Заболевания полости рта, этиологически связанные с патогенными стрептококками, - одна из серьезных медицинских, социальных и экономических проблем здравоохранения. Стрептококки относятся к наиболее распространенным возбудителям бактериальных инфекций человека. Патогенные стрептококки, такие как Streptococcus pyogenes, S. agalactiae и S. pneumoniae, ассоциированы с тяжелыми формами острых и хронических инфекций. Стрептококки других видов, персистирующие у лиц с иммунодефицитами, нередко являются причиной нозокомиальных инфекций [3, 7].
Несмотря на высокую природную чувствительность стрептококков к антибиотикам некоторых классов, в ряде случаев антимикробная терапия ими может быть ограничена аллергическими проявлениями и развитием тяжелых форм дисбиозов. Кроме того, в последние десятилетия неуклонно растет распространенность антибиотикоустойчивых штаммов [4, 8-10]. Указанные проблемы диктуют необходимость не только рационального применения антибиотиков, но и сочетания их с безвредными средствами, оказывающими антибактериальное и противовоспалительное действие. Использование с лечебно-профилактической целью пробиотических молочнокислых бактерий - одно из перспективных направлений подобного решения проблемы оздоровления населения. Пробиотические препараты на основе живых лактобацилл относятся к числу наиболее употребляемых вследствие их высокой антагонистической активности в отношении патогенной микрофлоры.
Пробиотики чаще используют для лечения и профилактики заболеваний, связанных с разными формами нарушения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры желудочно-кишечного и урогенитального трактов [1, 2]. В связи с этим больше изучена антагонистическая активность молочнокислых бактерий в отношении микроорганизмов, ассоциированных с дисбиотическими состояниями. В то же время данные об антибактериальном действии пробиотических молочнокислых бактерий в отношении патогенных стрептококков и стафилококков встречаются редко и, как правило, представляют собой сообщения об активности метаболитов лактобактерий [5, 6].
Цель данной работы - изучить особенности антагонистического действия штаммов лактобацилл, выделенных из ротовой жидкости здоровых людей, в отношении патогенных стрептококков и стафилококков полости рта.
Материал и методы
Материалом для исследования послужило содержимое зубодесневых карманов, зубного налета, соскоба со слизистой оболочки щек, языка 36 студентов (девушек - 21, юношей - 15) в возрасте 18-22 лет. На момент обследования они были клинически здоровы, не имели в анамнезе инфекционных и соматических заболеваний желудочно-кишечного тракта и других систем органов.
Исследуемый материал засевали на среду МРС (лактоагар) для выделения лактобацилл, среду Колумбиа с кровью для выделения стрептококков и на желточно-солевой агар - для стафилококков. Культивировали при 37 °С 18-24 ч, идентифицировали по характерным морфологическим, тинкториальным, биохимическим свойствам с использованием идентификационных систем (bioMérieux Vitek, Inc.).
Антагонистическую активность определяли методом агаровых слоев; на нижнем слое бляшками в течение 24 ч при температуре 37 °С подращивали культуры бактерий, которые тестировали на антагонизм, а в верхнем слое полужидкого агара диффузно в течение 2-х суток культивировали испытуемые к ним культуры других бактерий. Антагонизм оценивали по диаметру (мм) зоны задержки роста: 10 мм и менее - низкая степень антагонизма, 10-20 мм - средняя, 21 мм и более - высокая.
Степень адгезии микроорганизмов определяли, пользуясь средним показателем адгезии (СПА) на эритроцитах человека 0 (I) группы Rh+. На предметное стекло наносили 1 каплю фосфатного буфера (pH 7,2-7,3), 1 петлю взвеси отмытых эритроцитов (в концентрации 100 млн/мл) и 1 петлю суточной суспензии культуры лактобацилл (№6 по Mc Farland), выращенных в МРС-бульоне. Затем предметное стекло помещали во влажную камеру на
30 мин при температуре 37 °C. Далее фиксированный препарат окрашивали по Граму. Производили подсчет под микроскопом среднего количества лактобацилл, адгезированных на 1 эритроците. В опыте учитывали 25 эритроцитов (5 клеток в 1 поле зрения).
Адгезивность считалась нулевой при СПА от 0 до 1,0, низкой - при СПА от 1,01 до 2,0, средней - при СПА от 2,01 до 4,0, высокой - при СПА >4,0. Вариации результатов при данном методе - ±15%.
Результаты и обсуждение
Из исследуемого материала выделены 26 штаммов лактобацилл, 28 штаммов стрептококков, 32 штамма стафилококков. По биохимическим тестам лактобациллы идентифицированы как Lactobacillus plantarum (8 штаммов), L. rhamnosus (9), L. fermentum (9). Среди стрептококков выделены Streptococcus pyogenes, S. oralis, S. salivarius, S. mitis, S. pneumoniae и Enterococcus faecium. Из выделенных стафилококков отобраны только 10 штаммов S. aureus - метициллинрезистентные (MRSA).
Результаты определения степени антагонистической активности лактобацилл приведены в таблице.
Из полученных данных следует, что зоны задержки роста превышают 21 мм, т.е. все выделенные из полости рта лактобациллы обладают высоким антагонизмом к энтерококкам, патогенным стафилококкам и особенно - к стрептококкам. Вместе с тем выделенные из полости рта стафилококки, стрептококки в 90,3% случаев не оказывали антагонистического влияния на лактобациллы. Лишь 9,7% выделенных стафилококков и стрептококков проявили среднюю и высокую антагонистическую активность в отношении лактобацилл. Зоны задержки роста составили соответственно 20 и 40 мм.
СПА лактобацилл полости рта колебался от 3,44 до 6,08, в среднем - 3,8±0,99, т.е. лактобациллы имели среднюю и высокую адгезивную активность.
Таким образом, согласно результатам исследования, лактобациллы, выделенные из полости рта здоровых молодых людей в возрасте 18-22 лет, обладают выраженным антагонизмом к патогенным стафилококкам и стрептококкам, которые могут вызывать воспалительные заболевания челюстно-лицевой области. Поэтому перспективно использование высокоантагонистически активных штаммов лактобацилл полости рта для создания новых препаратов пробиотиков, которые могут применяться для коррекции нарушенного микробиоценоза полости рта при гнойно-воспалительных заболеваниях. Использующиеся в настоящее время пробиотики на основе лактобацилл получены из кишечника, и им не свойственно длительное действие в полости рта. Лактобациллы, выделенные из полости рта, должны обладать преимуществом перед кишечными, так как приспособлены к персистенции именно в данном биотопе. Выделенные из полости рта лактобациллы обладают высокой степенью адгезии и могут входить в состав биопленок, осуществляя колонизационную резистентность.