Слюсарева Е.Е.

ФГБОУ ВО «Тихоокеанский государственный медицинский университет» Минздрава России, Владивосток, Россия

Храмова И.А.

ФГБОУ ВО «Тихоокеанский государственный медицинский университет» Минздрава России, Владивосток, Россия

Антонюк М.В.

Владивостокский филиал ФГБУ "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук - НИИ медицинской климатологии и восстановительного лечения, Владивосток

Влияние транскраниальной электростимуляции на клетки макрофагальной системы у женщин с климактерическим синдромом

Журнал: Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физической культуры. 2018;95(3): 4-10

Просмотров : 23

Загрузок :

Как цитировать

Слюсарева Е. Е., Храмова И. А., Антонюк М. В. Влияние транскраниальной электростимуляции на клетки макрофагальной системы у женщин с климактерическим синдромом. Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физической культуры. 2018;95(3):4-10. https://doi.org/10.17116/kurort20189534

Авторы:

Слюсарева Е.Е.

ФГБОУ ВО «Тихоокеанский государственный медицинский университет» Минздрава России, Владивосток, Россия

Все авторы (3)

Обоснование

Особенностью климактерического периода является то, что наряду с выключением репродуктивной функции развиваются возрастные и патологические изменения во многих органах и тканях, возникают и проявляются многие заболевания: опухоли, психозы, неврозы, ожирение, вегетососудистые расстройства [1]. У женщин, вступивших в пременопаузальный период, состояние активности гонад варьирует в широком диапазоне — от овуляторных циклов до эпизодов выключения функции яичников. В интервале между этими крайними ситуациями могут встречаться самые разные уровни активности гипофиза и гипоталамуса. При этом увеличение секреции гонадотропинов происходит на фоне повышенного количества эстрогенов, что отражает центральный (гипоталамический) тип гомеостатической недостаточности, при котором происходит одновременное повышение активности как центрального (гипоталамо-гипофизарный), так и периферического (яичники) звеньев репродуктивной системы [2].

В период перименопаузы изменяется равновесие в гипоталамо-гипофизарной и вегетативной нервной системах, проявляющееся нарушением выработки норадреналина и дофамина, участвующих в процессе терморегуляции [3, 4]. Во время приливов резкий подъем уровня метаболитов норадреналина коррелирует с повышением температуры тела и теплоотдачи. Определенные типы рецепторов серотонина также имеют отношение к нарушениям терморегуляции при приливах. Снижение же серотонина у женщин в перименопаузе происходит параллельно со снижением уровня эстрогенов. Существует предположение, что вегетативные нарушения у женщин в период перименопаузы и ранней постменопаузы могут быть начальными проявлениями нарушений в работе серотонинергической и норадренергической систем, а также изменений уровня нейромедиаторов, связанных с развитием депрессивных состояний [5, 6].

Известно, что полноценность функционирования репродуктивной системы определяется взаимодействием эндокринной и иммунной систем организма [7].

Так, на плазматической мембране макрофагов выявлены рецепторы эстрогенов, прогестерона и других стероидных гормонов. Стимуляция активности макрофагов сопряжена с действием экзогенных неспецифических и специфических иммунных факторов [8]. Среди экзогенных неспецифических факторов, активизирующих функции мононуклеарных фагоцитов, большое значение отводится лекарственным препаратам. Некоторые из них оказывают стимулирующее влияние на фагоцитоз и лизосомные ферменты фагоцитирующих клеток (левамизол), другие — стабилизирующее действие на лизосомные мембраны фагоцитов (спленин, глюкокортикоиды) [9].

Основным методом лечения климактерических расстройств в настоящее время является менопаузальная гормональная терапия (МГТ). Ее использование эффективно купирует вазомоторные симптомы, нормализует сон, улучшает общее самочувствие, а также предупреждает развитие атрофических изменений в урогенитальном тракте [10]. Но назначение МГТ требует оценки исходного состояния здоровья женщины и факторов риска возможных заболеваний, индивидуального подбора дозы, времени начала и путей введения гормонов. Необходимо также учитывать вероятность развития или усугубления гормонозависимых гинекологических заболеваний, наличие противопоказаний к МГТ или нежелание женщины принимать гормональные препараты.

