Многочисленные научные публикации по проблемам ЭКО/ИКСИ свидетельствуют о том, что этот метод лечения бесплодия находит все большее применение в клинической практике. Однако низкая эффективность, осложнения и высокая стоимость резко ограничивают область применения и в ряде случаев приводят к ятрогенной патологии. Различные подходы к оптимизации уже существующих технологических приемов в рамках ЭКО/ИКСИ несомненно влияют на конечные эффекты и, к сожалению, принципиально не изменяют ситуацию.

Системные исследования позволяют предполагать получение новых научных продуктов и ожидать позитивных изменений. В настоящее время известно, что на морфологическом уровне имеются параллели между процессами миграции лимфоцитов из кровеносного русла в лимфатические узлы и нидацией эмбриона в эндометрий. Так, взаимодействие лимфоцитов с эндотелием происходит посредством карбонгидратсвязывающих протеинов, т.е. селектинов, которые опознают специфические олигосахаридные структуры. Например, L-селектин расположен на лимфоцитах, а его лиганд — на эндотелиальных клетках сосудов, что позволяет осуществлять его захват из кровотока и связывание. Процесс проходит под высоким давлением, и лимфоциты, вращаясь, стимулируют выработку цитокинов, которые далее активируют интегрины, обеспечивая прочную адгезию и трансмиграцию через клеточную стенку [17]. Представленная параллель основана на наблюдении за тем, что имплантация является воспалительно-подобным процессом и ее составляющие механизмы не установлены [11]. Известно, что клетки трофобласта имеют характеристики кроветворных клеток, дающих начало клеткам крови и сосудов, поэтому многие причины бесплодия и ранней потери беременности могут быть связаны с дефектом системы селектинов и, как следствие, с недостаточной инвазией трофобласта [6].

К настоящему времени в литературе дана характеристика групп молекул адгезии — селектинов. К ним относятся L-селектин (CD62L), P-селектин (CD62P), E-селектин (CD62E). Все они являются гликопротеидами и состоят, по меньшей мере, на 30% из карбогидратов. Так, L-селектин экспрессируется лимфоцитами и участвует в процессах миграции, E-селектин экспрессируется на поверхности эндометрия при воспалении, Р-селектин — на активированных тромбоцитах [3]. В 2009—2010 гг. нами опубликован анализ данных литературы о состоянии молекулярного эмбрионального окна и функциональной активности эндометрия в зависимости от результатов ЭКО и ПЭ [3, 4]. Систематизация данных научных исследований позволила показать, что в системе адгезионных молекул именно L-селектин, локализованный на поверхности бластоцисты, и его олигосахаридный лиганд, тесно связанный с поверхностным эпителием эндометрия, являются одними из ведущих звеньев эмбрионально-эндометриального взаимодействия, обеспечивая удерживание и нидацию эмбриона в эндометрий.

Выбор этой группы веществ для детального анализа связан с тем, что в 2003 г. в журнале «Science» были опубликованы данные о проведении иммунохимического окрашивания бластоцисты с помощью антител к L-селектину, меченных флюоресцентным изотиоцианатом, без нарушенной проницаемости ее мембраны. Показано, что перед эмбриохэтчингом zona pellucida L-селектин экспрессировался слабо или отсутствовал. После эмбриохэтчинга наблюдалось сильное окрашивание трофоэктодермы или других поверхностей эмбриона [11]. Эти данные позволили нам предположить, что не только L-селектин, но и другие селектины могут продуцироваться эмбрионами на этапах культивирования в программе ЭКО и ПЭ, приобретая свойства растворимых молекул. В доступной литературе не удалось найти описание результатов подобных исследований.

Кроме этого, система селектинов связана с их участием в неоангиогенезе, а возможно и в васкулогенезе и ангиогенезе, так как клетки активного трофобласта имеют свойства гемангиобластов, способных трансформироваться в ангиобласты с последующим первичным ростом сосудов [3, 4]. Открытие и описание нами параплацентарного ангиогенеза и его изменений при ряде патологических состояний в акушерстве [1, 2] позволяют высказать предположение о его связи с системой селектинов и неоангиогенеза на ранних этапах эмбрионального развития, а именно: до момента активации плацентарного ангиогенеза.

