Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Карпов А.М.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава России, Москва, Россия

Рвачева А.Н.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава России, Москва, Россия

Масенко В.П.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава России, Москва, Россия

Наумов В.Г.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Минздрава России, Москва, Россия

Взаимосвязь уровня содержания в крови Т-хелперов, экспрессирующих рецепторCCR4, и концентрации хемокина CCL17 с тяжестью коронарного атеросклероза

Авторы:

Карпов А.М., Рвачева А.Н., Масенко В.П., Наумов В.Г.

Подробнее об авторах

Журнал: Кардиологический вестник. 2018;13(2): 53‑58

Просмотров: 513

Загрузок: 4

Как цитировать:

Карпов А.М., Рвачева А.Н., Масенко В.П., Наумов В.Г. Взаимосвязь уровня содержания в крови Т-хелперов, экспрессирующих рецепторCCR4, и концентрации хемокина CCL17 с тяжестью коронарного атеросклероза. Кардиологический вестник. 2018;13(2):53‑58.
Karpov AM, Rvacheva AV, Masenko VP, Naumov VG. The relationship between blood-levels of CCR4 expressing t-helper cells and chemokine CCL17 with the severity of coronary atherosclerosis. Russian Cardiology Bulletin. 2018;13(2):53‑58. (In Russ.).
https://doi.org/10.17116/Cardiobulletin201813253

?>

Влияние иммуновоспалительных процессов на возникновение и прогрессирование атеросклероза в настоящее время не вызывает сомнений. В течение последних десятилетий усилия ученых всего мира направлены на изучения роли различных компонентов клеточного и гуморального иммунитета в атерогенезе. Т-лимфоциты являются одним из типов иммунокомпетентных клеток, роль которых при атеросклерозе трудно переоценить. Т-клетки являются регулятором иммуновоспалительного процесса и способны модулировать активность макрофагов [1].

Считается, что дендритные клетки (ДК), расположенные в артериальной стенке, способны захватывать частицы окисленных липопротеидов низкой плотности (окс-ЛПНП) и представлять их на своей поверхности в качестве антигена для нативных Т-клеток [2]. Одной из ключевых функций ДК является продукция хемокина CCL17, под воздействием которого на рецепторы CCR4, расположенные на поверхности Т-лимфоцитов, последние перемещаются к месту расположения ДК [3]. После распознавания окс-ЛПНП как антигена нативные Т-лимфоциты дифференцируются в Т-хелперы 1-го типа (Тх-1). В конечном итоге Тх-1 проникают внутрь сосудистой стенки и стимулируют активацию моноцитов/макрофагов. Имеются убедительные данные, что экспрессия рецептора CCR4 повышается при многих иммуновоспалительных заболеваниях, таких как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, бронхиальная астма, атопический дерматит. При этом в доступных нам источниках литературы мы не нашли упоминаний об исследованиях уровня экспрессии данного рецептора при атеросклерозе.

Наиболее распространено мнение, что рецептор CCR4 экспрессируется преимущественно на поверхности Тх 2-го типа (Тх-2) и регуляторных Т-лимфоцитов, которые обладают «антиатерогенной» активностью. Однако ряд исследований показали, что экспрессия CCR4 характерна для различных подмножеств Т-лимфоцитов, в том числе для Тх-1 [4, 5]. Более того, результаты единичных исследований демонстрируют наличие взаимосвязи между концентрацией хемокина CCL17 в периферической крови и тяжестью течения атеросклероза [6].

Цель исследования — изучить взаимосвязь уровней содержания в периферической крови Т-хелперов, экспрессирующих рецептор CCR4, и концентрации хемокина CCL17 с тяжестью атеросклеротического поражения коронарного русла и наличием гемодинамически значимых стенозов коронарных артерий (КА); изучить влияние воспалительной реакции, возникающей при имплантации коронарного стента, на концентрацию CCL17 и выраженность экспрессии CCR4 Т-хелперными клетками.

Материал и методы

В исследование включили 82 пациентов (все мужчины), находившихся на лечении в клинических отделениях РКНПК им. А.Л. Мясникова, имевших показания к коронарографии, и 10 молодых здоровых добровольцев без клинических признаков наличия ишемической болезни сердца (ИБС). Критериями исключения служили острый коронарный синдром, инфаркт миокарда, острое нарушение мозгового кровообращения или хирургические вмешательства в предшествующие 6 мес, злокачественные новообразования, сахарный диабет 1-го и 2-го типов, наличие системных воспалительных или инфекционных заболеваний, прием иммунотропной терапии.

Всем пациентам, находившимся на стационарном лечении, проводили общеклиническое обследование, включавшее сбор жалоб, данных анамнеза и физическое обследование. Кроме того, у пациентов, находившихся на стационарном лечении, выполняли общий и биохимический анализы крови, общий анализ мочи, электрокардиографию, эхокардиографию, коронарографию. Тяжесть атеросклеротического поражения коронарного русла оценивали при помощи шкалы Gensini. Клеточное иммунофенотипирование выполняли методами прямого и бокового светорассеяния и цитофлуориметрии в потоке. Количество Т-хелперов и Т-клеток, экспрессирующих рецептор CCR4, определяли с помощью антител CD3, CD4 и CCR4 (R&D, США). Пробы обрабатывали на станции пробоподготовки TQ-prep («Beckman Coulter», США) с использованием набора реагентов для лизиса эритроцитов и фиксации лейкоцитов Immunoprep («Beckman Coulter», США). Анализ связывания антител с клетками осуществляли на поточном цитофлуориметре Cytomics FC 500 («Bekcman Coulter», США). Содержание хемокина CCL-17 в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом с использованием наборов Human CCL17/TARC Quantikine ELISA Kit («RnDSystems», США).

Все участники исследования были разделены на четыре группы по квартилям в зависимости от оценки по шкале Gensini. 1-я группа была сформирована из 10 здоровых добровольцев молодого возраста, без клинических признаков ИБС. Во 2-ю группу вошли 12 пациентов с интактными и малоизмененными КА, у которых индекс соответствовал первому квартилю (<1,5 балла). Пациенты с умеренным коронарным атеросклерозом, у которых оценка по шкале Gensini входила в межквартильный интервал (Gensini Score 1,5—40 баллов), сформировали 3-ю группу (n=46). В 4-ю группу вошли 24 пациента с тяжелым атеросклеротическим поражением коронарного русла с оценкой по шкале >40 баллов, что соответствует четвертому квартилю. Клиническая характеристика пациентов представлена в табл. 1.

Таблица 1. Клиническая характеристика пациентов, включенных в исследование Примечание. КА — коронарные артерии; ИМТ — индекс массы тела: АГ — артериальная гипертония; ИМ — инфаркт миокарда; ТБКА — транслюминальная баллонная коронарная ангиопластика. Примечание. АПФ — ангиотензинпревращающий фермент; БРА — блокаторы рецепторов к ангиотензину II.

При включении в исследование большинство больных, находившиеся на стационарном лечении, получали стандартную терапию ИБС (табл. 2).

Таблица 2. Медикаментозная терапия у 92 пациентов
Следует отметить, что пациенты с интактными или малоизмененными КА принимали статины и клопидогрел достоверно реже. Больные с умеренным коронарным атеросклерозом реже принимали β-адреноблокаторы по сравнению с больными с тяжелым атеросклеротическим поражением коронарного русла. Здоровые добровольцы не получали регулярную терапию.

Для изучения влияния воспалительной реакции, возникающей при имплантации коронарных стентов, на уровень в крови Т-хелперов, хемокина CCL17 экспрессию CCR4, из общего числа пациентов дополнительно обследовали 22 больных со стенозирующим коронарным атеросклерозом, у которых выполняли ангиопластику со стентированием КА.

Статистическую обработку данных осуществляли при помощи пакета программ Statistica 6,0. Так как большинство сравниваемых признаков не имели нормального распределения, все данные представлены в виде медианы с указанием межквартильного размаха, а различия между группами выявляли с помощью непараметрического критерия Манна—Уитни. Для анализа данных в трех независимых группах использовали метод ANOVA по Крускалу—Уоллису. При исследовании динамики показателей относительно исходных уровней использовали критерий W Вилкоксона.

Результаты и обсуждение

При множественном межгрупповом сравнении уровня Т-хелперов и экспрессии рецептора CCR4 видно, что группа здоровых добровольцев отличалась от остальных групп достоверно более низким содержанием в крови Т-хелперных клеток, менее выраженной экспрессией рецептора CCR4 Т-хелперами. Статистически значимых различий по количеству Т-хелперов к Т-лимфоцитам между группами не наблюдалось. Группы пациентов с интактными или малоизмененными КА, больных с умеренным коронарным атеросклерозом и больных с тяжелым коронарным атеросклерозом по уровню Т-хелперов в целом и Т-хелперов, экспрессирующих CCR4 в частности между собой статистически значимо не различались. Следует отметить, что наибольший уровень Т-хелперов и экспрессии CCR4 наблюдался в группе с умеренным атеросклерозом КА; в группе больных с тяжелым коронарным атеросклерозом эти показатели оказались несколько ниже (табл. 3).

Таблица 3. Уровни Т-хелперов и экспрессия рецептора CCR4 у больных с различной степенью выраженности коронарного атеросклероза и молодых здоровых добровольцев Примечание. Здесь и далее: CD3+CD4+(%) — процент Т-хелперов от общего числа Т-лимфоцитов; CCR4+ (F2) — количество Т-хелперов, экспрессирующих CCR4, при гейтировании по CD3+; CCR4+ (%F2) — процент Т-хелперов, экспрессирующих CCR4, при гейтировании по CD3+; CCR4+ (С2) — количество Т-хелперов, экспрессирующих CCR4, при гейтировании по CD3+CD4+; CCR4+ (%С2) — процент Т-хелперов, экспрессирующих CCR4, при гейтировании по CD3+CD4+; КА — коронарные артерии.

Согласно данным, представленным в табл. 4, при

Таблица 4. Уровни Т-хелперов в крови и экспрессия рецептора CCR4 в крови пациентов с гемодинамически значимыми стенозами КА и без них
сравнении групп пациентов со стенозирующим коронарным атеросклерозом и без него у последних выявлены статистически значимо более низкий уровень в периферической крови Т-хелперов и менее выраженная экспрессия CCR4.

Как видно из данных на рис. 1 между

Рис. 1. Взаимосвязь оценок по шкале Gensini и уровня экспрессии рецептора CCR4 Т-хелперами.
количеством Т-хелперов, экспрессирующих рецептор CCR4, и оценкой по шкале Gensini, которая характеризует тяжесть течение коронарного атеросклероза, выявлена умеренная положительная корреляция.

В доступной литературе нам не удалось обнаружить работ, посвященных изучению роли рецептора CCR4 в атерогенезе. Данные об участии Т-клеток в иммуновоспалительном процессе при атеросклерозе в клинических исследованиях получены только для пациентов с острым коронарным синдромом. Результаты нашего исследования показывают важную роль Т-клеточного иммунного ответа не только при обострении ИБС, но и при стабильном течении заболевания. Более того, взаимосвязь выраженности экспрессии рецептора CCR4 с тяжестью коронарного атеросклероза позволяет расширить представления о патогенезе ИБС.

Анализ данных по уровню хемокина CCL17 в крови больных с различной степенью выраженности коронарного атеросклероза и молодых здоровых добровольцев продемонстрировал отсутствие статистически значимых различий (р=0,43) между группами здоровых добровольцев, пациентов с интактными или малоизмененными КА, больных с умеренным и тяжелым коронарным атеросклерозом по уровню хемокина CCL17: 1-я группа (здоровые добровольцы) — 231,49 (167,67; 268,74) пг/мл, 2-я группа (интактные или малоизмененные КА) — 264,95 (210,26; 320,65) пг/мл, 3-я группа (умеренный атеросклероз) — 255,79 (204,12; 375,77) пг/мл и 4-я группа (тяжелый атеросклероз) — 310,36 (226,57; 408,09) пг/мл. Необходимо отметить, что наиболее низкий уровень CCL17 наблюдался в группе здоровых добровольцев, наиболее высокий — в группе больных с тяжелым атеросклерозом К.А. Пациенты с интактными или малоизмененными КА характеризовались несколько более высоким уровнем CCL17 по сравнению больными с умеренным атеросклеротическим поражением коронарного русла. При сравнении групп больных в зависимости от наличия атеросклеротических бляшек, сужающих просвет КА более чем на 50%, достоверных различий по уровню CCL17 также не выявлено: 262,09 (211,79; 357,67) пг/мл в группе нестенозирующего атеросклероза КА (27 больных) и 266,53 (200,75; 373,60) пг/мл в группе стенозирующего атеросклероза КА (65 больных); р=0,8605. Полученные нами данные частично согласуются с результатами исследования Y. Ye и соавт. [6], в котором на основании анализа образцов крови 971 пациента показано, что уровень хемокина CCL17 ассоциирован с тяжестью атеросклероза КА и тяжестью течения ИБС.

Как видно из данных на рис. 2 между

Рис. 2. Взаимосвязь концентрации хемокина CCL17 и относительного количества Т-хелперов, экспрессирующих рецептор CCR4.
относительным количеством Т-хелперов, экспрессирующих рецептор CCR4, и концентрацией хемокина CCL17 имеется умеренная отрицательная корреляция.

