Биопсия на стадии компактной морулы: 91 роды, 107 детей

Проведение молекулярно-генетического исследования эмбрионов с целью преимплантационного генетического скрининга (ПГС) или диагностики (ПГД) за последние годы стало рутинным. Несмотря на это, биопсия эмбриональных клеток на 4-е сутки развития (стадия компактной морулы) длительное время считалась невозможной из-за наличия адгезивных контактов между эмбриональными клетками на данной стадии развития [1].

Биопсия на стадии компактной морулы (4-е сутки развития invitro) впервые выполнена нами в 2010 г., о чем в 2012 г. было сообщено в докладе на конгрессе Европейского общества репродукции человека и эмбриологии (ESHRE) [2]. Позднее мы описали новый метод получения эмбриональных клеток для генетического исследования, а также представили полученные клинико-эмбриологические результаты его применения в ряде публикаций и докладов [3—5]. Являясь членом Европейского PGD Консорциума с 2015 г., Клиника МАМА представляет данные о проведенных циклах ЭКО с ПГС/ПГД с биопсией на 4-е сутки развития в соответствующий регистр.

За время использования метода мы накопили большой опыт проведения биопсии на стадии компактной морулы, получили обширные клинические данные. В настоящем исследовании мы проанализировали состояние детей, рожденных в результате лечения методом ЭКО-ИКСИ с биопсией на стадии компактной морулы в целях ПГС.

Методика выполнения биопсии на стадии компактной морулы, а также особенности проведения циклов ЭКО-ИКСИ-ПГС, были подробно описаны нами ранее [3, 4].

Группу исследования составили 107 детей, рожденных после проведения программы ЭКО-ИКСИ-ПГС в период с 2011 г. по 2015 г. Во всех случаях в исследуемой группе с целью проведения ПГС была выполнена биопсия на стадии компактной морулы. В группу сравнения включены 144 ребенка, рожденных после проведения программы ЭКО-ИКСИ в аналогичном временно́м периоде.

Группы сравнивали по следующим характеристикам: возраст роженицы, срок родов, масса тела и длина тела новорожденных, оценка по шкале Апгар в первые 5 мин жизни (в том числе доля детей со значением менее 7 баллов), наличие врожденной патологии.

Для каждого из параметров проводили расчет средней арифметической, моды, стандартных отклонений и квартилей. Для определения распределения каждого из показателей использовали критерии Шапиро—Уилка и Колмогорова—Смирнова (при n>100). Для сравнения показателей в группах использовали U-критерий Манна—Уитни и t-критерий Стьюдента для двух независимых величин, а также точный критерий Фишера для четырехпольной таблицы сопряженности. Уровень значимости в статистических тестах был принят 0,05.

Количественные данные о рожденных детях представлены в табл. 1.

В группе ИКСИ-ПГС всего рождены 110 детей от 91 родов (в том числе один случай родов дихориальной триамниотической тройни). Трое новорожденных погибли, из них двое по причине недоношенности, один — в связи с множественными врожденными пороками развития, не ассоциированными с исследуемыми анеуплоидиями (по результатам молекулярно-генетического исследования). Среди патологий, выявленных у новорожденных, два случая врожденного порока сердца и один — несиндромальной расщелины верхней губы и неба.

В группе ИКСИ рождены 146 детей от 120 родов. Двое новорожденных погибли по причинам недоношенности и множественных врожденных пороков развития соответственно. Среди врожденных патологий у детей два случая порока сердца, один случай копчиковой грыжи.

Результат сравнения групп по таким показателям, как возраст роженицы, срок родов, масса тела и длина тела новорожденных, оценка по шкале Апгар, представлены в табл. 2.

Группы достоверно не различались ни по одному из исследуемых признаков.

С 2010 г. более чем 1500 эмбрионам нами была выполнена биопсия на стадии компактной морулы. Метод показал себя безопасным для доимплантационного развития эмбрионов и эффективным для проведения исследования эмбрионального генома [3]. Кроме того, биопсия на стадии компактной морулы имеет ряд преимуществ перед биопсией на стадиях дробления и бластоцисты. Ранее нами было продемонстрировано, что при проведении биопсии данным способом возможно получение 3—7 клеток от эмбриона для анализа. Этот результат сопоставим с результатом биопсии трофэктодермы [6] и значительно превосходит возможности биопсии на стадии дробления [7, 8]. Эмбриональные клетки, полученные в результате биопсии у морул, могут быть пригодны как для проведения FISH-анализа, так и для исследования методами, основанными на амплификации ДНК.

К моменту проведения биопсии на стадии компактной морулы уже осуществлен этап естественной селекции эмбрионов, несущих грубые генетические аномалии, которые проявляются в ходе активации эмбрионального генома [9—11]. Как правило, это проявляется выраженными нарушениями доимплантационного развития, в то время как эмбрионы, не несущие грубых генетических нарушений, успешно проходят первый ключевой этап раннего эмбриогенеза — начало клеточной дифференцировки [10, 12]. Таким образом, мы осуществляем выбор эмбрионов для проведения генетической диагностики в тот момент, когда их потенциал к нормальному доимплантационному развитию уже в значительной степени определен.

Интервал между проведением биопсии и получением результата исследования достаточен, чтобы осуществить перенос эмбрионов на 5—6-е сутки развития в текущем цикле ЭКО. После биопсии практически все исследуемые эмбрионы достигают стадии бластоцисты, а частота наступления беременности сопоставима с эффективностью программы ЭКО без ПГД, что говорит об отсутствии негативного влияния биопсии на стадии компактной морулы на развитие эмбрионов человека invitrо [3, 4].

Поскольку процедура биопсии является инвазивной и выполняется на одной из ключевых стадий доимплантационного развития — в период начала первой клеточной дифференцировки, одного только исследования развития эмбрионов in vitro может быть недостаточно для заключения о безопасности метода. Ключевым параметром для оценки влияния любой манипуляции на развитие эмбрионов человека, наряду с частотой наступления беременности, является состояние здоровья рожденных детей.

Мы обследовали 107 новорожденных после биопсии на стадии компактной морулы и провели сравнение с группой контроля. Трое детей в исследуемой группе родились от дихориальной триамниотической многоплодной беременности, на сроке 36 нед, без патологий, масса тела 1780—2150 г, длина тела 44—46 см, но не были включены в группу сравнения.

Среди врожденных пороков развития (ВПР) в обеих группах отмечено по два случая порока сердца, что соответствует общепопуляционной частоте встречаемости [13]. Кроме того, в исследуемой группе выявлен один случай несиндромальной расщелины верхней губы и неба, а в контрольной группе — один случай копчиковой грыжи. Полученных данных о частоте ВПР в обеих группах недостаточно для проведения статистического исследования; указанные пороки развития могут иметь случайную природу и не являться следствием каких-либо манипуляций, связанных с ВРТ [14].

Сравниваемые группы сопоставимы по возрасту рожениц и сроку родов. Новорожденные дети не различаются по таким показателям, как масса тела, длина тела, оценка по шкале Апгар на 5-й минуте жизни. Таким образом, проводимая на стадии компактной морулы биопсия эмбриональных клеток не имеет отсроченного негативного влияния на состояние новорожденных детей.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.