Морфологическая характеристика эмбриона остается одним из основных методов оценки качества его клеток в практике ЭКО/ИКСИ ввиду своей быстроты и низкой стоимости. Многие исследования подчеркивают взаимосвязь морфологии эмбриона и наступления беременности. Однако применяемые системы оценки разных лабораторий трудно сопоставимы, что представляет большие сложности для сравнения. Данный метод имеет ограниченное прогностическое значение, так как не отражает функциональный статус эмбриона. Известно, что эмбрион без морфологически идентифицированных изменений может содержать генетические дефекты, а эмбрион с субоптимальной морфологической оценкой способен к развитию в полости матки и наступлению клинической беременности. Эти результаты послужили стимулом к пересмотру существующих систем оценки и дополнению их данными исследований в области изучения продуктов метаболизма и экспрессии эмбриона.

Цель исследования — определить содержание растворимых селектинов в среде культивирования бластомеров в программе ЭКО/ИКСИ для повышения эффективности лечения бесплодия.

Под наблюдением находились 30 женщин репродуктивного возраста (от 20 до 37 лет, средний возраст 31,6±3,8 года) с бесплодием, из которых после проведения ЭКО/ИКСИ у 15 наступила беременность и у 15 беременность не наступила.

Критерии включения: нормальный менструальный цикл (28—32 дня), нормальное содержание в сыворотке крови ЛГ, ФСГ, пролактина, эстрадиола (Е2), прогестерона, тестостерона, наличие хотя бы одного эмбриона для переноса. Всем женщинам были полностью разъяснены все аспекты лечения и необходимого обследования и получено информированное согласие на участие в исследовании.

Критерии исключения: наличие синдрома поликистозных яичников, патологии эндометрия, гидросальпинксов по данным УЗИ и гистеросальпингографии, астенотератозооспермия III и IV степени у мужа. Пациентки с неудовлетворительной морфологической оценкой эмбрионов также были исключены из дальнейшего наблюдения.

Стимуляция овуляции. Всем женщинам проводилась стимуляция по длинному протоколу с использованием аналога гонадолиберина (Тriptorelin, фирма «Ипсен Фарма Биотек», Франция) с 19—22-го дня менструального цикла по 0,1 мг до дня введения овуляторной дозы чХГ. В последующем, со 2—3-го дня менструального цикла на фоне снижения дозы Тriptorelin до 0,05 мг проводилась стимуляция cуперовуляции с помощью препаратов рекомбинантного ФСГ (Гонал-Ф, «Лабораториез Сероно С.А.», Швейцария) в дозе 150—225 МЕ. Стимуляция суперовуляции проводилась до дня достижения лидирующим фолликулом диаметра 18—20 мм и толщины эндометрия 9—10 мм, после чего осуществляли инъекцию «овуляторной» дозы хорионического гонадотропина (ХГ), которая подбиралась индивидуально, в зависимости от количества, размера фолликулов. Во всех случаях через 35—36 ч после инъекции ХГ проводилась трансвагинальная пункция яичников (ТВПЯ) с целью аспирации преовуляторных ооцитов. Поддержка второй фазы осуществлялась вагинальным введением препаратов прогестерона (утрожестан в дозе 600 мг) со дня ТВПЯ. В случае наступления беременности прогестерон продолжал назначаться до 12 нед гестации.

Оценка качества ооцитов, оплодотворение и культивирование эмбрионов Полученные ооциты помещали в среду для отмывки, содержащую HEPES-буфер, а затем отмывали в культуральной среде. Сразу после размещения ооцитов в среде для культивирования оценивали количество, качество и степень зрелости полученных комплексов oocyte—cumulus [5]. Оплодотворение ооцитов осуществлялось методами ЭКО или ИКСИ в стандартных условиях. Оценка оплодотворения проводилась по наличию мужского и женского пронуклеуса в ооците. Если присутствовали оба пронуклеуса, оплодотворение считалось нормальным. Если их не удавалось обнаружить, оплодотворение не состоялось. Если был виден один пронуклеус или больше двух, расценивалось как аномальное оплодотворение.

