Витрификация овариальной ткани как метод сохранения ооцитов ранних стадий развития

Потеря детородной функции в репродуктивном возрасте является разрушительным событием в жизни женщины. Причиной служат хирургические вмешательства и гонадотоксическая терапия по поводу онкологической и неонкологической патологии. Таким образом, сохранение репродуктивного потенциала указанных групп пациенток является актуальной задачей репродуктивной медицины.

Цель исследования — разработать методику витрификации овариальной ткани с последующим контролем ее эффективности на лабораторных животных.

Витрифицировано 14 фрагментов коркового слоя яичника женщин в возрасте от 21 года до 30 лет с нормальным овариальным резервом, с диагнозом: эндометриоз, доброкачественные кисты яичников, пограничная цистаденома яичника, рак яичника, рак шейки матки. Для витрификации использовались проникающие и непроникающие криопротекторы, белковый заменитель, буферный раствор (Sigma Aldrich). Гистологическое исследование с окраской гематоксилином и эозином было проведено до витрификации и после размораживания овариальной ткани. Проводилось культивирование фрагментов овариальной ткани после размораживания с исследованием уровня эстрадиола в культуральной среде через 24 и 72 ч. Лабораторные животные: 4 самки кроля с исходным уровнем эстрадиола 40±5 пг/мл, у которых после удаления яичников с двух сторон уровень эстрадиола составил менее 1,5 пг/мл, что стало признаком синдрома преждевременного истощения яичников. Далее животным была произведена ортотопическая (в широкую связку матки, брюшину передней брюшной стенки) и гетеротопическая (в карманы подкожной жировой клетчатки) ксенотрансплантация размороженных фрагментов коркового слоя овариальной ткани женщин. У животных проводился мониторинг уровня эстрадиола, прогестерона. Через 3,5 мес животным произведена лапаротомия с целью оценки развития фолликулогенеза.

После размораживания проанализировано 14 гистологических препаратов фрагментов овариальной ткани с окраской гематоксилином и эозином. Суммарное количество примордиальных и первичных фолликулов составило 155, в том числе 146 (93,5%) — с нормальной морфологией; 9 (6,5%) — с признаками повреждения (разрывы базальной мембраны, сморщивание ооцита).

Морфологические характеристики стромы были идентичны образцам до витрификации.

Уровень эстрадиола в культуральной среде через 24 и 72 ч составил 32,4±5,4 и 240,7±30,5 пг/мл соответственно. Стабильные показатели эстрадиола у животных установились через 3,5 мес. Животным была проведена стимуляция роста фолликулов гонадотропинами (в течение 10 дней: 6 дней — 25 ЕД, 4 дня — 50 ЕД, — суммарно 350 ЕД пурегона). При лапаротомии констатирован факт роста фолликулов размером от 3 до 11 мм на брюшине передней брюшной стенки (рис. 1 и 2).

При ревизии места гетеротопической трансплантации роста фолликулов не обнаружено. Через 1 мес после лапаротомии уровень эстрадиола составил соответственно у каждого животного: 34,2, 42,6, 39,3, 35,3 пг/мл; прогестерон — 1,3, 1,6, 1,2, 1,8 нг/мл.

Подсадка размороженной овариальной ткани лабораторным животным показала сохранность полноценности фолликулярного аппарата коркового слоя яичника после витрификации. Оптимальным методом подсадки является ортотопическая трансплантация в брюшину передней брюшной стенки.