Новые подходы к лечению повреждения печени при экспериментальной обратимой механической желтухе

Рост заболеваемости желчнокаменной болезнью и опухолями билиопанкреатодуоденальной зоны обусловливает актуальность проблемы лечения пациентов с механической желтухой [1]. Летальность при этой патологии остается высокой, несмотря на совершенствование оперативной техники, анестезиологии и интенсивной терапии [2]. В частности, это связано с тем, что окончательно не решена проблема лекарственного сопровождения пациентов с механической желтухой. Несмотря на хирургическое восстановление тока желчи у пациентов с механической желтухой, происходит усиление перекисного окисления липидов мембран гепатоцитов, повышение проницаемости мембран митохондрий, нарушение окислительного фосфорилирования и образования энергии [3]. Все это приводит к развитию апоптоза, некрозу клеток печени и, как следствие, к острой печеночной недостаточности, являющейся одной из ведущих причин смерти при такой патологии [4]. В связи с этим не вызывает сомнений необходимость применения гепатопротекторов при лечении механической желтухи как в пред-, так и в послеоперационном периоде. Однако высокая стоимость лекарственных препаратов, обладающих гепатопротекторной активностью, резко ограничивает их применение и создает предпосылки для создания новых, эффективных и доступных гепаторотекторов.

Эксперименты были выполнены на 40 белых крысах-самцах линии Wistar, разделенных на 4 группы: 1-я — ложнооперированные животные, 2-я — животные с обратимой механической желтухой без лечения, 3-я — животные с обратимой механической желтухой + ЛБК-527, 4-я — с обратимой механической желтухой + гептрал.

Животных содержали в стандартных условиях Центра перспективных исследований инновационных лекарственных веществ ФГБОУ ВО «НИ МГУ им. Н.П. Огарева» при соблюдении требований Европейской конвенции по защите позвоночных животных. С целью обезболивания все манипуляции, причиняющие животным боль, проводили под уретановым наркозом, водный раствор которого вводили внутрибрюшинно в дозе 800 мг/кг.

Механическую желтуху формировали путем фиксации общего желчного протока к передней брюшной стенке при помощи латексного жгута (заявка на патент №2021136063) (рис. 1, а—в). На 7-е сутки после формирования механической желтухи животным выполняли декомпрессию желчевыводящих путей путем пересечения латексного жгута с последующим его удалением. После восстановления пассажа желчи животным в 3-й группе ежедневно до окончания эксперимента внутривенно вводили раствор ЛБК-527 в суточной дозе 29 мг/кг, в 4-й группе — гептрал внутривенно по 60 мг/кг. Животные 2-й группы получали внутривенно 0,9% раствор хлорида натрия ежедневно в суточном объеме, соответствующем объему в группе исследуемого соединения. Животным 1-й группы выполняли лапаротомию, осуществляли доступ к общему желчному протоку с последующим зашиванием операционной раны. Продолжительность эксперимента составила 21 день. На 7, 10, 14 и 21-е сутки у животных из бедренной вены забирали кровь для биохимического исследования — оценки уровня аланинаминотрасферазы (АлАТ), аспарагинаминотрансферазы (АсАТ), общего билирубина) на сухом биохимическом анализаторе FujiFilm (Япония) и выводили животных из эксперимента по 2 особи из каждой группы, оценивали макро- и микроморфологию печени. Микропрепараты окрашивали гематоксилином и эозином по стандартной методике и изучали на микроскопе Olympus BX-41. В качестве красителя использовали гематоксилин и эозин.

Рис. 1. Моделирование обратимой механической желтухи (описание в тексте).

Со 2-го дня после операции у крыс во 2, 3 и 4-й группах формировалась механическая желтуха, о чем свидетельствовали темная окраска мочи, светлый кал, желтушное окрашивание ушных раковин и глазных яблок животных. На 7-е сутки у животных контрольной и экспериментальных групп выявлены выраженная зернистость печени, ее темно багровая окраска с участками белесоватого цвета, неравномерно распространенными по висцеральной и диафрагмальной поверхности печени, выраженное расширение и напряжение общего желчного протока, достигающее 0,6 см в диаметре, а также увеличение уровня АсАТ, АлАТ, общего билирубина, что свидетельствует о развитии цитолитического и холестатического синдромов (таблица).

Влияние ЛБК-527 и гептрала на биохимические показали крови у животных четырех групп с обратимой механической желтухой

Примечание. * — различия при сравнении с группой ложнооперированных животных статистически достоверны (p<0,05; одномерный дисперсионный анализ, критерий Даннета).

Декомпрессия желчевыводящих путей приводила к постепенному снижению уровня исследуемых биохимических показателей, однако скорость и интенсивность варьировали в разных группах. Так, у животных на фоне лечения уровни АлАТ и АсАТ приходили в норму уже на 10-й день исследования, тогда как в контрольной группе уровень АлАТ приближался к норме только к 14-м суткам, а уровень АсАТ — к 21-му дню эксперимента. На 10-й день исследования показатели холестаза были выше нормы во 2, 3 и 4-й группах. Однако у животных без лечения уровень общего билирубина был выше в 2 раза и приходил в норму только к 21-му дню исследования по сравнению с таковым у животных 3-й и 4-й групп, у которых нормализация данных показателей наступала уже на 14-е сутки.

Окклюзия общего желчного протока (рис. 2) приводила к развитию полнокровия центральных вен (1) и синусоид, очагам некроза и нарушению балочного строения печени (2), гидропической дистрофии части гепатоцитов (3), лимфогистиоцитарной инфильтрации стромы, (4) выраженной пролиферации желчных протоков (5).

Рис. 2. Морфологическая структура печени при обратимой механической желтухе на фоне лечения (описание в тексте).

Окраска гематоксилином и эозином, ув. 200.

После разрешения механической желтухи морфологическая картина печени у контрольной группы к 14-м суткам характеризовалась сохранением полнокровия центральных вен (1), вакуольной дистрофией отдельных гепатоцитов (6), лимфогистиоцитарной инфильтрацией (4). В то же время в экспериментальных группах уже с 10-х суток в печени наблюдалось уменьшение венозного наполнения, а инфильтрация гистиоцитами и лимфоцитами носила единичный характер (4), появлялись очаги с признаками регенерации в печеночных дольках в виде двухъядерных гепатоцитов (7) (см. рис. 2). У ложнооперированных животных гистологические признаки патологии печени отсутствовали.

Таким образом, производное 2-аминоэтансульфоновой кислоты ЛБК-527 дает гепатопротекторный эффект, сопоставимый с эффектом препарата сравнения гептрала и может быть использовано для создания лекарственного препарата для лечения повреждений печени в постоперационном периоде после разрешения механической желтухи.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Е.В. Блинова, В.И. Давыдкин

Сбор и обработка материала — Н.И. Морозова, А.А. Балашкина, Е.Н. Бородина, Т.А. Богоявленская О.С. Вавилова

Статистическая обработка — Ю.С. Дергунова, О.В. Кытько

Написание текста — М.А. Морозов

Редактирование — Е.В. Блинова

Participation of authors:

Concept and design of the study — E.V. Blinova, V.I. Davydkin

Data collection and processing — N.I. Morozova,T.A. Bogoyavlenskaya A.A. Balashkina, E.N. Borodina, O.S. Vavilova

Statistical processing of the data — Yu.S. Dergunova, O.V. Kytko

Text writing — M.A. Morozov

Editing — E.V. Blinova

Исследование поддержано грантом Президента РФ №НШ-843.2022.3

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.