Ассоциация полиморфизма гена FAS/APO-1 (rs2234767) с риском развития и быстрого прогрессирования рассеянного склероза

Известно, что звеном патогенеза ряда аутоиммунных заболеваний — болезни Хашимото, ревматоидного артрита, сахарного диабета 1-го типа и др. является недостаточность апоптоза лимфоцитов [1—4]. При рассеянном склерозе (РС), в основе развития которого лежат иммунонейродегенеративные нарушения, первым звеном патогенеза является избыточное образование и накопление в периферической крови Т-лимфоцитов, реактивных в отношении миелина и некоторых других белков центральной нервной системы (ЦНС) [5]. Можно полагать, что одной из причин накопления этих клеток, так же как и при других аутоиммунных заболеваниях, является нарушение их элиминации путем апоптоза [6]. В результате такого иммунологического дефекта при РС в дальнейшем может происходить повреждение гематоэнцефалического барьера, массивное проникновение аутореактивных лимфоцитов в ЦНС с развитием каскада воспалительных и нейродегенеративных процессов [5, 7].

Основной механизм инициации апоптоза аутореактивных лимфоцитов реализуется через связывание Fas-лиганда (FasL, CD95L) — трансмембранного белка из семейства фактора некроза опухоли, с мембранными рецепторами FAS/APO-1 (FasR, CD95), которые образно называют «рецепторами смерти» [3, 8]. Экспрессия Fas-лиганда и FAS/APO-1 лимфоцитами регулируется рядом цитокинов — интерлейкином-2, интерлейкином-4 и др. [9].

Установлено, что у больных РС снижен опосредованной FasL/FasR-системой апоптоз T-лимфоцитов [6]. Механизмы этих нарушений мало изучены. Между тем результаты исследований позволяют предположить, что они могут включать повышенное накопление в крови растворимых форм рецепторов FAS/APO-1 (sFas/APO-1), блокирующих взаимодействие мембранных рецепторов Fas/APO-1 с Fas-лигандом [10—13], а также нарушение экспрессии FAS/APO-1 и/или Fas-лиганда на лимфоцитах [14—18]. Имеются данные, что уровень экспрессии FAS/APO-1 различен при ремиттирующем и вторично-прогрессирующем течении РС [17] и изменяется при обострении заболевания [19], терапии метилпреднизолоном [20] и интерфероном бета [14].

Цель настоящего исследования — оценка ассоциации однонуклеотидного полиморфизма 1377G>A в промоторном участке гена FAS/APO-1 (rs2234767) с риском развития и динамикой прогрессирования РС.

В исследование были включены 100 больных ремиттирующим PC, русских по этнической принадлежности, проживающих в Алтайском крае; 100 здоровых составили группу контроля. Группы были сопоставимы по возрасту, половому составу, месту рождения и проживания до 15 лет.

Диагноз РС ставился по критериям McDonald [21]. Для оценки тяжести клинического состояния и степени инвалидизации использовали расширенную шкалу инвалидизации (EDSS — Expanded Disability Status Scale) [22]. Скорость прогрессирования (СП) РС рассчитывали по отношению EDSS на момент обследования к длительности болезни и расценивали как медленную при увеличении EDSS ≤0,25 балла/год, среднюю — при увеличении EDSS в диапазоне 0,25—0,75 балла/год, высокую — при нарастании EDSS >0,75 балла/год [23]. Средний возраст больных РС составил 36,5±11,4 года, длительность заболевания — 7,2±1,4 года, инвалидизация по шкале EDSS — 3,4±1,7 балла.

Магнитно-резонансную томографию (МРТ) головного и спинного мозга проводили на высокопольном магнитном томографе Impact фирмы «Siemens-Magnetom» (Япония) с напряженностью магнитного поля 1 Т, с использованием стандартных Т1- и Т2-изображений, а также с применением режима TIRM. Для внутривенного контрастирования применяли одномолярный гадолинийсодержащий препарат гадовист фирмы «Байер Шеринг Фарма» (ФРГ).

Генотипирование проводили методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с использованием конкурирующих TaqMan-зондов, комплементарных полиморфным участкам ДНК.

Проведение исследования было разрешено этическими комитетами краевой клинической больницы и Алтайского государственного медицинского университета. Все участники исследования дали письменное информированное согласие на участие в исследовании.

Соответствие распределения генотипов равновесию Харди—Вайнберга оценивали с помощью программы DeFinetti на сайте Института генетики человека (Мюнхен, ФРГ). Относительный риск оценивали по величине отношения шансов (ОШ), рассчитанной методом логистического регрессионного анализа в программе Statistica (v. 6.0). Результаты анализа ассоциации отдельных аллелей с РС приведены для аддитивной модели наследования как наиболее соответствующей полученным данным по величине коэффициента Акаике. Для количественных переменных результаты представлены в виде выборочного среднего (М) с указанием стандартного отклонения (±SD), в ряде случаев — 95% доверительного интервала (ДИ). Для всех использованных статистических критериев принят критический уровень значимости р<0,05.

По результатам генотипирования полиморфного локуса FAS/APO-1 (rs2234767) установлено, что распределение генотипов как в группе больных РС, так и в контрольной группе соответствовало распределению Харди—Вайнберга (p=0,84 и p=0,79 соответственно). Распределение частот генотипов и аллелей данного полиморфного локуса у больных РС и в контрольной группе представлено в табл. 1 и 2 соответственно.

Как показал логистический регрессионный анализ, с риском развития РС ассоциированы генотип G/А, а также аллель, А исследуемого локуса FAS/APO-1. Протективный эффект в отношении развития РС определяется наличием генотипа G/G и аллеля G (табл. 3).

При исследовании связи высокой СП РС с анализируемым полиморфизмом гена FAS установлено, что с высокой СП ассоциированы генотип G/А и аллель А. Тогда как протективное влияние в отношении высокой СП имеют генотип G/G и аллель G (табл. 4).

Следует отметить, что данные о связи полиморфизма FAS/APO-1 с риском развития и особенностями течения РС немногочисленны и противоречивы. Так, в популяции больных Р.С. Ирана при изучении однонуклеотидного полиморфизма –670 A>G FAS/APO-1 не найдено ассоциации с риском РС, хотя установлена положительная связь с более быстрым переходом к вторично-прогрессирующему течению заболевания [24]. Также не найдено связи предрасположенности к РС и особенностей его течения с полиморфизмом промотора –670 FAS/APO — при геномном исследовании случай—контроль в Японии [25]. Тогда как при анализе этой же однонуклеотидной последовательности в Нидерландах установлена протективная роль FAS/APO-1−670*G в отношении развития РС [26] и найдена слабая связь с РС при исследовании в Австрии [27]. В северной части Испании найдена положительная связь РС с полиморфизмом интронного участка гена FAS/APO-1, распознаваемого рестриктазой MaeI [28].

Очевидно, что противоречивость представленных результатов молекулярно-генетического анализа во многом объясняется различиями этнической принадлежности, места проживания обследованных групп, а также исследованными участками гена FAS/APO-1.

Полученные в настоящем исследовании результаты указывают на связь однонуклеотидного полиморфизма 1377G>A в промоторном участке гена FAS/APO-1 (rs2234767) с риском развития и динамикой прогрессирования Р.С. Предрасположенность к РС, так же как быстрая скорость прогрессирования заболевания у русских, проживающих в Алтайском крае, ассоциированы с FAS/APO-1*G/А. Для окончательных выводов необходимы дальнейшие исследования.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.