Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Овсепян М.Р.

Институт молекулярной биологии Национальной академии наук Республики Армения (НАН РА), Ереван

Эбрагимзаде М.Г.

Институт молекулярной биологии Национальной академии наук Республики Армения (НАН РА), Ереван

Габриелян А.Б.

Институт молекулярной биологии Национальной академии наук Республики Армения (НАН РА), Ереван

Оганесян М.Г.

Институт молекулярной биологии Национальной академии наук Республики Армения (НАН РА), Ереван;
Российско-Армянский (Славянский) государственный университет, Ереван

Геворкян А.А.

Медицинский центр "Армения" МЗ Республики Армения, Ереван

Мамиконян А.А.

Медицинский центр "Армения" МЗ Республики Армения, Ереван

Бояджян А.С.

Институт молекулярной биологии Национальной академии наук Республики Армения (НАН РА), Ереван;
Российско-Армянский (Славянский) государственный университет, Ереван

Аномальный липопротеин-Х при сахарном диабете 2-го ти

Авторы:

Овсепян М.Р., Эбрагимзаде М.Г., Габриелян А.Б., Оганесян М.Г., Геворкян А.А., Мамиконян А.А., Бояджян А.С.

Подробнее об авторах

Журнал: Проблемы эндокринологии. 2012;58(4): 18‑21

Просмотров: 455

Загрузок: 8

Как цитировать:

Овсепян М.Р., Эбрагимзаде М.Г., Габриелян А.Б., Оганесян М.Г., Геворкян А.А., Мамиконян А.А., Бояджян А.С. Аномальный липопротеин-Х при сахарном диабете 2-го ти. Проблемы эндокринологии. 2012;58(4):18‑21.
Ovsepian MR, Ébragimzade MG, Gabrielian AB, Oganesian MG, Gevorkian AA, Mamikonian AA, Boiadzhian AS. Anomalous lipoprotein-X in type 2 diabetes mellitus. Problemy Endokrinologii. 2012;58(4):18‑21. (In Russ.).

?>

Сахарный диабет 2-го типа (СД2) является наиболее распространенной формой диабета и характеризуется нарушением углеводного, белкового и липидного обмена, включая дислипидемию и увеличение уровней липопротеинов низкой плотности (ЛПНП ) [1, 2].

Липопротеин-Х (ЛП-Х) представляет собой аномальный подкласс ЛПНП, характеризующийся высоким содержанием фосфолипидов и неэтерифицированного холестерина и низким содержанием эфиров холестерина, триглицеридов и белка [3, 4]. Среди белков, входящих в состав ЛП-Х, преобладают альбумин и аполипопротеин-С. ЛП-Х был впервые обнаружен в крови больных механической желтухой [3]. Высокие уровни ЛП-Х в крови отмечены также при семейном дефиците фермента лецитинхолестеринацилтрансферазы (ЛХАТ) [3]. Дальнейшие исследования показали наличие ЛП-Х в крови при широком ряде заболеваний печени и желчных протоков, ассоциирующих с холестазом [5]. Кроме того, наши исследования ЛП-Х в крови больных семейной средиземноморской лихорадкой (ССЛ) и ишемическим инсультом, отягощенным СД2 [6].

Цель настоящей работы — анализ крови больных СД2 на наличие ЛП-Х во фракции ЛПНП.

Материал и методы

Исследованы образцы сывороток 40 больных СД2 (21 женщина, 19 мужчин), находящихся на лечении в Республиканском медицинском центре «Армения» МЗ РА. Диагноз установлен в соответствии с Международной классификацией болезней (10-e издание). Средний возраст больных СД2 составлял 55±10 лет (М±σ), cредняя давность заболевания — 11±7 лет (М±σ). У 96% больных СД2 наблюдалось тяжелое течение заболевания, сопровождающееся характерными для его поздних этапов осложнениями — диабетической макроангиопатией сосудов нижних конечностей, нефропатией, ретинопатей, нейропатией. Часть пациентов (30%) получали комбинированную антилипидемическую терапию, включая ее медикаментозную (статины) и немедикаментозную (гиполипидемическая диета, регулярные физические упражнения) составляющие. Контрольная группа включала 40 здоровых лиц (20 женщин и 20 мужчин) без наследственной отягощенности по инсультам, инфаркту миокарда, ССЛ, дефициту ЛХАТ или СД. Здоровые лица (ЗЛ) не принимали каких-либо лекарственных препаратов как минимум за 12 мес до начала исследования. Никто из включенных в исследование лиц не страдал заболеваниями печени и желчных протоков, ассоциирующихся с холестазом, ССЛ, семейным дефицитом ЛХАТ, онкологическими или аутоиммунными заболеваниями, не переносил инсульт или инфаркт миокарда, острых инфекционных заболеваний, не подвергался хирургическим операциям и не принимал препараты противовоспалительного или иммуномодуляторного действия как минимум за 12 мес до начала исследования. Пробы крови брали с согласия пациентов и разрешения Комитета по этике Института молекулярной биологии НАН РА.

Обобщенная характеристика вовлеченных в настоящее исследование больных и здоровых лиц приведена в табл. 1.

Забор крови проводили в 9:00 ч натощак пункцией локтевой вены, пробы сразу помещали на лед. В части пробы (цельная кровь) сразу же определяли содержание HbA1c. Другую часть пробы после свертывания крови центрифугировали при 3000g в течение 10 мин и отбирали сыворотку, которую использовали для определения HbA1c, холестерина, триглицеридов, ЛПНП. Образцы сыворотки хранили при –30 °C.

Определение процентного содержания (%) HbA1c в образцах цельной крови проводили колориметрическим методом, используя коммерческий набор реагентов («Biosystems», Коста Брава, Испания), согласно инструкции производителя.

Содержание общего холестерина и триглицеридов в сыворотке определяли колориметрическим методом на автоматическом биохимическом анализаторе Hycel Lisa («Chema Dignostica», Италия) с использованием коммерческих наборов реагентов («Human», Германия), согласно инструкциям производителя и выражали в ммоль/л.

Качественный и количественный анализ ЛПНП, включая ЛП-Х и бета-липопротеин (бета-ЛП), в сыворотке проводили электрофорезом (ЭФ) в бактоагаре («Difco», США), с последующей полианионной преципитацией in situ [7]. ЭФ проводили на стеклянных пластинах (7,7×2,6 см) в 1% бактоагаровом геле толщиной 1,5 мм, содержащем 0,1% гепарин при комнатной температуре. В каждую лунку наносили по 40 мкл сыворотки. Использовали аппаратуру Wide Mini-Sub Cell GT («Bio-Rad Laboratories, Inc.», США) в течение 1,5 ч при напряжении на электродах 120 V в 50 мМ барбиталовом буфере, рН 8,6. По окончании электрофореза гели инкубировали 30 мин при комнатной температуре в 0,1 М растворе MgCl2, содержащем 0,25% гепарин и 0,9% NaCl. ЛПНП взаимодействуют с гепарином (так называемая полианионная преципитация) и выявляются в виде белых полос на геле. Комплексы ЛПНП с гепарином фиксировали инкубацией в течение 15 мин в 2% водном растворе формальдегида.

Все реактивы, кроме отмеченных, произведены «Sigma-Aldrich Co.» (США).

Относительное содержание ЛП-Х и бета-ЛП определяли полуколичественным методом — измерением интегральных интенсивностей окрашенных полос на геле и выражали в условных единицах (УЕ) интегральной интенсивности (ЕИН). Для этого гели сканировали, а их изображения обрабатывали на компьютере. Соотношениe ЛП-Х/бета-ЛП оценивали сравнением интегральных интенсивностей соответствующих полос в геле и выражали в процентах (%), принимая за 100% сумму интегральных интенсивностей обеих полос (ЛП-Х + бета-ЛП).

Обработку полученных данных проводили с помощью программного пакета GraphPadPrizm 3.03 («GraphPad Softwaer Inc.», США).

Результаты и обсуждение

У всех 40 больных СД2 в сыворотке обнаруживался аномальный ЛП-Х, чего не наблюдалось у ЗЛ. Отсутствие ЛП-Х в норме было ранее показано как нами, так и другими авторами [5, 6]. Следует отметить, что в сыворотке как больных СД2, так и ЗЛ присутствовали также бета-ЛП. При этом их содержание у больных значительно превышало таковое у ЗЛ, что характерно для СД2 [1, 2]. В процентном соотношении у больных СД2 преобладали бета-ЛП (ЛП-Х/бета-ЛП=25,3%±1,9%/74,7±5,7%). Полученные данные показаны на рисунке

Рисунок 1. Типичный образец электрофореграммы, полученной при определении ЛПНП в сыворотке крови больных СД2 (а) и ЗЛ (б).
и в табл. 2.
В табл. 2 представлены также и другие показатели липидного обмена больных и ЗЛ.

Таким образом, результаты настоящего исследования впервые демонстрируют присутствие ЛП-Х в крови больных СД2.

Как отмечено выше, ЛП-Х обнаруживается в крови при заболеваниях печени и желчных протоков, ассоциирующихся с холестазом, ССЛ, семейном дефиците ЛХАТ и инсультах [5, 6]. Патогенетическая роль и механизмы генерации ЛП-Х при отмеченных заболеваниях до настоящего времени не установлены.

Ряд экспериментальных и клинических данных [8—10] свидетельствуeт о том, что воспалительные процессы играют важную патогенетическую роль как в возникновении диабета, так и в развитии его поздних осложнений. Интересно, что, как показывают результаты исследований invitro, ЛП-Х стимулирует экспрессию моноцитарного хемотаксического белка-1 (MCP-1) [11], а наши имеющиеся данные свидетельствуют о повышенной экспрессии этого провоспалительного хемокина у больных СД2 [12] и его высоких уровнях в крови при данном заболевании [13, 14]. MCP-1 относится к хемокинам — подклассу цитокинов, одна из функций которых состоит в хемотаксисе и активации различных популяций лейкоцитов [15]. MCP-1 продуцируется многими типами клеток, включая мононуклеарные клетки, тучные клетки, Т-клетки, фибробласты, эндотелиальные клетки, клетки костного мозга, эпителиальные клетки и астроциты. Он выступает в роли мощного аттрактанта для моноцитов/макрофагов и активированных Т-лимфоцитов [15]. Так, индуцируемая MCP-1 миграция моноцитов в очаг инсульта, где они трансформируются в макрофаги и далее фагоцитируют поврежденные клетки, вносит существенный вклад в развитие постишемического воспалительного ответа [16]. Таким образом, можно предположить, что ЛП-Х стимулирует развитие воспалительных реакций при СД2, индуцируя экспрессию MCP-1.

С другой стороны, недавно показано, что наличие ЛП-Х в общей популяции ЛПНП препятствует окислению ЛПНП [17]; тем самым ЛП-Х проявляет антиатерогенный эффект [18]. Следовательно, наличие ЛП-Х в популяции ЛПНП при СД2 может быть также обусловлено компенсаторными реакциями организма в ответ на характерное для этой патологии высокое содержание атерогенных ЛПНП [19].

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — А.С. Бояджян, М.Р. Овсепян

Сбор и обработка материала — М.Г. Оганесян, А.Б. Габриелян, А.А. Геворкян, А.А. Мамиконян

Статистическая обработка данных — М.Г. Эбрагимзаде, А.Б. Габриелян

Написание текста — М.Р. Овсепян

Редактирование — А.С. Бояджян

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail