ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Изучение в возрастном аспекте регенеративного потенциала обогащенной тромбоцитами плазмы (PRP) in vitro в культуре клеток дермальных фибробластов с оценкой пролиферативной, миграционной и метаболической активности клеток после их стимуляции PRP доноров разного возраста.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Для приготовления PRP использовали один из классических протоколов одноэтапного центрифугирования цельной крови условно здоровых доноров, разделенных на возрастные группы: 1-я группа (n=10) — доноры в возрасте от 30 до 40 лет, 2-я группа (n=10) — доноры в возрасте от 60 до 70 лет. Исследование проводили с использованием клеточной лини hTERT-HDFa (d220). В опытные лунки вносили активированную PRP доноров в концентрации 10%. Пробы без внесения PRP — группа 0 (К); в качестве положительного контроля использовали аналогичную среду без PRP с добавлением 10% FBS — группа 0 (К 10% FBS). Проводили анализ метаболической активности клеток (МТТ-тест), оценивали миграционную активность фибробластов (scratch assay); определяли интенсивность продукции активных форм кислорода (АФК), выполняли морфологическую оценку клеток и определение механизмов гибели клеток (флуоресцентная микроскопия).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Внесение обогащенной тромбоцитами плазмы доноров 60—70 лет снижало метаболическую активность культуры hTERT-HDFa в 1-е сутки эксперимента на 85,5% (p<0,001) относительно данных 1-й группы. Интенсивность генерации АФК фибробластами после добавления плазмы доноров 30—40 лет в первые часы была максимальной и в динамике наблюдения проявила тенденцию к снижению. После добавления плазмы доноров 60—70 лет интенсивность генерации АФК не имела существенного прогресса в первые часы, но в динамике достоверно возрастала. По данным микроскопии, наибольший процент жизнеспособных клеток отмечался в группе 0 (К 10% FBS) и 1-й группе (доноры 30—40 лет). Наибольший процент некроза и апоптоза зарегистрирован во 2-й группе (доноры 60—70 лет).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
При оценке биологических эффектов PRP доноров разного возраста на культуру фибробластов кожи человека в первые 24 ч выявлено прооксидантное стимулирующее действие плазмы молодых доноров с повышением метаболической активности в отсутствие некроза клеток. Внесение PRP пожилых доноров в 1-е сутки сопровождалось снижением метаболической активности культуры, увеличением процента некроза и апоптоза клеток. Различий по миграционной активности клеток в зависимости от возраста донора плазмы не выявлено.
