Атопический дерматит (АтД) рассматривается как мультифакторный дерматоз с наследственной предрасположенностью к атопии [1-4]. В последние годы все больше внимания уделяется изучению гена филаггрина (FLG; filaggrin) как основного генетического маркера предрасположенности к АтД [5-7]. Данный ген локализован на длинном плече 1-й хромосомы в локусе 1q21.3 и состоит из трех разных GTAG экзонов [8, 9]. Особое внимание уделяется, в частности, двум мутациям в экзоне 3 гена FLG - 2282del4 и R501X. Первая - делеция (выпадение четырех нуклеотидов) приводит к сдвигу рамки считывания, вторая - транзиция 1501С/Т, приводит к появлению стоп-кодона на 107 нуклеотидов ниже [8-10]. Указанные мутации в гене приводят к дефектам конечной дифференциации кератиноцитов, нарушению барьерной функции кожи. Клинически это проявляется чрезмерной сухостью кожи, ее повышенной чувствительностью к факторам внешней среды, высокой вероятностью развития аллергодерматозов [10].

Целью работы было исследование частоты мутации 2282del4 и R501X в гене FLG у пациентов с АтД и членов их семей.

Исследование проводилось на базе ГНУ «Научно-практический центр профилактической и клинической медицины» ДУС, кафедры дерматовенерологии Национальной медицинской академии последипломного образования им. П.Л. Шупика МОЗ Украины.

Для решения поставленной цели были обследованы 86 пациентов (больные АтД и члены их семей) в возрасте от 1 года до 60 лет (средний возраст 20 лет). По особенностям клинико-анамнестических данных все пациенты были распределены на 4 группы: 1-я группа - дети и мать/отец больны АтД, 2-я - дети болеют АтД, родители здоровы; 3-я - дети здоровы, родители (мать/отец) болеют АтД; 4-я - сравнения, семьи (дети/родители) без отягощенного аллергологического анамнеза. Диагноз заболевания устанавливали в соответствии с МКБ-10, согласно диагностическим критериям, выделенным Hanifin та Rajka (1980). Определение тяжести кожных проявлений заболевания на момент обследования проводили с использованием международной шкалы симптомов SCORAD (Severity scoring of atopic dermatitis). При числовом значении индекса SCORAD до 20 баллов клинические проявления АтД считали легкими, 20-40 - среднетяжелыми, более 40 - тяжелыми.

Определение уровня общего сывороточного IgE оценивали методом иммуноферментного анализа (ИФА).

С целью выявления генных дефектов FLG исследовали образцы ДНК, выделенные из лейкоцитов периферической крови 86 пациентов с АтД и/или членов их семей. Выделение ДНК проводили стандартным методом с использованием коммерческой тест-системы «ДНК-сорб-В». Выявление полиморфизма R501X и 2282del4 гена FLG осуществлялось методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим анализом длины рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ) по методике, предложенной F. Smith и соавт. Исследование проводилось на базе генетической лаборатории кафедры Национальной медицинской академии последипломного образования им. П.Л. Шупика МОЗ Украины.

Статистическая обработка данных, полученных во время клинических и лабораторных исследований, проводилась с помощью программы Statisticа.

По результатам генетических тестов, у 66 (76,74±4,58%) из 86 обследованных пациентов выявлен нормальный генотип FLG, часть обследованных (48 пациентов) состояли в близком семейном родстве (24 семьи; см. таблицу).

Среди пациентов с нормальным генотипом 47 болели АтД, по шкале SCORAD средний индекс составлял 28,02±5,1 балла. При детальном анализе клинико-анамнестических данных 24 пациента были отнесены в 1-ю группу, 32 - во 2-ю, 12 - в 3-ю, 1 - в 4-ю. В 10 семьях (20 человек), несмотря на нормальный генотип FLG, одновременно болели родители и дети, что свидетельствовало о возможности существования в этих случаях дополнительных генетических факторов, которые требуют изучения. Содержание общего сывороточного IgЕ у пациентов с нормальным генотипом коррелировало с тяжестью течения АтД, у 45,45±6,18% больных его уровень превышал возрастную норму более чем в 10 раз.

У 20 пациентов (23,26±4,58%) выявлены различные мутации гена FLG. Наиболее часто (у 22,09± 4,50% обследованных) определялась мутация 2282del4 гена FLG, у 17 (19,77±4,32 %) - в гетерозиготном состоянии (N/2282del4), в 2 случаях - гомозиготном (2282del4/2282del4). Мутация R501X в гетерозиготном состоянии (N/R501X) выявлена только у одного пациента (женщины, 31 год). Характерным было то, что гетерозиготы по мутации 2282del4 гена FLG достоверно чаще встречались среди женщин. Мутация 2282del4 в гомозиготном состоянии была выявлена только у мужчин. Клинически пациенты с АтД, являющиеся носителями мутаций 2282del4 гена FLG, отличались от лиц с нормальным генотипом более тяжелым течением АтД (средний индекс SCORAD 35,9±3,1), ранним дебютом (в первые месяцы жизни), частыми обострениями (более 3 обострений в год), у 45,00±11,41% больных имелась дополнительная сопутствующая патология (наиболее часто в виде аллергического ринита, в 2 случаях диагностирована бронхиальная астма).

При детальном анализе клинико-анамнестических данных этой категории пациентов установлено, что не все обследованные с генетическими дефектами гена FLG на момент тестирования имели проявления АтД.

По имеющимся клиническим ситуациям можно выделить 8 типов причинно-следственных связей:

1) мать/отец и ребенок болеют АтД и являются носителями мутантных генов FLG (N/2282del4) в гетерозиготном состоянии, что свидетельствует о вероятном полудоминантном наследовании данного признака в этих семьях (20,00±9,18%);

2) мать/отец и ребенок клинически здоровы, но ребенок является носителем мутации 2282del4 в гетерозиготном состоянии (5,00±5,00%);

3) мать/отец клинически здоров, но является носителем мутации 2282del4 в гетерозиготном состоянии, ребенок болеет АтД, но имеет нормальный генотип (5,00±5,00%);

4) мать/отец клинически и генетически здоров, ребенок болеет АД и является носителем мутации 2282del4 в гетерозиготном состоянии (15,00± 8,19%), мутации 2282del4 в гомозиготном состоянии (5,00±5,00%), мутации R501X в гетерозиготном состоянии (5,00±5,00%);

5) мать/отец с нормальным генотипом, но болеет АтД, ребенок клинически здоров, но является носителем мутации 2282del4 в гетерозиготном состоянии (15,00±8,19%);

6) мать/отец болеет АтД и является носителем мутации 2282del4 в гетерозиготном состоянии, ребенок клинически здоров, но является носителем мутации 2282del4 в гетерозиготном состоянии (10,00±6,88%);

7) мать/отец болеет АтД и является носителем мутантного гена 2282del4, ребенок тоже болеет АтД, но имеет нормальный генотип (15,00±8,19%);

8) мать/отец клинически здоров, но носитель мутации 2282del4 в гетерозиготном состоянии, ребенок - болеет АтД, носитель мутации 2282del4 в гомозиготном состоянии (5,00±5,00%).

Достоверно чаще (р≤0,05) выявляется наследование мутаций 2282del4 гена FLG в гетерозиготном состоянии по материнской линии, однако отсутствие четкой наследственной связи генетических дефектов с АтД, сложность и многообразие семейного анамнеза, свидетельствуют о необходимости индивидуального подхода в диагностике данного заболевания и ранней профилактике его у «здоровых» носителей. Наиболее часто в семьях с отягощенным аллергологическим анамнезом выявляются «здоровые» носители мутантных генов среди детей (30,00±10,51%), средний возраст которых составляет 7,1±2,1 года. Данную категорию детей необходимо рассматривать как группу риска не только по развитию АтД, но и других заболеваний с наследственно-аллергической составляющей (бронхиальная астма, поллиноз, псориаз и др.). Содержание общего сывороточного IgЕ у пациентов, имеющих дефекты гена FLG, также как и в группе пациентов с нормальным генотипом, коррелировало с тяжестью течения АтД. Так, среднее значение общего сывороточного IgE у пациентов с АтД носителей мутаций гена FLG составляло 267,2±15,6 МЕ/мл, среди «здоровых носителей» - 12,3±3,1 МЕ/мл.

Аномальный полиморфизм гена FLG среди пациентов с АтД и членов их семей встречается в 23,26±4,58% случаев.

Среди мутаций гена FLG наиболее часто (85,00±8,19%) встречается мутация 2282del4 гена FLG в гетерозиготном состоянии (N/2282del4).

Пациенты с АтД, имеющие мутации гена FLG, отличаются более тяжелым течением заболевания, неблагоприятным прогнозом.

Выделено 8 типов причинно-следственных связей между наличием генетических дефектов, семейным анамнезом и клиническими проявлениями АтД.

Среди носителей мутаций гена FLG встречаются «клинически здоровые» лица, наиболее часто - это дети (30,00±10,51%).