Использование скрининговых тестов на выявление наиболее распространенных мутаций перед программой вспомогательных репродуктивных технологий

Подготовка к беременности — важный этап при современном развитии медицины. Генетические нарушения, лежащие в основе развития человека, распространены очень широко, из-за таких нарушений около 15% эмбрионов погибает еще до рождения, 3% — при рождении, 3% детей не доживают до взрослого возраста, 20% — не вступают в брак, 10% браков остаются бездетными [1]. Наследственные заболевания — заболевания, возникновение и развитие которых связано с дефектами в ДНК клеток, передаваемыми по наследству через половые клетки — сперматозоиды и яйцеклетки. В основе наследственных заболеваний лежат мутации наследственной информации — хромосомные, генные и митохондриальные. К настоящему времени описано около 2000 болезней человека, вызываемых генетическими нарушениями [2].

К сожалению, ДНК половых клеток может подвергаться вредным влияниям курения, употребления алкоголя, экологической обстановке, перенесенных заболеваний и других внешних и внутренних факторов. Исключительно важно, что эти влияния могут сказаться на генетическом материале будущих родителей на любом возрастном этапе развития. Генная программа, унаследованная от родителей и определяющая генетические особенности ребенка, — неизменная в течение всей жизни человека его характеристика. Среда лишь может изменить потенциал человека в рамках «норм реакций», но не изменить сам геном [3].

Большинство людей несут риск рождения ребенка с наследственным заболеванием. Мутации, приводящие к тяжелым наследственным заболеваниям, представлены у человека в скрытой форме — в виде гетерозиготы [1]. Результаты генетических исследований [4] показали, что в генотипе каждого человека скрывается до 10 рецессивных мутаций. Однако в тех случаях, когда родители являются носителями патогенных мутаций в одном и том же гене, пусть даже это разные мутации, с вероятностью 25%, у них может родиться ребенок с генетической патологией. У такого ребенка не будет ни одной здоровой копии соответствующего гена, с мутантных генов невозможно будет прочитать полноценную инструкцию по построению нужного белка и это приведет к развитию заболевания.

Чтобы оценить риск рождения ребенка с наследственным заболеванием, был разработан скрининговый генетический анализ. Анализ ДНК обоих родителей на определенные мутации, ассоциированные с генетическими заболеваниями, позволит исключить риск прерывания беременности или рождения ребенка с патологией [5].

В лаборатории медико-генетического центра «Genetico» разработан скрининговый генетический тест «Подготовка к беременности». Он включает 31 наиболее распространенную среди европейцев патогенную мутацию, связанную с развитием в общей сложности 23 наследственных заболеваний. В эту панель включены заболевания с особенно тяжелой симптоматикой и высокой смертностью. Не все из них являются наиболее распространенными среди генетических заболеваний, однако качество и/или продолжительность жизни пациентов с такими болезнями крайне низки.

Тестирование мутаций проводится методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием TaqMan проб на микрофлюидных планшетах. Материалом во всех случаях служила периферическая кровь пациента [6, 7].

Анализируемые гены и мутации:

1. CFTR Муковисцидоз

2. DHODH синдром Миллера

3. IDUA Мукополисахаридоз I типа

4. DHCR7 синдром Смита—Лемли—Опица

5. G6PC Гликогеноз 1а

6. LAMB3 Буллезный эпидермолиз

7. GALT Галактоземия

8. IKBKAP Семейная дизавтономия

9. NPC1 Болезнь Ниманна—Пика тип C

10. ADAMTS 13 Тромботическая тромбоцитопеническая пурпура

11. АТР7 В Болезнь Вильсона—Коновалова

12. NBN Синдром хромосомных поломок Ниймеген

13. ARSA Метахроматическая лейкодистрофия

14. TRIP11 Ахондрогенез, тип 1А

15. FAH Тирозинемия, тип 1

16. SLC26A2 Ахондрогенез, тип 1B

17. PMM2 Врожденные нарушения гликозилирования, тип 1a

18. EVC Хондроэктодермальная дисплазия

19. PEX1 Синдром Целлвегер

20. PEX7 Хондродисплазия точечная, ризомелический тип

21. ACADM Дефицит ацил-КоА-дегидрогеназы жирных кислот со средней длиной цепи

22. G6PC Гликогеноз, тип 1а

23. DHCR7 Синдром Смита—Лемли—Опица

24. LAMB3 Буллезный эпидермолиз

25. SERPINα Дефицит α₁-антитрипсина

26. NPHS2 Нефротический синдром стероидрезистентный

27. TCIRG1 Остеопетроз рецессивный

28. FCYT Поликистоз почек рецессивный

29. HEXA Болезнь Тея Сакса

30. CLN1 Нейрональный цероидный липофусциноз типа 1

31. HADHA Дефицит ацил-КоА-дегидрогеназы жирных кислот с длинной цепью

32. ABCA12 Врожденный ихтиоз.

В исследовании приняли участие 47 пациентов: 13 мужчин и 34 женщины, средний возраст женщин 34,96±9,1 года, мужчин — 36,25±9,4 года.

Из 47 проведенных исследований ДНК на носительство мутаций у 41 пациента мутации не выявлены. У 7 пациентов обнаружены различные мутации из исследованного перечня (у 17,07% пациентов выявлена патологическая мутация).

В частности, у мужчины, 36 лет обнаружена мутация ACADM Дефицит ацил-КоА-дегидрогеназы жирных кислот со средней длиной цепи.

У пациента не было проблем с репродуктивной функцией. Спермограмма — нормозооспермия. Предложено пройти генетический тест «Панель подготовки к беременности» супруге пациента, мутации не обнаружены. Предполагаемый исход беременности без риска генетической патологии.

У женщины 30 лет была выявлена мутация ABCA12, данный ген кодирует белок, участвующий в переносе молекул между мембранами, участвует в формировании кожи, может приводить к формированию врожденного ихтиоза. Пациентка обращалась в клинику по поводу проблемы ненаступления самопроизвольной беременности. В анамнезе наблюдалась замершая беременность. Обследование партнера не проводилось. Пациентка готовится к программе ЭКО с последующей генетической диагностикой эмбрионов.

У женщины 41 года выявлена мутация АТР7 В, ген участвует в метаболизме меди в организме, мутация может привести к рождению ребенка с болезнью Вильсона—Коновалова. У пациентки в анамнезе длительное бесплодие и случаи замершей беременности. Обследование партнера не проводилось. Пациентка готовится к программе ЭКО с последующей генетической диагностикой эмбрионов.

У женщины 37 лет обнаружены две мутации ABCA12 и ACAD9, пациентка с первичным бесплодием, многократными попытками ЭКО без достижения результата. Было предложено пройти генетический тест «Панель подготовки к беременности» супругу пациентки, мутации не обнаружены. Пациентке было проведено три программы ЭКО со своими яйцеклетками, во всех случаях наблюдалась остановка в развитии эмбрионов. После выявления данных мутаций пациентке предложено использование донорских яйцеклеток. По всей видимости, данные мутации затрагивают генетические структуры, необходимые для правильного формирования и роста яйцеклеток, поэтому эмбрионы не дорастали даже до 5-х суток развития. При использовании донорских яйцеклеток у пациентки сразу же наступила беременность.

У женщины 33 лет были обнаружены две мутации FAH и ACAD9, пациентка с первичным бесплодием и неудачными попытками стимуляции с программой внутриматочной инсеминации. Ген FAH участвует в обмене веществ, мутации вызывают тирозинемию 1-го типа. Ген участвует в гормональном обмене, возможно, мутация в этом гене приводит к недостаточному формированию пула фолликулов и вызреванию гамет. Пациентке рекомендована стимуляция и программа ЭКО для выявления цитологической патологии.

У 2 пациенток выявлена только мутация ACAD9, по последним данным базы ExAC, данная патология не является значимой [8]. Обеим пациенткам удалось забеременеть самостоятельно без использования ВРТ в лечении бесплодия.

По полученным данным, можно сделать положительный вывод о целесообразности проведения генетического обследования в период планирования беременности. Это поможет своевременно выявить возможные генетические отклонения и скорректировать тактику последующего лечения. Возможно, с применением преимплантационной генетической диагностики эмбрионов. Также можно порекомендовать проведение данного генетического обследования пациентам с множественными неудачными попытками ЭКО программ.

Дата подачи рукописи: 04.02.2017

Финансовый конфликт интересов: отсутствует.

Источники финансирования: отсутствуют.

Иные формы конфликта интересов: отсутствуют.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Ю.К.

Сбор и обработка материала — Т.К., А.К., Ю.К.

Статистическая обработка — Ю.К.

Написание текста — Ю.К.

Редактирование — Т.К., Ю.К.