Современная диагностика опухолей требует не только верификации гистологического варианта и степени дифференцировки злокачественных новообразований, но и оценки прогноза течения заболевания и возможного ответа на лекарственную терапию. Развитие представлений о молекулярных механизмах канцерогенеза и открытие ключевых сигнальных путей, ассоциированных с опухолевой прогрессией, привели к внедрению таргетной лекарственной терапии, применение которой требует определения наличия терапевтически значимых молекулярных мишеней с использованием иммуногистохимических и молекулярно-генетических методов.

Одной из первых таких мишеней стал рецептор эпидермального фактора роста второго типа HER2/neu. Онкобелок c-erbB-2 (HER2) был выделен и охарактеризован T. Akiyama и соавт. [1] в 1986 г. HER2 представляет собой трансмембранный тирозинкиназный рецептор семейства EGFR, включающего HER1, HER2, HER3 и HER4, и играет важную роль в регуляции пролиферации и выживаемости клеток. Ген HER2 локализован на хромосоме 17 и в нормальных эпителиальных клетках экспрессируется в минимальном количестве, тогда как при злокачественной трансформации возможно возникновение амплификации гена и соответствующей гиперэкспрессии белка.

Гиперэкспрессия HER2 и амплификация гена выявлены при различных эпителиальных опухолях. Первый таргетный препарат, блокирующий рецептор HER2, трастузумаб был разработан для лечения рака молочной железы и рака желудка. Именно для этих локализаций были впервые сформированы методологические подходы к оценке HER2-статуса, а также разработаны критерии интерпретации результатов иммуногистохимических исследований и гибридизации in situ, применяемые в клинической практике до настоящего времени.

Ключевым элементом HER2-тестирования является соблюдение всех этапов исследования, включая преаналитический (получение, транспортировка и фиксация материала), аналитический (проведение иммуногистохимической реакции или гибридизации in situ) и постаналитическую интерпретацию результатов. Значение этих этапов, а также требования к контролю качества и валидации методик подробно изложены в специализированных руководствах и рекомендациях по HER2-тестированию и морфологической диагностике опухолей [2—4]. В настоящее время для определения HER2-статуса рака молочной железы используются актуальные рекомендации ASCO/CAP и клинические рекомендации Минздрава России «Рак молочной железы» [4].

С появлением конъюгированных препаратов антитело—лекарство, в частности, трастузумаба дерукстекана, обладающего активностью в отношении опухолей с различным уровнем экспрессии HER2, включая опухоли со слабой экспрессией рецептора (HER2-low), возникла необходимость более четкого разграничения уровней экспрессии HER2. Это нашло отражение в обновленных рекомендациях ASCO/CAP, 2023 [5, 6].

Рак желудка и гастроэзофагального перехода (ГЭП) стал второй локализацией, для которой была изучена эффективность таргетной терапии, направленной на HER2. Для этой группы опухолей были разработаны специальные критерии оценки HER2-статуса, отличающиеся от таковых при раке молочной железы и учитывающие особенности биопсийного и операционного материала, характер мембранного окрашивания и пороговые значения количества опухолевых клеток [2, 9, 10]. При неопределенном HER2-статусе (ИГХ 2+) рекомендовано обязательное применение методов гибридизации in situ [2, 9].

В клинических исследованиях трастузумаба дерукстекана при эпителиальных опухолях различных локализаций использовались критерии оценки HER2-статуса, разработанные для рака желудка. В многоцентровом исследовании DESTINY-PanTumor02 [5] были получены данные об эффективности терапии и о распространенности HER2-позитивных опухолей при различных локализациях. Однако дизайн подобных исследований не позволяет оценить частоту HER2-позитивных опухолей в отдельных странах и популяциях.

Данные литературы свидетельствуют о значительной вариабельности частоты HER2-позитивных опухолей при различных локализациях, а также о существенных расхождениях в группе опухолей с неопределенным уровнем экспрессии HER2. Эти различия могут быть обусловлены как особенностями исследуемых выборок, так и применением различных критериев интерпретации и диагностических наборов. При этом для большинства локализаций показано, что критерии, разработанные для рака желудка и ГЭП, в большей степени коррелируют с клиническим ответом на терапию [5, 9].

В Российской Федерации крупные многоцентровые исследования, посвященные оценке HER2-статуса опухолей различных локализаций, ранее не проводились. Исследование, инициированное в 2025 г. Российским обществом клинической онкологии, было направлено на изучение распространенности опухолей с HER2-позитивным статусом в российской популяции, а также на создание общедоступной образовательной платформы для патологоанатомов с целью повышения качества и воспроизводимости HER2-тестирования.

Цель настоящего исследования — определение частоты встречаемости опухолей с гиперэкспрессией рецептора HER2 (ИГХ 3+) при карциномах различных локализаций в Российской Федерации в рамках многоцентрового диагностического и образовательного проекта, а также оценка методологических аспектов HER2-тестирования с использованием унифицированных критериев интерпретации результатов.

Материал и методы

Исследование выполнено в рамках многоцентрового диагностического и образовательного проекта, инициированного в 2025 г. Российским обществом клинической онкологии (RUSSCO). Целью проекта являлись унификация подходов к определению HER2-статуса опухолей различных локализаций, оценка частоты выявления HER2-позитивных карцином в российской популяции, а также повышение воспроизводимости и качества иммуногистохимического HER2-тестирования в патолого-анатомической практике.

В реализации проекта приняли участие три центральные референсные лаборатории: кафедра патологической анатомии ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России (Москва); отделение общей и молекулярной патологии НИИ онкологии ФГБНУ «Томский национальный исследовательский медицинский центр РАН» (Томск); отделение патологической анатомии ООО ЛДЦ МИБС (Санкт-Петербург).

На завершающем этапе набора материала к исследованию были подключены 8 региональных онкологических учреждений из различных федеральных округов Российской Федерации: Ростова-на-Дону, Воронежа, Уфы, Краснодара, Белгорода, Омска, Иркутска и Хабаровска.

Материалом для исследования послужили 1933 образца опухолей различных локализаций, направленные для HER2-тестирования из 122 лечебно-профилактических учреждений онкологического профиля всех федеральных округов Российской Федерации.

На этапе первичного морфологического пересмотра 422 образца были исключены из анализа в связи с несоответствием критериям включения (отсутствие опухолевой ткани, недостаточное количество опухолевых клеток, неудовлетворительное качество материала). В итоговый анализ было включено 1511 образцов опухолей различных локализаций.

Критерии включения

В исследование включались образцы опухолевой ткани пациентов с местно-распространенными и метастатическими формами заболевания, а также с рецидивами опухолей следующих локализаций: рак эндометрия, рак шейки матки, рак яичников, рак мочевого пузыря, колоректальный рак, рак билиарного тракта, рак поджелудочной железы, рак легкого, рак желудка и гастроэзофагального перехода, а также опухоли других локализаций (табл. 1).

Таблица 1. Характеристика исследованных образцов опухолей различных локализаций

Перед проведением иммуногистохимического исследования все препараты были пересмотрены патолого-анатомами референсных лабораторий с целью подтверждения гистологического диагноза, для определения репрезентативности опухолевого компонента и пригодности материала при HER2-тестировании.

Иммуногистохимическое исследование

С парафиновых блоков изготавливали серийные срезы толщиной 4 мкм, которые размещали на высокоадгезивных предметных стеклах. При отсутствии в присланном материале препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином, выполняли дополнительное рутинное окрашивание.

Иммуногистохимическое исследование во всех референсных и региональных лабораториях проводилось с использованием моноклонального антитела к HER2, клон 4B5 (Ventana), с системой детекции UltraView (Ventana) на автоматическом иммуностейнере Ventana BenchMark Ultra. Во всех лабораториях применялся валидированный протокол окрашивания с обязательным использованием внутрилабораторных позитивных и негативных контрольных образцов.

Оценка HER2-статуса

Оценка HER2-статуса осуществлялась по критериям, разработанным для рака желудка и гастроэзофагального перехода (табл. 2), аналогично протоколу исследования DESTINY-PanTumor02. При интерпретации результатов учитывались характер мембранного окрашивания (полное, латеральное, базолатеральное), интенсивность окраски и процент опухолевых клеток с мембранной экспрессией HER2.

Таблица 2. Критерии оценки иммуногистохимической экспрессии HER2 при раке желудка и гастроэзофагального перехода

Примечание. * Кластер опухолевых клеток — группа не менее чем из 5 смежных опухолевых клеток.

В случаях неопределенного HER2-статуса (ИГХ 2+) рекомендовалось проведение гибридизации in situ (FISH, CISH) для уточнения статуса гена HER2.

Все иммуногистохимические препараты были отсканированы с формированием цифровых изображений. В сложных диагностических случаях интерпретация результатов проводилась тремя специалистами референсных лабораторий с последующим достижением консенсусного заключения.

Этические аспекты

Перед направлением материала для проведения HER2-тестирования все пациенты подписывали информированное согласие на участие в исследовании. Исследование выполнено с соблюдением принципов биоэтики и требований действующего законодательства Российской Федерации.

Результаты

В итоговый анализ было включено 1511 образцов карцином различных локализаций, соответствующих критериям отбора. Распределение образцов по нозологиям и гистологическим типам представлено в табл. 3.

Таблица 3. Частота выявления опухолей с HER2-статусом ИГХ 3+ при карциномах различных локализаций

По результатам иммуногистохимического исследования гиперэкспрессия рецептора HER2 (ИГХ 3+) была выявлена в опухолях различных локализаций с неодинаковой частотой (табл. 3, рис. 1).

Рис. 1. Частота HER2-позитивных опухолей (ИГХ 3+) при эпителиальных злокачественных новообразованиях различных локализаций.

Наибольшая доля HER2-позитивных случаев была отмечена при раке мочевого пузыря — 21,2% (28 из 132 образцов). При раке желудка и ГЭП гиперэкспрессия HER2 выявлена в 12% (33 из 274 образцов).

Для опухолей билиарного тракта HER2-позитивный статус (ИГХ 3+) был установлен в 8,4% (8 из 95 образцов) случаев. В группе опухолей других локализаций, представленных преимущественно новообразованиями слюнных желез, частота HER2-позитивных случаев составила 10,1% (7 из 69 образцов).

В карциномах гинекологической локализации гиперэкспрессия HER2 выявлялась реже. При раке эндометрия HER2-позитивный статус (ИГХ 3+) был установлен в 5,9% (18 из 303 образцов) случаев, при раке шейки матки — в 3,1% (5 из 161 образца), при раке яичников — в 2,3% (4 из 177 образцов).

Минимальная частота HER2-позитивных опухолей была зарегистрирована при колоректальном раке — 0,9% (1 из 111 образцов). В представленной выборке случаев с гиперэкспрессией HER2 (ИГХ 3+) при аденокарциноме легкого и раке поджелудочной железы выявлено не было (0 из 72 и 0 из 117 образцов соответственно).

Примеры иммуногистохимической экспрессии HER2 (ИГХ 3+) при эпителиальных злокачественных новообразованиях редких локализаций представлены на рис. 2 и демонстрируют характерное выраженное мембранное окрашивание опухолевых клеток.

Рис. 2. Иммуногистохимическая экспрессия HER2 (ИГХ 3+) при эпителиальных злокачественных новообразованиях редких локализаций.

а — рак мочевого пузыря; б — рак эндометрия; в — рак шейки матки; г — опухоль желчевыводящих протоков. Во всех случаях отмечается выраженное мембранное окрашивание опухолевых клеток, соответствующее уровню ИГХ 3+. Иммуногистохимическое окрашивание, антитело к HER2 (клон 4B5), ×200.

Обсуждение

Настоящее исследование является первым в Российской Федерации многоцентровым морфологическим исследованием, посвященным оценке частоты выявления опухолей с гиперэкспрессией рецептора HER2 (ИГХ 3+) при карциномах различных локализаций и выполненным с использованием унифицированных диагностических подходов и стандартизированных критериев интерпретации результатов. Полученные данные позволяют не только охарактеризовать распространенность HER2-позитивных опухолей в российской популяции, но и оценить воспроизводимость HER2-тестирования в условиях реальной патолого-анатомической практики.

В целом частота выявления HER2-позитивных опухолей (ИГХ 3+) в исследованных нозологиях соответствует диапазонам значений, ранее описанным в международных исследованиях. Так, частота гиперэкспрессии HER2 при раке желудка и ГЭП, выявленная в настоящем исследовании (12%), сопоставима с данными клинических работ и рекомендаций, в которых данный показатель варьирует в пределах 8—18% [5, 9, 10]. Это подтверждает корректность применяемых критериев интерпретации и отражает биологическую значимость HER2-опосредованных сигнальных путей при данной локализации.

Наибольшая доля HER2-позитивных случаев была выявлена при раке мочевого пузыря, что согласуется с данными литературы [5], указывающими на относительно высокую частоту гиперэкспрессии HER2 в этой группе опухолей. В опухолях билиарного тракта частота выявления HER2-позитивного статуса также находилась в пределах ранее опубликованных значений, что подтверждает возможность использования HER2-тестирования как дополнительного диагностического и потенциально терапевтически значимого маркера при данных нозологиях [5].

В карциномах гинекологической локализации частота выявления гиперэкспрессии HER2 в настоящем исследовании была относительно низкой и варьировала от 2,3 до 5,9% в зависимости от нозологии, что соответствует данным литературы [5], указывающим на выраженную гетерогенность молекулярных механизмов опухолевого роста в данной группе новообразований. Низкая частота HER2-позитивных опухолей при колоректальном раке, а также отсутствие случаев гиперэкспрессии HER2 при аденокарциноме легкого и раке поджелудочной железы в представленной выборке также согласуются с опубликованными результатами, свидетельствующими о редкости данного фенотипа при указанных локализациях [6, 7].

Следует подчеркнуть, что в настоящем исследовании основной акцент был сделан на опухолях с гиперэкспрессией HER2 (ИГХ 3+), поскольку данный уровень экспрессии является клинически значимым и диагностически наиболее воспроизводимым. Вместе с тем анализ распределения опухолей с неопределенным уровнем экспрессии HER2 (ИГХ 2+) продемонстрировал значительную вариабельность данной категории между различными локализациями. Подобные расхождения, описанные и в литературе [5, 9], могут быть обусловлены как различиями в применяемых критериях интерпретации (критерии рака молочной железы или рака желудка), так и использованием различных диагностических наборов, включая антитела HER2 4B5 (Ventana) и HercepTest (Agilent/Dako). В этом контексте использование критериев HER2 тестирования, разработанных для рака желудка и ГЭП, представляется наиболее обоснованным для оценки HER2-статуса при опухолях различных локализаций, что было продемонстрировано в ряде клинических исследований [5].

Важным практическим результатом настоящего исследования стало выявление типичных методологических и преаналитических проблем, возникающих при выполнении HER2-тестирования в рутинной практике. Наиболее часто они были связаны с нарушениями преаналитического этапа, включая задержку фиксации операционного материала, чрезмерную длительность фиксации, недостаточную репрезентативность биопсийных образцов, а также выраженное фоновое цитоплазматическое окрашивание, особенно характерное для опухолей билиарного тракта. Эти наблюдения подчеркивают ключевую роль строгого соблюдения протоколов исследования, обязательного использования внутрилабораторных контрольных образцов и регулярной валидации методик, что подробно отражено в актуальных методических рекомендациях и руководствах [2—4].

Принципиальное значение для обеспечения воспроизводимости результатов имело применение унифицированного диагностического подхода, включающего использование одного клона антител (HER2 4B5), единой платформы окрашивания и стандартизированных критериев интерпретации результатов. Консенсусная оценка HER2-статуса в диагностически сложных случаях позволила минимизировать межнаблюдательскую вариабельность и повысить достоверность полученных данных, что особенно важно при реализации многоцентровых проектов.

Таким образом, результаты настоящего исследования демонстрируют, что частота выявления HER2-позитивных опухолей различных локализаций в Российской Федерации в целом соответствует мировым данным. Полученные результаты подчеркивают ключевую роль методологической стандартизации и контроля качества на всех этапах HER2-тестирования и подтверждают практическую значимость реализации многоцентровых диагностических и образовательных проектов, направленных на повышение уровня морфологической диагностики и воспроизводимости иммуногистохимических исследований в отечественной патолого-анатомической практике.

Заключение

Проведенное многоцентровое исследование позволило оценить распространенность HER2-позитивных опухолей (ИГХ 3+) при различных эпителиальных злокачественных новообразованиях в российской популяции при использовании унифицированного диагностического подхода. Полученные результаты демонстрируют воспроизводимость показателей HER2-позитивности и их сопоставимость с данными международных исследований при условии применения стандартизированных критериев интерпретации HER2-статуса.

Использование критериев оценки HER2-статуса, разработанных для рака желудка и гастроэзофагального перехода, показало свою применимость для опухолей различных локализаций и позволило минимизировать вариабельность интерпретации результатов иммуногистохимического исследования в условиях многоцентрового анализа.

Полученные данные подчеркивают значение стандартизации HER2-тестирования и могут быть использованы в качестве методологической основы для дальнейших клинико-патологических и эпидемиологических исследований, а также при внедрении HER2-ориентированных терапевтических подходов в клиническую практику.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Завалишина Л.Э., Носов Д.А.

Сбор и обработка материала —Карасева В.В., Раскин Г.А.

Статистическая обработка —Кузнецова О.А.

Написание текста —Завалишина Л.Э., Вторушин С.В.

Редактирование —Франк Г.А.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.