Введение
Актуальность определения генотипа вируса гепатита B (ВГВ) обусловлена его влиянием на тяжесть течения, прогноз лечения и исхода заболевания [1—3]. Эволюция ВГВ в разных популяциях и разных регионах мира привела к существованию 10 известных генотипов (A-J), различающихся между собой на уровне нуклеотидной последовательности генома более чем на 8% и отражающих отличительные особенности географии возбудителя [1, 4—6]. Разные генотипы ВГВ связаны с различными клиническими фенотипами и прогнозом. Например, некоторые исследования показали, что по сравнению с генотипами B и C генотип A чаще приводит к хронизации инфекции [7], генотипы A и B связаны с более высокой частотой ответа на интерферонотерапию по сравнению с генотипами C и D [5], при генотипе D чаще происходит сероконверсия по HBeAg по сравнению с генотипом A [8], при генотипе B чаще развивается лекарственная резистентность [9], чем при генотипе C, и генотип C связан с более высоким риском развития гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК), чем генотип B [10]. Кроме того, генотип ВГВ способен оказывать влияние и на исходы гепатита дельта, поскольку инфекция вируса гепатита дельта (ВГD) возможна только в присутствии ВГВ, так как поверхностный белок ВГВ (HBsAg) необходим для формирования внешней оболочки вириона ВГD [11]. Таким образом, определение генотипа ВГВ может иметь важное значение с клинической точки зрения для определения прогноза исхода и выбора тактики терапии. Генотипирование ВГВ, как правило, основано на использовании молекулярных методов, наиболее часто для этих целей применяют ПЦР с генотип-специфичными праймерами или амплификацию фрагмента вирусного генома с последующим секвенированием. Коинфекция ВГD зачастую приводит к подавлению репликации ВГВ и соответственно к очень низкой вирусной нагрузке этого вируса [12]. Поэтому прямое определение генотипа ВГВ по ДНК в образцах крови пациентов с гепатитом дельта может быть невозможным из-за недетектируемой концентрации ДНК ВГВ. В то же время в таких образцах присутствует достаточное количество белка HBsAg [13].
Оказалось, что определить генотип ВГВ в HBsAg-положительных образцах можно с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) с панелью моноклональных антител (МАТ) [14]. Отечественные реагенты (лабораторные версии тестов), позволяющие определять основные циркулирующие на территории РФ генотипы ВГВ (A, C, D) данным методом, разработаны относительно недавно [15, 16].
Цель работы — сопоставление результатов определения генотипов ВГВ в HBsAg-положительных образцах сыворотки крови с использованием панели МАТ собственной разработки с результатами молекулярно-биологических исследований ДНК ВГВ для оценки возможности применения данного метода генотипирования ВГВ в образцах сыворотки крови пациентов с хроническим гепатитом дельта; определение генотипов ВГВ в образцах сыворотки крови пациентов с гепатитом дельта, в том числе с недетектируемым уровнем ДНК ВГВ, с помощью разработанного набора реагентов.
Материал и методы
Образцы сыворотки крови
Собраны следующие HBsAg-положительные образцы:
— с диагнозом «хронический гепатит B (ХГВ)» — 122 HBsAg-положительных образца сыворотки крови, в 2017 г. от жителей Республики Саха (Якутия);
— с диагнозом «хронический гепатит B с дельта агентом» — 211 HBsAg-положительных образцов сыворотки крови пациентов двух регионов: Республика Саха (Якутия) — 12 образцов, в 2017 г.; Республика Тыва — 199 образцов, в 2016—2017 гг.
От каждого включенного в исследование участника было получено добровольное информированное согласие.
Определение генотипа с помощью панели МАТ
В работе генотипы ВГВ в образцах определяли методом ИФА в лабораторной версии теста с панелью МАТ собственной разработки [15, 16], позволяющей определять основные циркулирующие на территории РФ варианты серотипов HBsAg/генотипов ВГВ: ayw2/D, ayw3/D, adw2/A, adrq+/C. Методика была применена с некоторой модификацией. Согласно [16], МАТ Н2 позволяет «отличить» серотип HBsAg ayw2 от ayw3 в пределах одного генотипа D. Исследование HBsAg-положительных образцов сыворотки крови с тремя конъюгатами МАТ (SM, E1, D4) позволяет сделать вывод о генотипе ВГВ: A, C или D (табл. 1). Определяемые таким образом генотипы являются предсказанными на основании серотипов HBsAg.
Таблица 1. Реакции HBsAg-положительных образцов с конъюгатами МАТ-ПХ
| Конъюгат МАТ-ПХ | Реакция | ||
| SM | Положительная | Положительная | Положительная |
| E1 | Положительная | Отрицательная | Отрицательная |
| D4 | ¤ | Положительная | Отрицательная |
| Вывод | Генотип D | Генотип A | Генотип C |
Примечание. ¤ — результат может быть как положительным, так и отрицательным.
Реакция считается положительной, если коэффициент позитивности (Кпоз.) больше или равен 1. Кпоз. вычисляется по формуле:
Кпоз. = ОПобр./ОПкрит.,
где ОПобр. — значение оптической плотности (ОП) исследуемого образца, ОПкрит. — критическое значение ОП. Для каждого конъюгата МАТ-ПХ значение ОПкрит. вычисляется отдельно.
Определение концентрации HBsAg
Для части образцов сыворотки крови, давших невалидные результаты в тесте с МАТ, определяли концентрацию HBsAg в коммерческом ИФА-тесте (HBsAg-ИФА-БЕСТ-количественный, АО «Вектор-Бест», Россия) по протоколу производителя.
Молекулярно-биологические методы
Генотип ВГВ в образцах определяли молекулярно-биологическими методами, включающими выделение ДНК, амплификацию участка генома S-гена (713 нт), секвенирование по Сэнгеру, филогенетический анализ полученных ДНК последовательностей вирусных изолятов.
Выделение ДНК и ПЦР. Выделение вирусной ДНК из образцов сыворотки крови проводили с помощью набора MagNA Pure Compact Nucleic Acid Isolation Kit I на автоматической станции MagNA Pure Compact («Roche Applied Science», Mannheim, Германия) в соответствии с инструкцией производителя. Определение ДНК ВГВ проводили в ПЦР с вложенными праймерами к консервативному участку перекрывающихся генов S и P, кодирующих соответственно поверхностный белок и ДНК-полимеразу ВГВ. Чувствительность выявления ДНК ВГВ в данной реакции составляла не менее 50 МЕ/мл по результатам тестирования серии предельных разведений образцов с известной концентрацией ДНК ВГВ. Амплификацию в ПЦР с высокоточной ДНК-полимеразой проводили с помощью набора Fast Start High Fidelity PCR System («Roche Applied Science», Германия) по протоколу производителя со следующими праймерами: 5’— cct gct ggt ggc tcc agt tc —3’ (внешний, прямой), 5’— cca caa ttc ktt gac ata ctt tcca —3’ (внешний, обратный), 5’— ccg agg act ggg gac cctg —3’(внутренний, прямой), 5’—ggt tag ggt tta aat gta tacc -3’(внутренний, обратный). Условия для обоих раундов ПЦР были следующими: 94 °C — 2 мин, затем 35 циклов: денатурация при 94 °C — 45 с, отжиг при 55 °C — 45 с и удлинение цепи при 72 °C — 1 мин 30 с. Полученный в ПЦР продукт величиной 713 п.о. вырезали из геля и выделяли из агарозы с помощью набора QIA quick Gel Extraction kit («QIAGEN», Hilden, Германия). Первичную нуклеотидную последовательность определяли на автоматическом секвенаторе 3500 Genetic Analyzer («ABI», Foster City, США) с использованием набора Big Dye Terminator v 3.1 Cycle Sequencing Kit.
Анализ всех нуклеотидных и предсказанных аминокислотных последовательностей ВГВ выполняли с помощью программного обеспечения MEGA 7.0.18. Генотип ВГВ определяли на основании результатов филогенетического анализа. Для определения генотипов использовалась классификация согласно последним рекомендациям ICTV [17], а для дополнительного разделения на субгенотипы — классификация, предложенная A. Kramvis [4].
Филогенетическое дерево для визуализации результатов анализа было построено методом ML (максимального правдоподобия), реализованном в пакете PhyML 3.0 [18]. Оптимальная модель была выбрана с помощью jModelTest2 [19]: модель нуклеотидной эволюции — GTR, эвристика для поиска в пространстве деревьев — NNI (обмен ближайшими соседями), оценка качества дерева — aLRT SH-like [20] анализ. Визуализация полученного дерева осуществлена с помощью FigTree v1.4.3.
Описание методов статистического анализа
Материалы исследования были подвергнуты статистической обработке с использованием методов параметрического и непараметрического анализа. Накопление и систематизацию исходной информации и визуализацию полученных результатов осуществляли в электронных таблицах Microsoft Office Excel 2016. Статистический анализ проводили с использованием программы Excel. Анализ четырехпольных таблиц с использованием непараметрических статистических критериев проводили при помощи критерия χ2 с помощью онлайн-калькулятора [21].
Результаты и обсуждение
Для того чтобы иметь доказательную базу для исследований, был проведен филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей ВГВ, выделенных из образцов сыворотки крови пациентов с ХГВ. Всего при тестировании 122 образцов сыворотки крови от пациентов с ХГВ из Республики Саха (Якутия) ДНК ВГВ была выявлена в 86 (70,5%) образцах. Распределение генотипов ВГВ в них оказалось следующим: A — 36% (n=31), C — 6% (n=5); D — 58% (n=50). Генотип A был представлен субгенотипом A2 (100%), генотип D — субгенотипами D1 (1 изолят, 2%), D2 (11 изолятов, 22%) и D3 (36 изолятов, 72%). Для двух геноизолятов генотипа D (4%) субгенотип установить не удалось.
При исследовании 211 образцов от пациентов с гепатитом дельта из Республики Тыва в 8 (4%) образцах была выявлена ДНК ВГВ и определен генотип D (субгенотип D1 — 5 изолятов, субгенотип D2 — 3 изолята), в остальных 203 (96%) образцах генотип ВГВ не был установлен из-за недетектируемой ДНК ВГВ.
В табл. 2 представлены число валидных результатов, полученных в лабораторной версии теста, основанного на применении МАТ, и число совпавших результатов двух методик (молекулярный метод генотипирования и МАТ) при тестировании образцов сыворотки крови пациентов с диагнозами: ХГВ и гепатит дельта.
Таблица 2. Число валидных результатов, полученных в разработанном тесте на основе МАТ, и число совпавших результатов двух методик (молекулярный метод генотипирования и МАТ) при тестировании образцов сыворотки крови пациентов с диагнозами: ХГВ и гепатит D
| Диагноз | Группы образцов | Число образцов | Валидных результатов в тесте с МАТ (%) | Число совпавших результатов двух методов (%) |
| ХГВ | ДНК ВГВ выявлена (1-я группа) | 86 | 82/86 (95) | 81/82 (99) |
| ДНК ВГВ не выявлена (2-я группа) | 36 | 35/36 (97) | н.п. | |
| Всего ХГВ | 122 | 117/122 (96) | н.п. | |
| Гепатит D | ДНК ВГВ выявлена (3-я группа) | 8 | 8/8 (100) | 8/8 (100) |
| ДНК ВГВ не выявлена (4-я группа) | 203 | 195/203 (96) | н.п. | |
| Всего гепатит D | 211 | 203/211 (96) | н.п. |
Примечание. * н.п. — неприменимо.
С помощью разработанного нами набора МАТ в целом, для всех групп образцов, было получено 96% (320/333) валидных результатов. Для образцов от пациентов с ХГВ с выявленной ДНК ВГВ (1-я группа) было получено 95% (82/86) валидных результатов. Для 2 из 4 образцов в этой группе, результаты которых признаны невалидными, была определена концентрация HBsAg — 8 и 51 МЕ/мл соответственно (два других образца закончились). Для 81/82 (99%) образцов в этой группе результаты определения генотипа ВГВ совпали с результатами анализа нуклеотидных последовательностей ДНК ВГВ. Для 1 образца (13Я) были получены дискордантные результаты: с использованием панели МАТ был установлен генотип A, в то время как филогенетический анализ нуклеотидной последовательности указывал на принадлежность генотипу C. Для данного изолята на основании аминокислотной последовательности был предсказан серотип adrq+ генотипа C ВГВ с присутствием аминокислотной замены I126T в поверхностном белке ВГВ.
В группе образцов от пациентов с диагнозом ХГВ с недетектируемой концентрацией ДНК ВГВ при чувствительности детекции около 50 МЕ/мл (2-я группа) валидные результаты с помощью разработанных нами реагентов были получены в 97% (35/36) случаев (см. табл. 2). При этом высокий (99%) показатель совпадения результатов определения генотипов ВГВ, полученный на охарактеризованной молекулярно-биологическими методами панели образцов, предполагает высокую вероятность получения верных результатов с помощью панели МАТ при исследовании HBsAg-положительных образцов сыворотки крови пациентов с недетектируемой концентрацией ДНК ВГВ. При исследовании образцов из 2-й группы с помощью разработанных реагентов распределение генотипов ВГВ было следующим: генотип A — 31% (n=11), генотип C — 3% (n=1), генотип D — 66% (n=23) (табл. 3). В целом для образцов от пациентов с ХГВ (объединенные 1-я и 2-я группы) соотношение генотипов ВГВ A:C:D было 37:3:60%.
Таблица 3. Результаты определения генотипов ВГВ, полученные в разработанном тесте с применением МАТ в образцах сыворотки крови пациентов с ХГВ и гепатитом D
| Диагноз | Группы образцов | Генотип A | Генотип C | Генотип D |
| ХГВ | ДНК ВГВ выявлена (1-я группа) | 32 (39%) | 3 (4%) | 47 (57%) |
| ДНК ВГВ не выявлена (2-я группа) | 11 (31%) | 1 (3%) | 23 (66%) | |
| Итого ХГВ | 43 (37%) | 4 (3%) | 70 (60%) | |
| Гепатит D | ДНК ВГВ выявлена (3-я группа) | — | — | 8 (100%) |
| ДНК ВГВ не выявлена (4-я группа) | 17 (8,7%) | — | 178 (91,3%) | |
| Итого гепатит D | 17 (8,4%) | — | 186 (91,6%) |
Реакции HBsAg-положительных образцов сыворотки крови пациентов с ХГВ с конъюгатами МАТ-ПХ, соответствующие генотипам A, C и D ВГВ, показаны на рис. 1, см. https://mediasphera.ru/upload/medialibrary/files/Mol_genetika_2022_02_047_add.zip . Для образцов, содержащих ВГВ генотипа A, характерно наличие реакций с конъюгатами SM, D4 и отсутствие реакции с E1 (см. рис. 1, а, см. https://mediasphera.ru/upload/medialibrary/files/Mol_genetika_2022_02_047_add.zip ); для образцов, содержащих ВГВ генотипа C, характерно наличие реакций с конъюгатом SM и отсутствие реакций с E1 и D4 (см. рис. 1, б, см. https://mediasphera.ru/upload/medialibrary/files/Mol_genetika_2022_02_047_add.zip ); для образцов, содержащих ВГВ генотипа D, характерно наличие реакций с конъюгатами SM, E1 и отсутствие/наличие реакции с конъюгатом D4 (см. рис. 1, в, см. https://mediasphera.ru/upload/medialibrary/files/Mol_genetika_2022_02_047_add.zip ).
Высокая степень совпадения результатов генотипирования ВГВ, полученных двумя методами, позволила ожидать высокую достоверность результатов генотипирования ВГВ с панелью МАТ в образцах от пациентов с гепатитом дельта. Следует отметить, что из образцов сыворотки крови пациентов с диагнозом «гепатит дельта» достоверно реже удавалось выявить ДНК ВГВ, чем в группе ХГВ (3,8% против 70,5% соответственно, p<0,001). При этом доля образцов с недетектируемым уровнем ДНК ВГВ (4-я группа, 203 образца) в нашем исследовании составила 96,2% от общего числа образцов пациентов с диагнозом «гепатит дельта» (см. табл. 2).
При исследовании образцов пациентов с диагнозом «гепатит дельта» с помощью разработанных нами реагентов было получено 96,2% (203/211) валидных результатов генотипирования ВГВ (см. табл. 2). Установлены следующие генотипы ВГВ: A — 17 (8,4%) образцов и D — 186 (91,6%) (см. табл. 3). При этом результаты определения генотипов ВГВ двумя методами, полученные для 8 образов, позитивных по ДНК ВГВ (3-я группа), полностью совпали. Все амплифицированные и секвенированные последовательности ВГВ в этой группе образцов были отнесены к генотипу D ВГВ. Кроме того, разработанный метод иммуноферментного анализа с панелью МАТ позволил достоверно чаще определять генотип ВГВ по сравнению со стандартными молекулярно-биологическими методами (96,2% против 3,8%, p<0,001) у пациентов с гепатитом дельта. Данное преимущество связано с нередким отсутствием детектируемой ДНК ВГВ на фоне достаточного для анализа количества HBsAg у таких пациентов.
Взаимодействие антигена в образцах пациентов с гепатитом дельта с коньюгатами МАТ-ПХ представлено на рис. 2, см.https://mediasphera.ru/upload/medialibrary/files/Mol_genetika_2022_02_048_add.zip, аналогично данным по образцам от пациентов с ХГВ, приведенным на рис. 1.
Проблема изучения сочетанной инфекции ВГВ и ВГD для целей более специфического лечения сформулирована в мире уже давно [22]. Данная патология трудноизлечима, вследствие этого любые попытки более целенаправленно и с меньшими затратами произвести лечение необходимы. Течение хронической ВГВ-инфекции обычно включает различные клинические фазы, каждая из которых потенциально может длиться десятилетиями. Четко определенные и верифицированные диагностические маркеры в сыворотке крови и по биопсии печени позволяют оценить тяжесть заболевания, состояние репликации вируса, стратификацию риска для пациента и решения о лечении [23].
Было обнаружено, что различные генотипы и мутации генома ВГВ связаны с этими заболеваниями печени и прогрессированием [1, 3, 7, 8]. Однако наши знания о клинической значимости генотипов ВГВ и генетических вариантов вируса у пациентов с ХГВ все еще весьма ограничены и неоднозначны из-за противоречивых данных из разных регионов [24—26].
Для больных ВГD этих данных еще меньше из-за невозможности детектировать ДНК ВГВ молекулярными методами [11]. Из данных литературы известно, что серотипировать ВГВ можно, основываясь на последовательности аминокислот, присутствующих в пяти известных специфических положениях (aa 122, 160, 127, 159, 140) на HBsAg, как описано ранее [27].
Результаты, полученные в настоящем исследовании, делают возможным легко определить генотип ВГВ с помощью иммуноферментного анализа с панелью МАТ у пациентов, инфицированных ВГВ и ВГD.
Для того чтобы оценить возможность применения разработанного метода (МАТ) генотипирования ВГВ у больных, инфицированных сочетанной формой гепатита B и дельта, валидировали данные теста МАТ у больных моноинфекцией ХГВ с результатами, полученными при использовании молекулярных методов. С помощью разработанного нами набора МАТ для группы образцов сыворотки крови больных ХГВ с выделенной ДНК ВГВ в данном исследовании было получено 95% валидных результатов, что значительно превысило аналогичный показатель, полученный при первичном испытании [16] данного метода. Ранее при исследовании архивных образцов сыворотки крови со сроком хранения не менее 11 лет, претерпевших несколько циклов замораживания/размораживания, было получено 84% (91/108) валидных результатов [16]. В текущем исследовании образцы имели срок хранения не более 2 лет и хранились без размораживания при –70 °C, что позволило получить достоверно более высокое число валидных результатов (p<0,01, χ2). Данные различия, по-видимому, связаны с влиянием как минимум двух факторов: преаналитического этапа (подготовка образцов, сыворотка/плазма) и хранения образцов (температура, продолжительность, повторное замораживание).
При генотипировании образцов сыворотки крови пациентов из данных групп с помощью разработанных нами реагентов мы показали циркуляцию генотипов A, D и C ВГВ в Республике Саха (Якутия) и A, D — в Республике Тыва. Эти данные подтверждают географическое разнообразие распределения генотипов на территории Российской Федерации, показанное ранее. Так, С.С. Слепцова показала, что в популяции больных с ХГВ Республики Саха (Якутия) генотип D был обнаружен в 38% случаев, генотип A — в 24,1%, генотип C — в 24,1%, в 13,8% (4 человека) случаев одновременно присутствовали 2 генотипа ВГВ [28]. Выполненный ранее филогенетический анализ последовательностей ВГВ, выделенных от позитивных по ДНК ВГВ лиц, показал преобладание циркуляции генотипа D двух серотипов (ayw2, ayw3) ВГВ на территории Республики Тыва — 96,9%. Генотип A ВГВ был определен у 3,1% пациентов из данного региона [29]. Таким образом, в исследование были включены образцы из двух регионов с разным соотношением циркулирующих генотипов ВГВ.
В настоящем исследовании показано 99% совпадение результатов определения генотипов ВГВ, полученное на охарактеризованной молекулярно-биологическими методами панели образцов, что гарантирует высокую вероятность получения верных результатов с помощью панели МАТ при исследовании HBsAg-положительных образцов сыворотки крови пациентов с недетектируемым уровнем ДНК ВГВ. Всего лишь для 1 образца были получены дискордантные результаты: с использованием панели МАТ был установлен генотип A, в то время как филогенетический анализ нуклеотидной последовательности указывал на принадлежность генотипу C. Для данного изолята по выведенной аминокислотной последовательности был предсказан серотип adrq+ генотипа C ВГВ, но с заменой I126T. Вероятно, данная замена в аминокислотной позиции, находящейся внутри основной иммуногенной детерминанты HBsAg (а-детерминанты, аа позиции 124-147 [30]), могла послужить причиной полученных расхождений при генотипировании данного изолята. Эта особенность замены I126T подтверждается результатами предыдущей работы, когда выделенный изолят с такой же аминокислотной заменой демонстрировал аналогичное поведение [16].
Для части исследуемых образцов с диагнозом ХГВ не удалось выявить ДНК ВГВ при чувствительности детекции 50 МЕ/мл. Такой результат, вероятно, связан с более низким уровнем вирусной нагрузки, поскольку известно, что у больных хроническими формами гепатита B этот показатель значительно меньше, чем при острой инфекции [31]. Однако важным остается вопрос о влиянии генотипа ВГВ на уровень вирусной нагрузки. Так, в исследовании P. Grabarczyk и соавт. показано, что доноры, инфицированные генотипом A, имели более высокую вирусную нагрузку, чем доноры, инфицированные генотипом D (4,15 log МЕ/мл по сравнению с 3,11 log МЕ/мл) [32].
Возможность определения генотипа ВГВ в HBsAg-положительных образцах реализуется в полной мере в группе пациентов с гепатитом дельта. Наши данные подтверждают исследования B. Heidrich и соавт., показавших, что у пациентов с хроническим гепатитом дельта нередко отсутствует детектируемая ДНК ВГВ, что предположительно может свидетельствовать о подавлении ВГD репликации ВГВ [33]. В нашем исследовании в образцах сыворотки крови пациентов с гепатитом дельта достоверно реже удавалось выявить ДНК ВГВ по сравнению с пациентами с моноинфекцией ВГВ (3,8% против 70,5% соответственно, p<0,001).
Как известно, пациенты с гепатитом дельта имеют значительное количество в крови белка HBsAg, поскольку он формирует внешние оболочки вирионов обоих вирусов — ВГВ и ВГD [34]. Соответственно, разработанный метод иммуноферментного анализа с панелью МАТ позволил достоверно чаще определять генотип ВГВ по сравнению со стандартными молекулярно-биологическими методами (96,2% против 3,8% соответственно, p<0,001) у пациентов с гепатитом дельта.
В нашем исследовании в группе пациентов с гепатитом дельта были выявлены только генотипы A и D ВГВ, в то время как в группе пациентов ХГВ, помимо указанных генотипов, был выявлен также генотип C ВГВ. Эти данные еще раз подтверждают географическое распределение циркуляции генотипов: генотипы A, D и C ВГВ характерны для территории Республики Саха (Якутия), а генотипы A и D с преобладанием генотипа D при спорадическом выявлении генотипа A — для территории Республики Тыва [28, 29]. На данном этапе исследований невозможно утверждать, что какой-либо генотип ВГВ связан с более высокой вероятностью коинфекции ВГD, поскольку представленные данные получены на выборке образцов из региона, где преобладает один генотип ВГВ (Республика Тыва). Дальнейшие исследования по генотипированию ВГВ у пациентов с гепатитом дельта в регионах, где одновременно циркулируют разные генотипы ВГВ (например, Республика Саха (Якутия)), позволят дать более точный ответ на этот вопрос, а также оценить влияние генотипа ВГВ на клиническое течение и исходы инфекции гепатита дельта.
Заключение
Совпадение результатов определения генотипа ВГВ в образцах сыворотки крови пациентов с ХГВ с помощью разработанной нами панели МАТ и молекулярно-биологическими методами составило 99% (81/82). С помощью разработанного метода определены генотипы ВГВ у пациентов с хроническим гепатитом дельта, у большинства из которых ДНК ВГВ не детектировалась. У пациентов с гепатитом дельта из Республики Тыва выявлены генотипы A и D ВГВ с абсолютным преобладанием генотипа D. Таким образом, разработанный метод генотипирования ВГВ апробирован и валидирован с помощью молекулярно-биологических методов на образцах сыворотки крови пациентов с ХГВ и может успешно применяться для исследования образцов сыворотки крови пациентов с сочетанной инфекцией ВГВ и ВГD, а также образцов от пациентов с моноинфекцией ВГВ при низкой концентрации вирусной ДНК.
Финансирование работы.
Работа выполнена в основном за счет АО «Вектор-Бест», а также частично в рамках гранта FSUS-2020-0035 базового финансирования НИР в Новосибирском государственном университете и Программы повышения конкурентоспособности российских университетов ТОП-100.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.