Завалишина Л.Э.

ФГБУ "Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена" Минздравсоцразвития России

Петров А.В.

ФГУП «Государственный НИИ особо чистых биопрепаратов» ФМБА России, Санкт-Петербург, Россия

Павленко И.А.

ГБУ Ростовской области "Патологоанатомическое бюро", Ростов-на-Дону

Горелик М.З.

ГБУЗ "Приморское краевое патологоанатомическое бюро", Владивосток

Исследование методом FISH за один день. Опыт оценки статуса гена HER2 c помощью нового набора HER2 IQFISH pharmDx

Авторы:

Завалишина Л.Э., Петров А.В., Павленко И.А., Горелик М.З.

Подробнее об авторах

Журнал: Архив патологии. 2013;75(1): 52‑53

Просмотров: 2188

Загрузок: 89


Как цитировать:

Завалишина Л.Э., Петров А.В., Павленко И.А., Горелик М.З. Исследование методом FISH за один день. Опыт оценки статуса гена HER2 c помощью нового набора HER2 IQFISH pharmDx. Архив патологии. 2013;75(1):52‑53.
Zavalishina LÉ, Petrov AV, Pavlenko IA, Gorelik MZ. A FISH analysis in one day. Experience in evaluating HER2 gene status by means of a new HER2 IQFISH pharmDx kit. Russian Journal of Archive of Pathology. 2013;75(1):52‑53. (In Russ.)

Рекомендуем статьи по данной теме:
Экспрес­сия тран­сфер­ри­но­вых ре­цеп­то­ров 1 и β1-ин­тег­ри­нов кор­ре­ли­ру­ет со ста­ту­сом ре­цеп­то­ров эс­тро­ге­нов и им­мун­ной ин­фильтра­ци­ей при ра­ке мо­лоч­ной же­ле­зы. Ар­хив па­то­ло­гии. 2024;(4):23-30
Ре­конструк­тив­но-плас­ти­чес­кие опе­ра­ции в ком­би­ни­ро­ван­ном ле­че­нии ра­ка мо­лоч­ной же­ле­зы: фак­то­ры рис­ка ос­лож­не­ний и ре­конструк­тив­ных не­удач. Он­ко­ло­гия. Жур­нал им. П.А. Гер­це­на. 2024;(3):13-19
Тар­гет­ная лим­фа­де­нэк­то­мия с би­оп­си­ей сто­ро­же­во­го лим­фа­ти­чес­ко­го уз­ла у боль­ных ра­ком мо­лоч­ной же­ле­зы cT1-3N1M0 пос­ле неоадъю­ван­тной по­ли­хи­ми­оте­ра­пии. Он­ко­ло­гия. Жур­нал им. П.А. Гер­це­на. 2024;(3):73-78
Рак мо­лоч­ной же­ле­зы: ви­ды им­план­ти­ру­емых ма­те­ри­алов для за­ме­ще­ния пос­тре­зек­ци­он­ных де­фек­тов. Он­ко­ло­гия. Жур­нал им. П.А. Гер­це­на. 2024;(3):85-89
Ин­тра­те­каль­ная хи­ми­оте­ра­пия при леп­то­ме­нин­ге­аль­ном ме­тас­та­зи­ро­ва­нии у боль­ных ра­ком мо­лоч­ной же­ле­зы. Жур­нал «Воп­ро­сы ней­ро­хи­рур­гии» име­ни Н.Н. Бур­ден­ко. 2024;(3):31-37
Ин­до­ци­анин зе­ле­ный — не­отъем­ле­мая часть ре­конструк­тив­ной хи­рур­гии мо­лоч­ной же­ле­зы с ис­поль­зо­ва­ни­ем пер­фо­ран­тных лос­ку­тов. Хи­рур­гия. Жур­нал им. Н.И. Пи­ро­го­ва. 2024;(8):34-40
Ве­ду­щие тен­ден­ции за­бо­ле­ва­емос­ти ра­ком мо­лоч­ной же­ле­зы в Рес­пуб­ли­ке Крым. Он­ко­ло­гия. Жур­нал им. П.А. Гер­це­на. 2024;(4):42-47
Вли­яние прог­рам­мы кар­ди­орес­пи­ра­тор­ных тре­ни­ро­вок на уро­вень мо­ле­кул меж­кле­точ­ной ад­ге­зии у па­ци­ен­ток с пос­тмас­тэк­то­ми­чес­ким син­дро­мом. Воп­ро­сы ку­рор­то­ло­гии, фи­зи­оте­ра­пии и ле­чеб­ной фи­зи­чес­кой куль­ту­ры. 2024;(4):45-51
Диаг­нос­ти­чес­кая цен­ность флю­орес­цен­тной лим­фог­ра­фии для би­оп­сии сиг­наль­ных лим­фа­ти­чес­ких уз­лов при ра­ке мо­лоч­ной же­ле­зы. Обоб­ща­ющий опыт нес­коль­ких спе­ци­али­зи­ро­ван­ных цен­тров. Хи­рур­гия. Жур­нал им. Н.И. Пи­ро­го­ва. 2024;(10):49-61
Ког­да мас­тэк­то­мия не­из­беж­на, или сво­бод­ная пе­ре­сад­ка сос­ко­во-аре­оляр­но­го ком­плек­са в со­че­та­нии с ре­конструк­ци­ей. Плас­ти­чес­кая хи­рур­гия и эс­те­ти­чес­кая ме­ди­ци­на. 2024;(4):60-64

Введение

В настоящее время при патоморфологическом исследовании больных раком молочной железы или желудка в большинстве случаев проводится определение HER2-статуса опухоли. Это исследование определяет возможность проведения таргетной терапии трастузумабом и имеет прогностическое значение. Процедура определения HER2-статуса хорошо описана, валидирована и стандартизована [1, 2]. В тех случаях, когда опухолевые клетки по данным иммуногистохимического исследования имеют неопределенный HER2-статус (экспрессия HER2 на уровне 2+), обязательно проводится определение наличия или отсутствия амплификации гена HER2 методом флюоресцентной гибридизации in situ (FISH). Этот метод обладает высокой точностью и надежностью, однако трудоемок и продолжителен по срокам проведения. Последнее связано с необходимостью гибридизации исследуемого образца с ДНК-зондами в течение 14—20 ч. Таким образом, для исследования методом FISH необходимы одни астрономические сутки, и полученный результат можно оценить лишь на следующий рабочий день.

В связи с последними научными разработками появилась возможность проводить FISH-исследование и оценивать результаты в течение одного рабочего дня.

В настоящей работе описан опыт по оценке HER2-статуса с применением нового набора HER2 IQFISH pharmDx фирмы «DAKO» (Дания).

Материал и методы

Материалом для исследования служили образцы опухолей в парафиновых блоках, полученные от 40 пациентов МНИОИ им. П.А. Герцена, ГБУ Ростовской области «Патологоанатомическое бюро», ГБУЗ «Приморское краевое патологоанатомическое бюро» с установленным гистологическим диагнозом «инфильтрирующая карцинома молочной железы», направленных в 2012 г. для определения HER2-статуса. У всех пациентов, по данным иммуногистохимического исследования, имелась экспрессия белка HER2/neu на уровне 2+. FISH проводили с помощью набора HER2 IQFISH pharmDx («DAKO», Дания) согласно инструкции производителя тест-системы. В качестве контроля использовали утвержденный FDA и широко применяющийся в России набор HER2 FISH pharmDx («DAKO», Дания).

Результаты и обсуждение

Статус гена HER2 был успешно определен у всех 40 пациентов с помощью обеих тест-систем. При анализе результатов, полученных с помощью нового набора и «классического» набора для FISH — HER2 FISH pharmDx, они полностью совпали. В препаратах специфические сигналы были компактными и яркими, примерно одинаковой интенсивности. Окраска ядер опухолевых клеток красителем DAPI была детальной и контрастной, а при использовании набора HER2 IQFISH pharmDx более яркой, что облегчает выбор участка опухоли для оценки амплификации гена HER2. Количественный учет и интерпретация результатов не вызывали затруднений как при амплификации гена HER2, так и без нее (см. рисунок, а, б).

Рисунок 1. IQFISH HER2-иccледование (×630). а — отсутствие амплификации гена HER2; б — наличие амплификации гена HER2. Зеленые сигналы — зонд к центромерному участку хромосомы 17, красные — ДНК-зонд к гену HER2.

Состав набора, за небольшим исключением, также мало изменился, и схема приготовления рабочих реагентов осталась прежней. Однако новый набор содержит в 4 раза больше пепсина для протеолитической обработки срезов, а также специальный буфер для его разведения, что крайне удобно при одновременном окрашивании большой партии образцов. Собственно методологических изменений в новом наборе три:

1) новая программа для денатурации и гибридизации образцов (денатурация при 66 °C — 10 мин и гибридизация при 45 °С — 60—120 мин вместо «классической» программы: денатурация при 82 °С — 5 мин и гибридизация при 45 °С — 14—20 ч);

2) сниженная до 63 °С (вместо 65 °С в «классическом» наборе) температура раствора для отмывки несвязавшихся зондов;

3) новый состав гибридизационной смеси для зондов (без использования формамида), который позволяет существенно уменьшить общее время гибридизации и является более безопасным для персонала. Хранить смесь зондов необходимо при –18 °С.

Использование тест-системы HER2 IQFISH pharmDx позволяет получать результаты FISH за 4,5—5,0 ч, т.е. за один рабочий день, что сопоставимо с временны`ми затратами на иммуногистохимическое исследование и значительно меньше, чем при использовании «классического» набора. Это позволяет пациенту быстрее получать результат и увеличивает число исследований, производимых в лаборатории. При этом качество результатов остается высоким.

Заключение

Таким образом, в наборе HER2 IQFISH pharmDx удачно сочетаются высокое качество «классической» тест-системы и меньшее время, необходимое для выполнения данного исследования. Все это способствует более широкому внедрению метода FISH в повседневную практику, переводя его из разряда малодоступного и длительного исследования в метод повседневной, рутинной работы современного врача-патологоанатома.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.