Культивирование эмбрионов и оценка их качества, как и все манипуляции с половыми клетками и эмбрионами человека, проводились на средах фирмы COOK (Австралия). Оплодотворение проходило в среде Fertilization medium (Sydney IVF), COOK, R-SIFM-20. На стадии пронуклеусов зиготы помещали в среду Cleavage medium (Sydney IVF) K-SIFM-20. Качество эмбрионов оценивали перед каждым переносом. Перенос осуществлялся на 3-й день культивирования после ТВПЯ. При выборе дня переноса учитывалось общее состояние больной (симптомы гиперстимуляции яичников) и эмбриологические характеристики (количество эмбрионов на 3-и сутки культивирования). Эмбрионами хорошего качества считались эмбрионы, достигшие на 2-е сутки развития стадии 4 бластомеров и более (48 ч после ТВПЯ), на 3-и сутки — 6 бластомеров и более. Дробящиеся эмбрионы хорошего качества имели не более 10% фрагментации. Эмбрионы переносили в полость матки под контролем трансабдоминального ультразвука (Logic 200) c помощью двух типов катетеров Wallace («Smiths Medical International Ltd.», Объединенное королевство) и Cook-K-Jet («Сook Ireland Ltd.», Ирландия).

Диагностика и наблюдение беременности. Биохимический тест на беременность (β-чХГ) проводили на 14—16-й день, а ультразвуковую диагностику беременности осуществляли на 21-й день после переноса эмбрионов. Ультразвуковое определение сердцебиения плода осуществлялось при сроке беременности 4—5 нед. Больные были обследованы в течение двух циклов, в спонтанном цикле и стимулированном. Рост фолликулов оценивался с помощью ультразвукового мониторинга. При проведении десенситизации и стимуляции суперовуляции определяли исходную концентрацию ФСГ, ЛГ, прогестерона, Е2 в плазме крови, далее проводилось динамическое определение гормонов на –2, +1, +2, +3, +5-й дни стимулированного цикла, что соответствовало стандартному протоколу.

Иммуноферментный анализ (ИФА). Анализ содержания L-селектина (L-selectin, L-Sel, нг/мл), P-селектина (P-selectin, P-Sel, пг/мл), E-селектина (E-selectin, E-Sel, пг/мл) в культуральной среде Cleavage medium (Sydney IVF) K-SIFM-20 на 3-й день после ТВПЯ проводили В.А. Бурлев и Н.А. Ильясова с помощью ИФА с применением стандартных наборов (R&D systems, США). Хранение образцов, постановка реакций и учет результатов осуществляли в стандартных условиях и согласно рекомендациям производителя. После получения аликвоты исследуемого образца к ней добавлялся витализирующий реагент, разработанный совместно с Department of Women’s and Children’s Health, Uppsala University, Uppsala, Швеция, и только после этого проводился ИФА по стандартному протоколу. Содержание селектинов в культуральной среде определяли исходя из индивидуального (суммарного) числа бластомеров одного эмбриона и на один бластомер.

Статистический анализ. Анализ результатов выполняли с помощью статистической компьютерной программы PASW Statistics 18. Достоверность различий полученных результатов оценивали с использованием непараметрического анализа Манна—Уитни, χ²-критерия, ANOVA. Результаты исследования представлены как среднее значение ± стандартное отклонение (М±SD). Различия между группами считались достоверными при р<0,05.

Основания для проведения исследования. Работа выполнена на основе инициативного, добровольного и двустороннего международного научного сотрудничества между prof. V. Bourlev (В. Бурлев) (Russian Federation) и prof. M. Olovsson (Маттс Оловссон) (Швеция). Финансовая, научная, правовая и политическая помощь осуществлялась Шведской Королевской академией наук, Шведским медицинским исследовательским советом (проект №8683), Университетом Упсалы, Швеция, Российской академией медицинских наук, ФГУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова» Минздравсоцразвития России и Министерством здравоохранения и социального развития России. Выражаем благодарность prof. Matts Olovsson и сотрудникам Department of Women’s and Children’s Health, Uppsala University, Uppsala, Швеция, за участие в обсуждениях и поддержку.