В литературе встречаются данные о влиянии статинов на содержание в крови иммунокомпетентных клеток, в частности на уровень CD3+CD4+ [7—9]. Мы провели оценку содержания в периферической крови Т-хелперов, экспрессии рецептора CCR4 и концентрации хемокина CCL17 в зависимости от приема больными статинов. Мы исключили из анализа здоровых добровольцев в связи с тем, что пациенты данной группы достоверно и значительно отличались от больных остальных групп по клинико-анамнестическим характеристикам. Как видно из данных, представленных в табл. 5, обе

Таблица 5. Уровни в крови Т-хелперов, экспрессии CCR4 и концентрации CCL17 у больных с различной выраженностью коронарного атеросклероза в зависимости от приема статинов
группы статистически значимо не различались по исследуемым показателям. Однако группы оказались несопоставимы между собой по числу включенных в них пациентов (4 и 76 соответственно). Это связано с тем, что большинство больных, имеющих показания к коронарографии, исходно получают статины. Для более достоверной оценки влияния приема статинов на экспрессию рецептора CCR4 Т-лимфоцитами различных субпопуляций необходимо в дальнейшем включать в исследование большее число больных ИБС, не получающих гиполипидемическую терапию, а также проводить фенотипирование Т-клеток с определением Тх-1 и Тх-2, а также Т-регуляторных клеток. Тем не менее, учитывая наличие положительной корреляции между степенью экспрессии CCR4 и тяжестью коронарного атеросклероза, определенной с помощью оценки по шкале Gensini, можно предположить, что экспрессией рецептора CCR4 в большей степени характеризуются клетки с проатерогенной активностью, т. е. Тх-1.

Известно, что имплантация стента приводит к повреждению эндотелия и развитию локального иммунного ответа, системным проявлением которого служит повышение уровня маркеров воспаления [10—12]. Локальная воспалительная реакция является одной из основных причин развития рестенозов и ассоциирована с большей вероятностью развития сердечно-сосудистых осложнений в отдаленном периоде. Мы проводили анализ образцов венозной крови, взятой накануне и через сутки после завершения процедуры коронарного стентирования. Выявлено достоверное повышение концентрации хемокина CCL17 через 24 ч после ангиопластики со стентированием К.А. При этом уровень Т-хелперов и выраженность экспрессии рецептора CCR4 Т-хелперными клетками в динамике достоверно не изменялись. Возможно, это связано с ранними сроками повторного определения (табл. 6).

Таблица 6. Динамика показателей через сутки после проведения ангиопластики со стентированием КА

Таким образом, несмотря на то что при попарном межгрупповом анализе мы не обнаружили различий по выраженности экспрессии рецептора CCR4 и концентрации хемокина CCL17 у больных с различной выраженностью атеросклероза КА, а пациенты из группы с достоверно более низкой экспрессией CCR4 отличались от остальных по возрасту, мы обнаружили умеренную положительную корреляцию между количеством Т-хелперов, несущих рецептор CCR4, и оценкой по шкале Gensini, а также отрицательную корреляцию умеренной силы между уровнем в периферической крови хемокина CCL17 и относительным количеством Т-хелперов, экспрессирующих рецептор CCR4.

Заключение

Полученные данные позволяют предположить, что хемокин CCL17 и рецептор CCR4 играют роль в инициировании Т-клеточного иммунного ответа при атеросклерозе. Более глубокое изучение вопроса, в частности определение степени экспрессии CCR4 Т-лимфоцитами различных подтипов, одновременное определение уровня в крови дендритных клеток, исключение влияния факторов риска развития ишемической болезни сердца и получаемой терапии, позволит лучше понять механизмы иммуновоспалительных реакций при атеросклерозе и разработать новые методики иммунотропной терапии заболевания.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Сведения об авторах

Карпов Александр Михайлович — врач анестезиолог-реаниматолог отдела хронической ИБС ФГБУ «НМИЦ кардиологии» Минздрава России; 121552, Москва, ул. 3-я Черепковская, д. 15а; тел.: +7(919)728-3738; e-mail: karpovmd@gmail.com

Рвачева Анна Валерьевна — к.м.н., научный сотрудник лаборатории иммунопатологии сердечно-сосудистых заболеваний ФГБУ «НМИЦ кардиологии» Минздрава России; 121552, Москва, ул. 3-я Черепковская, д. 15а; тел.: +7(903)661-1637; e-mail: arvatcheva@mail.ru

Масенко Валерий Павлович — д.м.н., проф., руководитель отдела нейрогуморальных и иммунологических исследований ФГБУ «НМИЦ кардиологии» Минздрава России; 121552, Москва, ул. 3-я Черепковская, д. 15а; тел.: +7(903)596-08-61; e-mail: massenko@mail.ru

Наумов Владимир Геннадьевич — д.м.н., проф., ведущий научный сотрудник отдела проблем атеросклероза ФГБУ «НМИЦ кардиологии» Минздрава России. 121552, Москва, ул. 3-я Черепковская, д. 15а; тел.: +7(916)205-65-02; e-mail: cardionaum@yandex.ru

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail