Высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектрометрическим детектированием признана «золотым стандартом» для проведения терапевтического лекарственного мониторинга. Одним из препаратов, требующих проведения мониторинга концентраций на высоком уровне, является ингибитор пролиферативного сигнала — эверолимус, назначаемый пациентам после трансплантации сердца [1, 2]. Традиционно в клинико-лабораторной диагностике используется иммунохимический метод, который в силу своих аналитических особенностей имеет ряд ограничений.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Оптимизировать аналитическую методику количественного определения эверолимуса в цельной крови пациентов после трансплантации сердца методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-селективным детектированием, удовлетворяющую требованиям, предъявляемым к методикам для проведения терапевтического лекарственного мониторинга.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Для создания методики количественного определения эверолимуса в цельной крови пациентов после трансплантации сердца методом ВЭЖХ-МС/МС использовали высокоэффективный жидкостный хроматограф «LC 1260 Infinity» (Agilent, США) с масс-спектрометрическим детектором «TripleQuard 6460» с системой ионизации «Agilent Jet Stream-электроспрей» (AJS ESI) с обращено-фазовой хроматогафической колонкой Poroshell 120 EC-C18 50´3,0 мм, 2,7 мкм (Agilent Technologies, США). В качестве подвижной фазы выступали буферные растворы на основе деионизованной воды и метанола. Для подбора оптимальных аналитических условий использовали стандартную фармакологическую субстанцию эверолимуса, в качестве внутреннего стандарта выступало дейтерированное производное эверолимуса. Тестирование аналитической методики на пригодность к использованию в клинической практике проводилось согласно международным требованиям к валидации биоаналитических методик [3, 4]. В качестве базисной методики была взята методика, разработанная в ФГБУ «ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова» МЧС России на аналогичном оборудовании [5].
РЕЗУЛЬТАТЫ
Экспериментальным путем разработана методика предварительной подготовки цельной крови к исследованию методом ВЭЖХ-МС/МС. Оптимизированы условия разделения биологической смеси на хроматографической колонке. Разработаны условия детекции эверолимуса и внутреннего стандарта, используя трехквадрупольный масс-анализатор с системой ионизации «Agilent Jet Stream — электроспрей». Методика протестирована согласно международным требованиям к валидации биоаналитических методик, а также прошла апробацию на реальных пробах пациентов после трансплантации сердца, принимающих эверолимус с параллельным измерением концентраций препарата в референсной лаборатории.
ВЫВОДЫ
Внедренная методика количественного определения эверолимуса в цельной крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС отвечает международным требованиям к валидации биоаналитических методик, демонстрируя высокую чувствительность, специфичность, воспроизводимость и точность. Показатели внедренной методики не уступают таковым для аналогичной методики, внедренной на другой клинической базе. Разработанные условия пробоподготовки позволяют значительно уменьшить сроки исследования, что важно для клиницистов.