Описание групп обследованных больных. Все обследуемые пациенки (n=30) были разделены на две группы в зависимости от наступления беременности по данным УЗИ: с наступившей беременностью (1-я группа, n=15) и с ненаступившей беременностью (2-я группа, n=15).

При анализе анамнестических данных показано, что средний возраст пациенток достоверно не различался и составил в 1-й группе 31,1±4,6, во 2-й 32,8±3,6, длительность бесплодия соответственно 6,6±5,0 и 8,6±4,6 года. С диагнозом бесплодия трубного происхождения в 1-й группе было 71,4% пациенток, во 2-й — 81,8%. Сочетание мужского и трубного факторов бесплодия имело место у 28,6 и 18,2% пациенток соответственно 1-й и 2-й групп. Отсутствовали беременности в анамнезе соответственно у 64,3 и 54,5% пациенток. Больных с пролиферативными заболеваниями (полип эндометрия, гиперплазия эндометрия, эндометриоз, аденомиоз, миома) было 35,7 и 54,5% соответственно, с воспалительными гинекологическими заболеваниями — 50 и 72,7% соответственно.

Оплодотворение методом ИКСИ проведено в 1-й группе у 78,6% пациенток, показанием у 57,1% из них была патозооспермия, во 2-й группе — у 18,2% пациенток, во всех случаях по поводу патозооспермии.

Количество ооцитов, полученных в ходе трансвагинальной пункции, количество пронуклеусов, количество эмбрионов 3-х суток в 1-й группе составило 3,2±2,3, 2,6±1,8, 2,2±1,9 соответственно, во 2-й — соответственно 4,2±3,2, 3,6±2,8, 3,1±2,3.

Число переносимых в полость матки эмбрионов в 1-й и 2-й группах варьировало от 1 до 2 при толщине эндометрия 10,4±1,2 и 9,6±1,3 мм соответственно.

Анализ клинических данных показал отсутствие достоверных различий между группами по возрасту пациенток, особенностям репродуктивного анамнеза, фактору и длительности бесплодия, наличию в анамнезе беременностей, пролиферативных и воспалительных гинекологических заболеваний. Обращает на себя внимание увеличение числа проведенных ИКСИ в 1-й группе по отношению ко 2-й.

Описание содержания растворимых селектинов бластомеров в культуральной среде при проведении ЭКО/ ИКСИ

I этап. Результаты исследования содержания селектинов в культуральной среде бластомеров на 3-й день проведения ЭКО/ИКСИ в зависимости от наступления или ненаступления беременности представлены в табл. 1.

II этап. Результаты исследования содержания селектинов в культуральной среде бластомеров на 3-й день проведения ЭКО в зависимости от наступления или ненаступления беременности представлены в табл. 2.

III этап. Результаты исследования содержания селектинов в культуральной среде бластомеров на 3-й день проведения ИКСИ в зависимости от наступления или ненаступления беременности представлены в табл. 3.

Полученные результаты показали принципиальную возможность использования культуральной среды эмбрионов 3-го дня для определения в ней растворимых L-, P- и E-селектинов методом твердофазного ИФА. Максимальная концентрация среди изученных селектинов установлена для L-селектина и минимальные — для Р- и Е-селектинов. Распределение данных по способу индукции оплодотворения (ЭКО или ИКСИ) показало, что для всех групп сохраняются достоверные различия между показателями L-селектина. При этом содержание L-селектина всегда выше у эмбрионов в группе с ненаступившей беременностью.

Взаимодействие трофобласта с эндометрием — первый и необходимый этап нидации и впоследствии — плацентации. На уровне материнско-эмбриональных взаимодействий показана активация систем селектинов и участие их в процессах адгезии, также как и захват лейкоцитов из кровотока. Установлено, что во время окна «имплантации» со стороны матери экспрессируется олигосахаридный лиганд к L-селектину поверхностными эпителиальными клетками, а на эмбриональной стороне трофобластом L-селектин [11]. Это система рецептора и лиганда высокофункциональна, потому что бластомеры покрыты L-селектином, который имеет высокий коэффициент связывания с лигандом, экспрессируемым поверхностным эпителием эндометрия. Установлено, что L-селектин трофобласта участвует во взаимодействии с эндометрием и может играть существенную роль в наступлении и развитии беременности. Кроме этого, показано участие трофоэктодермы эмбрионов человека в синтезе L-селектина. Следовательно, авторами было проведено не только окрашивание бластоцисты без нарушения проницаемости мембран с помощью меченных флюоресцентным изотиоцианатом антител к L-селектину, но и показано, что перед эмбриохэтчингом zona pellucida L-селектин экспрессируется слабо или отсутствует. После хэтчинга наблюдалось сильное окрашивание трофоэктодермы или других поверхностей эмбриона.

Инициирующая роль L-селектина в адгезии эмбриона к эндометрию доказана. L-селектин эспрессируется трофобластом, а олигосахаридный лиганд в эндометрии [3, 4]. Повышенная экспрессия селектин-лиганда в начале и середине секреторной фазы подтверждает его участие в имплантации [14]. Возможным субстратом взаимодействия с MUC1 являются селектины, которые связывают Sialyl-Lewis X и Sialyl-Lewis A антигены [12], или внутриклеточные молекулы адгезии (ICAM-1), участвующие в распознавании главного эпитопа на поверхности MUC1. Месторасположение этих молекул на трофобласте до сих пор неизвестно.

Показано, что L-селектин не только имеет значение для нидации и плацентации, но и обладает функциональной активностью для кровеносных сосудов. Медиаторная функция L-селектина в сосудах является важным компонентом этого процесса для получения требуемой оптимальной адгезии. Учитывая многие и различные причины бесплодия или ранней потери беременности, дефекты в адгезионной системе селектинов могут объяснять часть необъясненных репродуктивных потерь за счет несовершенной функциональной активности и экспансии цитотрофобласта, что может приводить к осложнениям беременности, например к преэклампсии [23]. Эти данные устанавливают новую и необычную природу трофобласта.

Также известно, что активный цитотрофобласт эктодермального происхождения подвергается различным процессам дифференцировки, включая преобразование его в клетки сосудов [9]. Эти исследования установили, что клетки цитотрофобласта могут проявлять функции, подобные лейкоцитарным с активацией адгезии, а также клетки трофобласта могут иметь особенности гемангиобластов прогенитарных стволовых клеток, которые дают начало как клеткам крови, так и клеткам сосудов. Необычный фенотип клеток цитотрофобласта связан с процессами как адгезии, так и нидации и имплантации [13]. Эти данные устанавливают возможность взаимодействия между трофобластом и несущим L-селектин и PEN5-положительными децидуальными клетками, способными обеспечить поддержку и заселение клеток в матке. Следовательно, наличие тесных связей на молекулярном уровне между ростом и дифференцировкой трофобласта и процессами децидуализации эндометрия является ключевым в реализации как репродуктивной функции, так и неоангиогенеза в матке и у эмбриона.

Разнообразие селектинов: L-селектин (CD62L), P-селектин (CD62P), E-селектин (CD62E) позволяет выделить наиболее характерные свойства для понимания влияния на процессы активации и развития бластомеров (экспрессия трофобласта), адгезии, нидации и взаимодействия с эндометрием:

— гликопротеидная природа веществ и синергизм взаимодействия;

— наличие общих и специфических лигандов;

— единая биодоступность и различная максимальная локализация;

— участие в проникновении клеток через стенки сосудов и их перемещение;

— создание эффекта «вращения» клеток для активации поверхностных структур;

— наличие мембраносвязанных и растворимых форм.

Все это разнообразие свойств и проявлений селектинов может быть детально описано на отдельных стадиях развития эмбриона для выявления молекулярной или функциональной недостаточности, которая влияет на наступление беременности. Так, возможно, что отсутствие синергизма между селектинами не позволяет им достигать максимального эффекта. Недостаточная экспрессия лигандов в эндометрии не реализует адгезию и необходимое развитие неоангиогенеза и децидуализации. Изменение биодоступности и областей максимальной локализации не позволяет бластомерам накапливать и активизировать селектины. Снижение эффекта «вращения» эмбриона и его проникновение в эндометрий на стадии нидации не позволяют осуществлять начальный обмен сигналами между эмбрионом и эндометрием для обеспечения жизнедеятельности, дифференцировки и развития. Снижение мембраносвязанных структур селектинов уменьшает адгезию эмбриона на поверхностные структуры эндометрия, а растворимые формы не отражают уровень их накопления. В то же время снижение мембраносвязанных селектинов и увеличение растворимых форм при активации способствуют проникновению и распространению клеток. Каждая из этих составных частей или стадий активации селектинов может быть отдельной причиной бесплодия или их совокупность может влиять на наступление беременности.

Исходя из данных литературы [3, 4], бластомеры не только экспрессируют L-селектин, как это было показано [11], но и, по нашим результатам, продуцируют в культуральную среду растворимые формы L-, E-, P-селектинов. Механизмы этого процесса не установлены, но, возможно, они не отличаются от известных данных и реализуются за счет протеолиза мембраносвязанных селектинов.

На ранних этапах дробления эмбрионы как in vitro, так и in vivo демонстрируют одинаковый принцип метаболической активности. Потребление кислорода эмбрионом резко возрастает к стадии бластоцисты [18]. Показано, что уровень метаболической активности связан с жизнеспособностью эмбриона.

Установлено, что аминокислотный профиль эмбриона может позволить повысить результативность программы ЭКО и ПЭ [8]. В каждом из указанных исследований эмбрионы высокого качества характеризовались низким обменом аминокислот.

В 2002 г. H. Leese [16] была представлена гипотеза «тихого эмбриона», которая заключается в том, что чем ниже метаболическая активность, тем выше жизнеспособность эмбриона [16]. Эта гипотеза получила развитие в дальнейших исследованиях, в которых показано, что эмбрионы с более высоким уровнем повреждения генома, протеома и транскриптома имеют большую потребность в питательных веществах и поэтому метаболически более активны [7].

Другие данные [19] свидетельствуют о том, что метаболическая активность может действовать как соответствующий маркер жизнеспособности эмбриона. Так, C. Vergouw и соавт. [22] показали связь между метаболическим профилем культуральной среды и жизнеспособностью эмбриона. E. Seli и соавт. [20] рассматривают как многообещающие метаболические или метаболомные тест-системы оценки жизнеспособности эмбриона.

К числу таких тестов следует отнести определение растворимых HLA-G в культуральной среде эмбриона. Эта интересная молекула связана с человеческим лейкоцитарным антигеном HLA-G, который играет главную роль в свободном подавлении плацентарного ангиогенеза. Определение HLA-G было предложено в 2002 г. как показатель предпосылки имплантации [10, 21]. Считается, что белки I класса HLA могут давать антиангиогенные эффекты. Фиксированные молекулы HLA-I на плаценте, вероятно HLA-G, обладая антиангиогенными свойствами в материнско-эмбриональных взаимодействиях, уравновешены проангиогенными факторами децидуальной ткани. Все это необходимо для нормального плацентарного развития. Такие проангиогенные факторы могут изменять клеточный контроль в эмбриональной части плаценты (хорионические ворсинки), также как и лимфогенез, отсутствующий в небеременной матке. По мнению P. Le Bouteiller и соавт. [15], определение баланса между локальными ангиогенными и антиангиогенными факторами, включая растворимые HLA-G и растворимый рецептор sVEGFR1, в материнско-эмбриональном взаимодействии в ранней фазе беременности будут иметь значение для понимания механизмов, приводящих к плацентарным дисфункциям, включая преэклампсию.

Учитывая, что бластомеры культивировались до 3 сут после ТВПЯ, синтез селектинов возможен только за счет материнских мРНК, так как собственный геном эмбриона может быть активирован только после 5-го дня. Снижение содержания селектинов в культуральной среде у эмбрионов в группе больных с бесплодием и наступившей беременностью свидетельствует о том, что растворимые селектины являются маркерами процессов внутриклеточного синтеза и накопления селектинов на поверхности эмбрионов. Именно эти «тихие эмбрионы» с низким уровнем выделения селектинов накапливают их на мембранах, используя материнские мРНК, и, следовательно, их уровень ниже, чем у эмбрионов без активации этого процесса. В то же время в культуральной среде бластомеров до 3-го дня инкубации после ТВПЯ в группе больных с бесплодием и ненаступившей беременностью содержание растворимых селектинов было больше, чем у эмбрионов в группе больных с наступившей беременностью. Можно предположить, что эти активные эмбрионы не накапливают на мембранах селектины, а продуцируют в культуральную среду, и их последующий перенос в полость матки не может быть сопряжен с нидацией и имплантацией.

Полученные результаты позволяют нам выдвинуть гипотезу о том, что «тихие эмбрионы» 3-го дня инкубации с низким содержанием селектинов в культуральной среде и накоплением их на поверхностных мембранах лучше участвуют в процессах взаимодействия с лигандом поверхностного эпителия эндометрия, что обеспечивает адгезию эмбриона. Погружение растущего и дифференцирующегося трофобласта в эндометрий сопровождается началом активных преобразований цитотрофобласта эктодермального происхождения в клетки крови и клетки сосудов. Если клетки крови эмбриона необходимы для автономного развития, то клетки сосудов могут трансформироваться на материнской и эмбриональной стороне, давая начало маточно-эмбриональным взаимодействиям. Естественно, что без соответствующего нулевого баланса и активного роста первичных сосудов и клеток крови невозможно дальнейшее развитие плодного яйца. Выбор между развитием и гибелью эмбриона связан в том числе и с активацией у него системы селектинов и сопряженного неоангиогенеза, определяя во многом его будущее.

Следовательно, низкие показатели содержания L-селектина в культуральной среде 3-го дня свидетельствуют о большей вероятности наступления беременности. Следует предположить, что эти «тихие эмбрионы» обладают более высокой биологической способностью к последующему развитию, а именно к нидации и имплантации. Учитывая одинаковую морфологическую характеристику изученных эмбрионов, следует отметить информативность определения растворимых селектинов в культуральной среде 3-го дня для оценки их качества.

Таким образом, первое исследование по определению содержания селектинов в культуральной среде бластомеров 3-го дня показало, что эти данные могут служить дополнительным диагностическим признаком сохранности (жизнеспособности) и функциональной активности эмбриона. Полученные результаты позволяют охарактеризовать среду культивирования эмбрионов не как инертную, а как источник дополнительной информации о состоянии эмбриона. Данное проспективное исследование является наукообразующим и требует дальнейших работ как по изучению роли эмбрионального неоангиогенеза и параплацентарного ангиогенеза в норме и при патологических акушерских состояниях, так и стандартизации выбранного метода, разработки референсных значений и установления диагностических ограничений определения селектинов в культуральной среде эмбрионов. Остаются невыясненными механизмы солюбилизации или секреции селектинов бластомерами. Взаимосвязь активаторов и ингибиторов процессов неоангиогенеза, васкулогенеза и ангиогенеза и начальных этапов формирования жизнеспособного эмбриона и его цинтиотрофобласта позволяет объяснить многие патологические акушерские состояния (неразвивающаяся беременность, привычная потеря беременности, плацентарная недостаточность, синдром задержки развития плода, преэклампсия). Дальнейшие исследования в этом направлении, несомненно, принесут и новые знания, на основании которых будет возможным повышать клиническую эффективность метода ЭКО/ИКСИ.