Роль полиморфизма A/C гена AGTR1 в развитии фибрилляции предсердий

ВФП — вторичная фибрилляция предсердий

ПФП — первичная фибрилляция предсердий

ПЦР — полимеразная цепная реакция

ФП — фибрилляция предсердий

Фибрилляция предсердий (ФП) — одна из самых распространенный аритмий. Распространенность данной патологии составляет 1—1,5% в общей популяции и увеличивается с возрастом, а в группе лиц старше 65 лет достигает 6% [1]. ФП служит причиной тромбоэмболических осложнений, сердечной недостаточности. ФП увеличивает риск развития инсульта в 5 раз и в 2 раза смертность у больных инсультом, связанным с ФП [2]. ФП является гетерогенным заболеванием и многими авторами доказана ее связь с другими генетическими заболеваниями сердца. В большинстве случаев возникновению ФП способствуют определенные сочетания полиморфизмов различных генов. Поэтому скрининг генов подверженности, изучение их полиморфизма становится в настоящее время важным направлением в исследовании Ф.П. Лучшее понимание молекулярных и электрофизиологических механизмов, которые лежат в основе развития ФП в семьях и среди населения в целом, будет способствовать появлению новых подходов в диагностике, лечении и профилактике заболевания.

В настоящее время молекулярные исследования ФП сосредоточены в основном в 2 направлениях: 1) выявление генов, мутации в которых приводят к возникновению аритмии (наследование таких аритмий осуществляется по классическому менделевскому типу); 2) изучение полиморфизма различных генов, так называемых генов-кандидатов. Скрининг таких генов, изучение их полиморфизма — важнейшее направление современной генетики. Цель этих исследований идентифицировать не только триггерные факторы, ответственные за возникновение острых форм ФП, но и факторы, ответственные за ее хронизацию [3].

Целью исследования является изучение полиморфизма А/С гена АGTR1, ассоциированного с ФП, для создания групп риска пациентов, подверженных развитию данного заболевания.

Обследовали 90 пробандов с подтвержденным диагнозом ФП и 144 их родственников I, II, III степени родства. Данные семьи составили основную группу исследования. Набор пациентов осуществляли за период их амбулаторного или стационарного лечения в кардиологическом отделении КГБУЗ КМКБ № 20 им. И.С. Берзона. Родственников выявляли путем их активного посещения на дому с последующим вызовом в амбулаторно-консультативное отделение и отделение ультразвуковой и функциональной диагностики КГБУЗ КМКБ № 20 им. И.С. Берзона.

Критерием включения в основную группу исследования являлся подтвержденный диагноз ФП и I—III степень родства по отношению к пробанду.

Критерии включения в основную группу: любой возраст; проживание в Красноярске; подтвержденный диагноз ФП для пробандов; подтвержденный диагноз ФП для родственников пробанда; отсутствие ФП в анамнезе для родственников пробанда; способность больного выполнять необходимые процедуры; согласие пациента на исследование.

Критерии отказа от включения в исследование: наличие у пациента родственных связей с исследователем.

Критерии исключения: проживание в других регионах РФ; нежелание выполнять процедуры; отказ от включения в исследование.

Структура исследования сформирована согласно Национальному стандарту РФ «Надлежащая клиническая практика», ГОСТ P 52379—2005 (утвержден приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии № 232-ст от 27.09.2005).

Всех пробандов разделили на 2 группы: 1-я — семьи пробандов с первичной ФП (ПФП). Возникновение Ф.П. у пробанда не имело связи с каким-либо сердечно-сосудистым заболеванием или другими заболеваниями, осложнением которых может стать ФП; 2-я — семьи пробандов с вторичной ФП (ВФП). Случаи возникновение ФП у пробандов в этих семьях имели четкую связь с каким-либо сердечно-сосудистым заболеванием или заболеванием, имеющим отношение к возникновению нарушения ритма сердца.

В табл. 1 представлены половозрастная характеристика 40 пробандов с первичной ФП, а также их деление на мужчин (n=26) и женщин (n=14), их средний возраст, стандартное отклонение, минимальный и максимальный возраст в данной группе. Половозрастная характеристика родственников I—III степени родства пробандов с первичной ФП, а также их разделение на группы больных родственников (имеющие ФП) и здоровых родственников отражены в табл. 2. В табл. 3 содержатся половозрастная характеристика 50 пробандов с ВФП, а в табл. 4 : данные о возрасте родственников I—III степени родства пробандов с ВФП и их разделении на группы больных родственников (имеющие ФП) и здоровых родственников.

Всем обследованным проведен молекулярно-генетический анализ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). При оценке полиморфных аллельных вариантов изучаемых генов у больных с ФП и их родственников для сравнения использовали контрольную группу, сформированную из относительно здоровых людей без сердечно-сосудистых заболеваний в анамнезе. Данную группу составили 100 человек, у которых также проведено молекулярно-генетическое тестирование. Медиана возраста лиц контрольной группы составила 49,5 (45; 55) года. Изучение полиморфных аллельных вариантов исследуемых генов проводили с помощью амплификации соответствующих участков генома методом ПЦР, используя структуру праймеров и параметры температурных циклов, описанных в литературе [4].

При статистической обработке материала использовали стандартный алгоритм статистических процедур [5], при этом методы статистической обработки применяли в зависимости от характера учетных признаков и числа групп сравнения. Для определения характера распределения количественных показателей использовали критерий Шапиро—Уилкса. В отсутствие нормального распределения описательная статистика представлена в виде медианы и перцентилей. При нормальном распределении показателей использована описательная статистика, представленная в виде среднего значения и стандартной ошибки среднего. Достоверность различий нормально распределенных показателей в сравниваемых группах определяли с использованием критерия t Стьюдента [6].

Качественные критерии представлены в виде процентных долей с указанием стандартной ошибки доли [7]. Для определения статистической значимости различий между качественными признаками применяли критерий χ². Если ожидаемые частоты были менее 5, то использовали точный критерий Фишера. Критический уровень значимости (p) при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимали равным 0,05. Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета прикладных программ Excel и SPSS 22.

Соответствие распределения наблюдаемых частот генотипов исследуемых генов в группе контроля, теоретически ожидаемого по равновесию Харди—Вайнберга, оценивали по критерию χ². Вычисление проводили с помощью онлайн-калькулятора: http://www.oege.org/software/hwe-mr-calc.shtml [8].

В соответствии с Хельсинкской декларацией для проведения исследования получено разрешение локального этического комитета при КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, а также информированное согласие на проведение молекулярно-генетического исследования (протокол № 54 от 10.02.2014).

С целью изучения роли полиморфизма А/С гена AGTR1 в развитии ФП, нами обследованы 90 пробандов с ФП, 144 их родственника I—III степени родства и 100 человек контрольной группы. Всех пробандов разделили на 2 группы в зависимости от этиологии развития ФП (ПФП и ВФП).

Ни рис. 1, а представлено распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма А/С гена AGTR1 среди пробандов с первичной ФП и лиц контрольной группы. Преобладала частота гомозиготного генотипа по распространенному аллелю, А как среди пробандов с первичной ФП — 55±7,9%, так и среди лиц контрольной группы — 61±4,9%.

При изучении распределения частот генотипов и аллелей полиморфизма А/С гена АGTR1 среди больных родственников пробандов с ПФП и лиц контрольной группы установлено преобладание носителей гетерозиготного генотипа АС среди больных родственников — 63,6±14,5%. В контрольной группе установлено преобладание носителей гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю — 61±4,9% (см. рис. 1, б).

Ни рис. 2, а представлено распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма А/С гена АGTR1 среди пробандов с ВФП и лиц контрольной группы. Среди пробандов с ВФП 72±6,3% являлись носителями гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю. Среди лиц контрольной группы также преобладал гомозиготный генотип АА по распространенному аллелю — 61±4,9%.

При анализе распределения частот генотипов и аллелей полиморфизма А/С гена АGTR1 среди больных родственников пробандов с ВФП и лиц контрольной группы установлено преобладание частоты гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю — 57,1±18,7 и 61±4,9% соответственно (см. рис. 2, б).

По результатам исследования не выявлено статистически значимых данных о взаимосвязи полиморфизма А/С гена AGTR1 и развитием ФП ни в одной группе больных. Результаты нашего исследования противоречат данным зарубежных исследований. Так, китайскими учеными получены данные, что аллель С гена AGTR1 значительно увеличивает риск развития ФП [9]. Полученные результаты могут быть обусловлены генетическими особенностями сибирской популяции, зависящими от климатических условий, географии проживания и подтверждают, что ФП является гетерогенным заболеванием. Кроме того, имеет большое значение важность мультилокусного и мультигенного подхода при определении риска развития таких мультифакторных заболеваний, как ФП.

По результатам проведенного исследования не установлено статистически значимых различий между больными основной группы и лицами группы контроля. Полученные нами данные свидетельствуют о гетерогенности ФП и подтверждают мультифакторный характер заболевания.

Авторы заявляют об отсутствии конфликтаинтересов.