечения у больных 1-й группы равнялась в среднем 24,6±2,5 пг/мл, т.е. снижалась по сравнению с исходным уровнем в 3,5 раза (p<0,001) и при этом достигала верхней границы нормы. Во 2-й группе уровень IL-1β в сыворотке крови снижался в ходе лечения в 2,0 раза, однако составлял 41,4±2,3 пг/мл, т.е. сохранялся на уровне, превышавшем норму в 2,2 раза (p<0,01). В целом на момент завершения лечения уровень IL-1β в сыворотке крови больных 1-й группы (которая получала циклоферон) был в среднем в 1,68 раза ниже, чем у пациентов 2-й группы (p<0,05).

В ходе лечения у больных 1-й группы спонтанная продукция IL-1β в культурах мононуклеаров снижалась по сравнению с исходным уровнем в среднем в 5,7 раза и составляла 39,9±1,5 пг/мл, что не отличалось от нормы (p>0,05). Стимулируемая продукция IL-1β у пациентов 1-й группы на момент завершения терапии уменьшалась в среднем в 2,37 раза и составляла 114,7±2,8 пг/мл, что соответствовало верхней границе нормы (p>0,05). У больных 2-й группы спонтанная продукция IL-1β снижалась в ходе терапии в 3,65 раза и составляла при этом 59,8±2,2 пг/мл, что, однако, превышало соответствующий показатель нормы в среднем в 1,63 раза (p<0,05). Стимулируемая ФГА продукция IL-1β в культурах мононуклеаров больных ХТ 2-й группы на момент завершения лечения составляла в среднем 84,8±1,9 пг/мл, что было в 3,28 раза меньше исходного значения данного показателя и одновременно в 1,25 раза ниже уровня IL-1β у пациентов 1-й группы (p<0,05).

На момент завершения лечения у больных ХТ 1-й группы уровень спонтанной продукции TNFα составлял 51,9±1,6 пг/мл, что достоверно от нормы не отличалось (p<0,05). В то же время у пациентов 2-й группы этот показатель равнялся 64,4±1,8 пг/мл, что превышало норму в 1,33 раза (p<0,05). Стимулируемая ФГА продукция TNFα в культурах мононуклеаров периферической крови больных 2-й группы на момент завершения лечения равнялась в среднем 88,1±2,2 пг/мл, что было в 3,44 раза ниже исходного уровня и в 1,69 раза ниже соответствующего показателя в 1-й группе (p<0,01).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что включение современного иммуноактивного препарата циклоферона у больных ХТ патогенетически обоснованно и клинически перспективно, поскольку его применение способствует нормализации концентрации провоспалительных ЦК (TNFα, IL-1β) в сыворотке крови и их продукции в культурах мононуклеаров периферической крови пациентов.

1. При проведении иммунологических исследований в периоде обострения ХТ установлено повышение содержания провоспалительных ЦК (TNFα, IL-1β) в сыворотке крови. Одновременно выявлено повышение спонтанной продукции данных ЦК в культурах мононуклеаров периферической крови.

2. Включение циклоферона в число средств лечения обострения ХТ обусловило снижение содержания TNFα и IL-1β в сыворотке крови до верхней границы нормы. Уровень спонтанной и стимулируемой продукции IL-1β и TNFα в культурах мононуклеаров периферической крови у больных основной группы, получавшей циклоферон, в ходе лечения также нормализовались. В группе сопоставления динамика изученных иммунологических показателей была менее выраженная и на момент завершения лечения они достоверно отличались от нормы.

3. Полученные данные свидетельствуют, что включение современного иммуноактивного средства циклоферона у больных ХТ патогенетически обоснованно и клинически перспективно.