Адгезивные молекулы в цереброспинальной жидкости при рассеянном склерозе

Известно, что рассеянный склероз (РС) - хроническое прогрессирующее аутоиммунное заболевание, характеризующееся многоочаговой воспалительной демиелинизацией и очагами дегенерации в ткани головного мозга [1, 6]. Прогнозирование обострений и прогрессирования этого заболевания определяет тактику фармакотерапии и эффективность лечения. Лабораторные тесты, ассоциированные с аутоиммунными процессами в ЦНС (олигоклональная гипергаммаглобулинархия и др.), информативны на этапе диагностики РС, однако имеют недостаточную значимость как предикторы течения и прогрессирования этого заболевания [10]. В связи с этим в настоящее время ведется интенсивный поиск биохимических и иммунологических показателей, их сочетаний, которые могли бы стать не только критериями эффективности лечения РС, но и прогностическими биомаркерами его течения [7, 16].

Ранее нами сообщалось [2] об увеличении в цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) больных РС содержания адгезивных молекул - тромбоцитарно-эндотелиальной молекулы адгезии 1-го типа (sPECAM-1, CD 31) и молекулы адгезии сосудистого эндотелия 1 типа (sVCAM-1) при обострении заболевания. Мы предполагаем, что это может быть связано с более выраженным повреждением гематоэнцефалического барьера в этот период развития заболевания. Эти результаты согласуются с данными других исследований [8, 12], в которых были обнаружены отсутствующие в норме растворимые формы мембранных компонентов активированного и/или поврежденного эндотелия в ЦСЖ больных РС, что подтверждает сложившееся в литературе мнение [14, 21] о роли эндотелиальных адгезивных молекул в патогенезе РС.

Цель настоящего исследования состояла в оценке сопряженности уровня молекул адгезии sPECAM-1 и sVCAM-1 в ЦСЖ больных РС с данными магнитно-резонансной томографии (МРТ) головного мозга и особенностями течения заболевания с учетом степени инвалидизации.

Исследование было проспективным. Оно проводилось в течение 3 лет. Обследовали 24 больных РС с ремиттирующим типом течения в периоде ремиссии. В их числе было 8 мужчин и 16 женщин, средний возраст которых был 34,4±4,2 года, продолжительность болезни от 1 года до 6 лет (средняя 2,8 года).

Неврологический статус больных и данные МРТ головного мозга оценивали при включении пациентов в исследование - в период ремиссии и через 3 года наблюдения, также в период ремиссии. Концентрацию адгезивных молекул в ЦСЖ определяли только при включении больных в исследование и полученные результаты сопоставляли с дальнейшим течением болезни, при этом пациенты не получали лечения препаратами, изменяющими течение РС.

Достоверность диагноза РС оценивали по критериям MacDonald 2005 г. [15]. Для оценки тяжести клинического состояния и степени инвалидизации использовали расширенную шкалу инвалидизации - EDSS (Expanded Disability Status Scale) [13]. Скорость прогрессирования РС рассчитывали по отношению количества баллов EDSS на момент обследования к длительности болезни в годах [3].

МРТ головного мозга проводили на высокопольном магнитном томографе Magnetom Impact/Expert («Siemens», Германия) с мощностью магнитного поля 1,0 Тл с использованием стандартных Т1- и Т2-изображений, а также с применением режима TIRM. Для внутривенного контрастирования использовали препарат гадовист фирмы «Bayer Shering Pharma» (Германия) в дозе от 0,1 до 0,3 ммоль/кг массы тела.

В супернатанте ЦСЖ, забранной при люмбальной пункции, методом твердофазного иммуноферментного анализа измеряли концентрацию sPECAM-1 и sVCAM-1 с использованием тест-систем и по протоколам фирмы «Bender MedSystems» (США). Оценку цитоза и дифференциальный подсчет лейкоцитов проводили при стандартном клиническом анализе ЦСЖ [4].

Проведение настоящего исследования было разрешено этическими комитетами краевой клинической больницы и Алтайского государственного медицинского университета.

Статистический анализ количественных данных был выполнен с использованием программы Statistica 6.0. Парные сравнения выборочных средних проводили по критерию Уилкоксона, корреляции оценивали по критерию Спирмена. Для проверки гипотез о предикторной значимости переменных использовали лог-регрессионный анализ с оценкой отношения шансов (odds ratio, ОШ) по критерию χ². Результаты представлены в виде выборочного среднего (М) с указанием среднеквадратичного отклонения (SD) или 99% доверительного интервала (ДИ). Для всех использованных статистических критериев принят критический уровень значимости р<0,05.

При включении в исследование, когда больные РС находились в периоде ремиссии, концентрация в ЦСЖ sPECAM-1 была 2,1±0,4 нг/мл, sVCAM - 19,9±4,8 нг/мл. Результаты клинического анализа ЦСЖ были характерными для РС в стадии ремиссии [4]: плеоцитоз не выявлялся (1,4±0,1 млн клеток/л), доля лимфоцитов составляла от 67 до 100%, концентрация белка - 322±104 мг/л.

В период проведения работы обострение РС наблюдалось у 12 (50,0%) больных, после ремиссии, продолжавшейся от 5 до 15 мес (в среднем 8,9 мес). У 1 (4,2%) пациента произошел переход ремиттирующего течения РС во вторично-прогредиентное течение, чему соответствовало нарастание неврологического дефицита по EDSS. Данные по всем пациентам приведены в табл. 1.

По данным МРТ головного мозга зарегистрировано значимое увеличение накапливающих гадолиний (Gd+) очагов на Т1-взвешенных изображениях (см. табл. 1) и очагов поражения на Т2-взвешенных изображениях, что, по мнению специалистов в области нейровизуализации [11, 17], указывает на острое воспаление, повреждение гематоэнцефалического барьера и может отражать скорость прогрессирования заболевания. При этом на томограмме на фоне множественных очагов среднего размера визуализировались крупные очаги (2,5 см и более в диаметре) с выраженным перифокальным отеком вещества мозга. Выявлено также увеличение количества гипоинтенсивных очагов («черных дыр») на Т1-взвешенных изображениях (в среднем в год на 12,5±0,1%), что, как считают, отражает потерю аксонов, межклеточного матрикса, глиоз и демиелинизацию [5, 18-20].

Концентрация адгезивных молекул в ЦСЖ не коррелировала с изменениями данных МРТ (табл. 2), так же как и с числом обострений РС (для sPECAM-1 r_s=0,006, p=0,978; для sVCAM r_s=–0,050, p=0,821).

Не вполне ясны установленные нами и другими исследователями [9] различия в связи между содержанием исследованных растворимых форм адгезивных молекул и клиническими и МРТ-признаками прогрессирования РС. Эти различия могут отражать разные типы экспрессии отдельных представителей семейства адгезивных молекул и/или различия в кинетике высвобождения их растворимых форм в ЦСЖ в процессе развития свойственных РС нейроиммунологических процессов.

Относительный риск высокой скорости прогрессирования РС (более 0,75 баллов по шкале EDSS в год) при sPECAM выше медианы составил 7,1 (ДИ 1,2-25,6; р=0,031). Это согласуется с данными о прогностическом значении уровня этого гликопротеида, полученными нами ранее в ретроспективном исследовании [2].

Полученные в данном исследовании данные позволяют предположить, что содержание sPECAM-1 (CD 31) в ЦСЖ больных с ремиттирующим типом течения РС может рассматриваться как прогностический биомаркер быстрого прогрессирования заболевания.