Актуальным является поиск безвредных и эффективных способов немедикаментозной коррекции проявлений климактерического синдрома (КС) [11]. Значительный интерес в этом контексте представляет метод транскраниальной электростимуляции (ТЭС), предложенный В.П. Лебедевым и соавт. (1983), в основе которого лежит активация опиоидэргических структур головного мозга. ТЭС обладает многообразием эффектов, общей направленностью которых является нормализация гомеостаза [12]. Достижения последних лет дают основание рассматривать ТЭС-терапию как перспективный метод лечения К.С. Исследования различных авторов свидетельствуют об активном влиянии ТЭС на функциональное состояние центральной нервной системы, подкорковые структуры головного мозга, вегетативный и гормональный баланс [13]. Описанные в литературе иммунотропные эффекты ТЭС-терапии позволили предположить ее позитивное влияние на функциональную активность моноцитов/макрофагов у женщин с КС.

Цель — исследовать влияние ТЭС-терапии на состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, функциональную активность этих клеток у женщин с вегетососудистыми проявлениями КС.

Материал и методы

Дизайн исследования

Работа представляет собой проспективное одноцентровое экспериментальное открытое контролируемое нерандомизированное исследование. В исследовании участвовали 39 женщин пременопаузального возраста. Основную группу наблюдения составили 23 женщины с вегетососудистыми проявлениями КС, обследованные накануне и после проведения курса ТЭС-терапии. Группу контроля составили 16 здоровых женщин такого же возраста. Обследование и лечение пациенток проводили на базе ГАУЗ «Краевой клинический центр специализированных видов медицинской помощи».

Критерии соответствия

Критерии включения: женщины в возрасте от 45 до 52 лет, подписанное добровольное информированное согласие на проведение лечения с использованием ТЭС-терапии и исследование крови и перитонеальной жидкости.

Критерии исключения: заболевания, требующие лекарственного или оперативного вмешательства на момент включения или в процессе проведения терапии, применение какой-либо гормональной терапии в пределах 6 мес до начала лечения, негормональной терапии, в том числе вагинальных противовоспалительных средств, влияющей на симптомы КС, в течение 3 мес от начала лечения, злокачественные опухоли — в анамнезе, установленные или подозреваемые.

Условия проведения

ТЭС-терапию женщинам проводили в первой половине дня после легкого завтрака. Во время процедуры пациентки должны были лежать спокойно, не отвлекаться, не двигаться, соблюдать тишину, не разговаривать и не читать. После проведения процедуры женщины отдыхали 15–20 мин.

Продолжительность исследования

Обследование и лечение женщин с КС проводили накануне ТЭС-терапии и через 2 мес после ее окончания с февраля по июль 2016 г.

Описание медицинского вмешательства

Женщинам проводили опрос, осмотр с помощью зеркал, бимануальное гинекологическое исследование, ультразвуковое исследование органов малого таза, взятие крови из локтевой вены, пункцию заднего свода влагалища и отсасывание шприцем содержимого полости малого маза на 19-й день менструального цикла.

Пациентки с КС (n=23) получали ТЭС-терапию с помощью аппарата Трансаир-03. Процедуры ТЭС-терапии проводили по 25–30 мин ежедневно, силу тока подбирали индивидуально (от 1 до 2 мА, в среднем 1,6 мА), частота 77 Гц. Курс лечения состоял из 10 процедур. Исследование проводили накануне и через 2 мес после курса лечения.

Основной исход исследования

Конечными точками в проведенном исследовании были исчезновение приливов или уменьшение их количества до менее 10 раз в сутки, что соответствовало легкой степени тяжести КС (по классификации Е.М. Вихляевой); стабилизация лизосомных мембран макрофагальных клеток — снижение показателя стабильности лизосомных мембран (ПСЛМ).

Дополнительные исходы исследования

Дополнительными исходами исследования явились нормализация психоэмоционального состояния; снижение уровня фолликулстимулирующего (ФСГ) и лютеинизирующего (ЛГ) гормонов в сыворотке крови; увеличение уровня прогестерона в сыворотке крови.

Анализ в подгруппах

В исследование вошли женщины от 45 до 52 лет, у которых были приливы до 10–15 раз в сутки, что соответствовало типичной неосложненной форме КС средней степени тяжести (по классификации Е.М. Вихляевой), с ненарушенным ритмом менструаций.

В группу контроля вошли условно здоровые женщины в возрасте от 45 до 52 лет с сохраненным менструальным циклом.

Методы регистрации исходов

Оценивали жалобы больных до и после проведенного лечения: учитывали количество приливов жара к верхней части туловища, лицу и голове, повышенную потливость.

Проведено исследование моноцитов крови и перитонеальных макрофагов однократно в группе здоровых женщин, а у женщин с КС — до и после ТЭС-терапии. Выделение моноцитов крови проводили на градиенте плотности фиколл-верографина центрифугированием крови в течение 30 мин при 400g с последующим отсасыванием микропипеткой кольца градиента [9]. Клетки прикреплялись к поверхности стекла в течение 60 мин при температуре 37 °C.

Перитонеальные макрофаги получали из суспензии, взятой методом пункции заднего влагалищного свода, также выделяли прикреплением клеток к поверхности стекла.

Концентрацию клеток считали в камере Горяева и доводили стерильным физиологическим раствором до 6×106 клеток/мл. Определение стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с расчетом ПСЛМ проводили методом культивирования выделенных клеток в среде 199 с добавлением 0,5% стерильного L-глутамина и 2,5% смешанной человеческой сыворотки, прогретой в течение 30 мин при 56 °C и в течение 12–15 ч при 37 °C. Микрометодом проводили определение секретированного лизоцима (Lсекр.), а после 4– 6-кратного замораживания–оттаивания культивируемых клеток — общего лизоцима (Lобщ.), который равен сумме Lсекр. и L внутриклеточного. На основании полученных результатов Lсекр и Lобщ. высчитывали ПСЛМ по формуле: ПСЛМ=Lсекр./Lобщ.×100%. Проведенные нами ранее исследования выявили выраженные колебания ПСЛМ в зависимости от фазы менструального цикла. Оптимальные значения ПСЛМ (53–58%) отмечены на 19–21-й дни менструального цикла.

Критерием оценки гормонального статуса женщин явилось определение в сыворотке крови гонадотропных (ФСГ, ЛГ) и половых (эстрадиол, прогестерон) гормонов с использованием наборов реактивов «Сименс Хелкза Диагностикс Инк» (США). Венозную кровь брали в утренние часы натощак. Гонадотропины и эстрадиол определяли дважды: на 5-й и 25-й дни менструального цикла. Прогестерон определяли на 25-й день менструального цикла. Количественную оценку содержания гормонов в сыворотке крови проводили методом иммунохемилюминесцентного анализа с помощью аппарата Immulite 2000 («Сименс», США).

Этическая экспертиза

Проведение исследования одобрено междисциплинарным комитетом по этике ГБОУ ВПО ТГМУ (протокол № 5 от 24 марта 2014 г.). Все женщины, участвовавшие в исследовании, подписали добровольное информированное согласие.

Статистический анализ

Размер выборки предварительно не рассчитывался. Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием пакета программ Statistica с применением стандартных методов вариационной статистики и критерия Манна–Уитни для оценки статистически значимых различий. Различие считалось достоверным при р<0,05 [14].

Результаты

Объекты (участники) исследования

В исследование были включены 23 женщины от 45 до 52 лет с вегетососудистыми проявлениями КС средней степени тяжести (приливы до 10 –15 раз в сутки) и регулярным ритмом менструаций (основная группа). Контрольную группу составили 16 условно здоровых менструирующих женщин этого же возраста.

Основные результаты исследования

Проведенные исследования показали, что состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, их функциональная активность имеют различия у женщин без проявлений КС и при его развитии.

Так, установлено, что у пациенток с КС по сравнению со здоровыми женщинами имеет место лабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов. Проведенный курс ТЭС-терапии, напротив, вызывает стабилизацию лизосомных мембран этих клеток (табл. 1).

Таблица 1. ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у здоровых женщин, пациенток с КС до и после ТЭС-терапии (M±m) Примечание. Достоверность различий между сравниваемыми группами: * — p<0,05; ** — p<0,01.

Одновременно с лабилизацией лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с КС наблюдается повышение секреторной активности этих клеток (p<0,01). Как результат стабилизации лизосомных мембран моноцитов/макрофагов на фоне ТЭС-терапии наступает заметное снижение в них секреторной активности (табл. 2).

Таблица 2. Уровень секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у здоровых женщин, пациенток с КС до и после ТЭС-терапии (M±m) Примечание. Достоверность различий между сравниваемыми группами: * — p>0,05; ** — p<0,01.

Напротив, синтез внутриклеточного лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у женщин с КС снижен, причем это снижение более выражено у перитонеальных макрофагов (табл. 3).

Таблица 3. Уровень синтеза лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у здоровых женщин, пациенток с КС до и после ТЭС-терапии (M±m) Примечание. Достоверность различий между сравниваемыми группами: * — p<0,05; ** — p<0,01; *** — p<0,001.
ТЭС-терапия ведет к заметному возрастанию синтеза лизоцима в перитонеальных макрофагах (p<0,01) и в большей степени — моноцитах крови (p<0,001). Изменения функциональной активности макрофагальных клеток имеют место у всех женщин с КС после проведенной ТЭС-терапии.

Дополнительные результаты исследования

У 8 (34,7%) женщин с КС, получавших ТЭС-терапию, было отмечено снижение интенсивности приливов, а у 15 (65,3%) — полное их исчезновение. В результате проведенной ТЭС-терапии произошли положительные изменения гормонального профиля: достоверно снизилось содержание ФСГ в сыворотке крови с 14,1 до 9,2 мМЕ/мл, ЛГ — с 15,7 до 12,3 мМЕ/мл на фоне тенденции к повышению уровня прогестерона с 1,4±0,57 до 28,51±3,57 нмоль/л. Уровень содержания эстрадиола в сыворотке крови не изменился.

Нежелательные явления

Нежелательными явлениями были боли при пункции локтевой вены и в большей степени пункции заднего влагалищного свода.

Обсуждение

Резюме основного результата исследования

Установлено, что у женщин с вегетососудистыми проявлениями КС имеет место нарушение процесса активации макрофагальных клеток. ТЭС-терапия ведет к уменьшению интенсивности приливов или полному их исчезновению. Это сопровождается стабилизацией лизосомных мембран моноцитов/макрофагов, усилением синтеза внутриклеточного лизоцима при снижении его секреции.

Обсуждение основного результата исследования

Выявленная лабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, увеличение ими секреции лизоцима и снижение его синтеза у женщин с вазомоторными проявлениями КС (приливы до 10–15 раз в сутки), вероятно, связаны с гормональными изменениями в пременопаузальном периоде, в частности повышением уровня ФСГ. При этом известно, что действие ФСГ на клеточные рецепторы опосредуется активацией циклического аденозинмонофосфата, влияющей на синтез и секрецию лизоцима в клетках макрофагальной системы [8]. Лизосомомембранотропный эффект, наблюдаемый при колебании уровня ФСГ, также может быть связан с изменением образования эстрадиола, находящегося в прямой зависимости от ФСГ и обладающего лабилизирующим действием в отношении лизосомных мембран макрофагальных клеток [15]. Действие ТЭС-терапии на макрофагальные клетки, возможно, носит опосредованный характер: оно приводит к изменению уровня гонадотропин-рилизинг гормона гипоталамуса и нейротрансмиттеров, принимающих участие в выделении гормонов гипофиза, в частности ФСГ. Уменьшение уровня ФСГ ведет к стабилизации лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, снижению секреции и увеличению синтеза лизоцима этими клетками. Использование ТЭС-терапии в конечном итоге приводит к исчезновению приливов или уменьшению их количества и интенсивности. Таким образом, полученные данные позволяют расширить наше представление о механизмах действия ТЭС-терапии на макрофагальные клетки.

Ограничения исследования

Недостатком является ограниченное число женщин в связи со сложностями получения материала — перитонеальных макрофагов — методом пункции заднего влагалищного свода. Определенные ограничения связаны с исследованием активации макрофагальных клеток в связи со сложностью проводимых расчетов.

Заключение

Наиболее ранним и частым проявлением КС являются приливы. Проведенное нами исследование выявило нарушение процесса активации макрофагальных клеток в группе женщин с КС — выраженную лабилизацию лизосомных мембран, повышение секреции и снижение синтеза внутриклеточного лизоцима. Основным методом лечения климактерических расстройств в настоящее время является МГТ. Но назначение МГТ требует оценки исходного состояния здоровья женщины и факторов риска возможных заболеваний, индивидуального подбора дозы, времени начала и путей введения гормонов. Актуальным является поиск безвредных и эффективных способов немедикаментозной коррекции проявлений К.С. Достижения последних лет дают основание рассматривать ТЭС-терапию как перспективный метод лечения этой патологии. Исследования различных авторов свидетельствуют об активном влиянии ТЭС на функциональное состояние центральной нервной системы, подкорковые структуры головного мозга, вегетативный и гормональный баланс, а описанные в литературе иммунотропные эффекты ТЭС-терапии позволяют предположить ее позитивное влияние на функциональную активность макрофагальных клеток у женщин с К.С. Нами проведено лечение 23 женщин с вегетососудистыми проявлениями КС. У всех пациенток выявлена положительная динамика — уменьшение или полное купирование приливов. При этом наступила стабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, наблюдались усиление в них синтеза и снижение секреции внутриклеточного лизоцима.

Таким образом, курсовое использование ТЭС-терапии не только избавляет пациенток от приливов или снижает их интенсивность, но и вносит коррективы в работу иммунной системы, что положительно сказывается на здоровье женщины.

Дополнительная информация

Источник финансирования. Работа выполнена в рамках реализации научно-исследовательской работы, утвержденной ТГМУ.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Участие авторов: концепция и дизайн исследования; выделение мононуклеаров крови и макрофагов, окраска препаратов, определение состояния стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, уровня секретируемого и синтезированного этими клетками лизоцима, уровня гормонов в сыворотке крови (ФСГ, ЛГ, эстрадиол, прогестерон); статистическая обработка данных — Е.С.; обзор литературы; сбор анамнеза у женщин, гинекологическое исследование, формирование групп обследованных женщин, забор крови из вены и пункция заднего влагалищного свода; написание текста — И.Х.; обоснование выбора физиотерапевтического метода, назначение ТЭС-терапии, контроль за проведенным лечением; статистический анализ полученных данных — М.А.

Благодарности. Авторы благодарят научный отдел ТГМУ.

Сведения об авторах

*Слюсарева Елена Евгеньевна, аспирант кафедры акушерства и гинекологии [Elena Е. Slyusareva, MD, graduate student]; https://orcid.org/0000-0001-9495-8719; eLibrary SPIN: 4131-3050; e-mail: slu-elena@bk.ru

Храмова Ирина Афанасьевна, д.м.н., профессор кафедры акушерства и гинекологии [Irina A. Khramova, MD, PhD, Professor]; https://orcid.org/0000-0002-3843-8281; eLibrary SPIN: 4675-1550; e-mail: irhramova@mail.ru

Антонюк Марина Владимировна, д.м.н., профессор, заведующая лабораторией восстановительного лечения [Marina V. Antonyuk, MD, PhD, Professor]; https://orcid.org/0000-0002-2492-3198; eLibrary SPIN: 3446-4852; e-mail: antonyukm@mail.ru

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail