Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Серяпина Ю.В.

Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск

Севостьянова К.С.

Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск

Тулупов А.А.

ФГБУН Институт «Международный томографический центр» Сибирского отделения РАН, Новосибирск, Россия;
ФГАОУ ВО «Новосибирский национальный исследовательский государственный университет», Новосибирск, Россия

Морозов В.В.

Центр новых медицинских технологий Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, Россия

Шевела А.И.

Центр новых медицинских технологий Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, Россия

Генетические предикторы варикозной болезни малого таза: пилотное исследование

Авторы:

Серяпина Ю.В., Севостьянова К.С., Тулупов А.А., Морозов В.В., Шевела А.И.

Подробнее об авторах

Журнал: Флебология. 2018;12(1): 25‑29

Просмотров: 401

Загрузок: 12

Как цитировать:

Серяпина Ю.В., Севостьянова К.С., Тулупов А.А., Морозов В.В., Шевела А.И. Генетические предикторы варикозной болезни малого таза: пилотное исследование. Флебология. 2018;12(1):25‑29.
Seriapina IuV, Sevost'ianova KS, Tulupov AA, Morozov VV, Shevela AI. The Genetic Predictors of Varicose Veins of Small Pelvis: a Pilot Study. Flebologiya. 2018;12(1):25‑29. (In Russ.).
https://doi.org/10.17116/flebo201812125-29

?>

Варикозная болезнь малого таза (ВБМТ) — широко распространенное заболевание, патофизиологической основой которого является рефлюкс по гонадным венам и венам органных сплетений малого таза. В большинстве случаев рефлюкс наблюдается на фоне расширения вен и их клапанной недостаточности. Варикозная трансформация чаще всего наблюдается после беременности, однако заболевание диагностируется более чем у 25% женщин репродуктивного возраста, независимо от количества беременностей, родов и прочих факторов риска [1].

Немалое внимание уделяется роли наследственной дисплазии соединительной ткани в исследованиях этиологии варикозной трансформации вен, в частности малого таза. Выявлено, что наличие стигм дизонтогенеза, свидетельствующих о дисплазии соединительной ткани, и биохимические маркеры достоверно чаще встречаются у пациенток с варикозным расширением и рефлюксом вен малого таза, в группе сравнения стигмы выявлены в несколько раз реже [2]. Это дает основания рассматривать факторы, в том числе молекулярно-генетические, свидетельствующие о наличии наследственной дисплазии соединительной ткани, в качестве предикторов ВБМТ.

В настоящее время доказано наличие молекулярно-генетических факторов риска развития хронических заболеваний вен нижних конечностей, в том числе варикозной болезни [3]. Особо выделяются такие вероятные факторы, как полиморфизмы генов матриксных металлопротеиназ (ММР) — группы сериновых протеаз, обеспечивающих структурное равновесие внеклеточного матрикса. Именно дисфункция ММР легла в основу современной теории патогенеза варикозной болезни [4].

Генетические факторы являются важнейшим звеном в определении риска варикозной болезни, поскольку они конституциональные и не изменяются в течение всей жизни; это делает особенно актуальным изучение изменений в структуре генов [5, 6] для улучшения методик персонализированной диагностики и лечения.

Для проведения исследования в этом направлении были выбраны 3 гена-кандидата: ММР 3-го типа (MMP-3 -1171dupА (5А/6А)), ММР 12-го типа (ММР-12 A82G) и сосудисто-эндотелиальный фактор роста (VEGF G634C) [7, 8]. VEGF является фактором, способствующим ангиогенезу и пролиферации клеток стенки сосудов, изменения в его гене описаны с этой точки зрения при разных патологических процессах [9]. Таким образом, данные полиморфные локусы могут, предположительно, приводить к развитию диспластических процессов в системе нижней полой вены и, в частности, к ВБМТ.

Цель работы — выявление молекулярно-генетических предикторов высокого риска развития варикозной болезни малого таза.

Дизайн исследования. Проведено пилотное сравнительное ретроспективное исследование типа случай—контроль.

Группы исследования. 1-я группа включала пациенток репродуктивного возраста от 20 до 45 лет, c ВБМТ, верифицированной с помощью УЗИ органов малого таза и бесконтрастной магнитно-резонансной (МР) ангиографии. В эту группу вошли 20 пациенток, средний возраст 36,4 года. Критерии исключения: наличие в анамнезе тромбозов в системе нижней полой вены и/или посттромботической болезни нижних конечностей по данным ультразвукового (УЗ) дуплексного ангиосканирования; наличие острой гинекологической, гастроэнтерологической, урологической патологии; онкологические заболевания, в том числе органов малого таза; наличие в анамнезе перенесенных хирургических вмешательств на органах малого таза (не ранее 6 мес); беременность и послеродовый период (менее 6 мес) на момент включения в исследование; отказ от участия в исследовании. 2-ю (контрольную) группу — 150 женщин репродуктивного возраста от 20 до 45 лет, средний возраст 38,4 года. Критерии исключения: ВБМТ; варикозная болезнь нижних конечностей (ВБНК); наличие заболеваний и состояний, включенных в критерии исключения для основной группы. ВБМТ и ВБНК выявляли с помощью дуплексного УЗ-ангиосканирования.

Оценку наличия варикозного расширения вен малого таза, а также сопутствующей гинекологической патологии проводили на аппарате экспертного класса с использованием конвексного датчика с частотой 4—8 МГц и вагинального датчика. Исследование венозной системы нижних конечностей проводили по стандартной методике с использованием линейного датчика с частотой 7—12 МГц. УЗ-критериями ВБМТ считали эктазию венозных сплетений малого таза и/или гонадных вен более 5 мм в сочетании с ретроградным кровотоком, регистрируемым при проведении пробы Вальсальвы в режиме цветового допплеровского картирования.

Исследование брюшной полости и малого таза с захватом почечных сосудов проведено на МР-томографе с напряженностью магнитного поля 1,5 Т, применяли Т1- и Т2-взвешенные изображения и изображения с подавлением МР-сигнала от жировой ткани, бесконтрастную трехмерную МР-ангиограмму сосудов, методику количественной оценки потока Quantitative Flow (Q-Flow). Критериями ВБМТ считали наличие рефлюкса по одной или двум гонадным венам продолжительностью более 0,5 с.

Цельную венозную кровь забирали однократно из кубитальной вены, выделение ДНК для молекулярно-генетического тестирования проводили методом фенол-хлороформной экстракции по стандартной методике [10]. Для определения аллельных вариантов генов использовали аллельспецифичную полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени с использованием красителя SYBR Green I для индукции флюоресценции.

Статистические методы. Частота встречаемости аллелей и генотипов определены прямым подсчетом. Оценка отклонения распределений генотипов изученных полиморфизмов ДНК от канонического распределения Харди—Вайнберга и анализ ассоциативных связей внутри генотипических сочетаний, а также оценка степени различий в частоте встречаемости аллелей, генотипов и межгенных комбинаций между исследуемыми группами проведены с помощью точного критерия Фишера. Расчет отношения шансов (ОШ) с 95% доверительным интервалом (ДИ) и р-значения выполнен с помощью общедоступного онлайн-калькулятора.

Определили частоту полиморфных вариантов –1171dupА (5А/6А) гена MMP-3, A82G гена ММР-12 и G634C гена VEGF в основной и контрольной группах, исследовали ассоциации носительства данных полиморфизмов с риском развития ВБМТ. После проведения молекулярно-генетического тестирования частоты генотипов по редким аллелям изучаемых генов определялись прямым подсчетом в соответствии с разделением на клинические группы. Распределение аллелей всех генов соответствует равновесию Харди—Вайнберга; р>0,1. Распределение частот генотипов по полиморфным аллелям изученных генов представлено в табл. 1.

Таблица 1. Частота генотипов и распределение полиморфных аллелей в основной и контрольной группах исследования

Мы провели анализ ассоциативных связей носительства аллельных вариантов генов с ОШ.

Полиморфный аллель С локуса 634 G/C гена VEGF может рассматриваться в качестве маркера повышенного риска развития ВБМТ, ОШ=5,869 (p=0,00004). Гетерозиготные носители редкого аллеля имеют риск развития варикозной трансформации в 5,611 раза (p=0,0008), а гомозиготы С/С в 16,833 раза (p=0,00021) выше, чем обладатели дикого генотипа. Для носителей редкого полиморфного аллеля С общее увеличение риска составило 4,344 раза (р=0,00001).

Статистически значимых различий в частотах встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса A-82G гена ММР-12 в исследуемых группах не обнаружено. Выявлено, что носительство полиморфного аллеля 6А локуса –1171dupА (5А/6А) гена MMP-3 является фактором увеличенного риска развития ВБМТ с ОШ=2,250 (p=0,0162). Гетерозиготные носители аллеля 6А имеют риск варикозной трансформации вен таза в 2,619 раза (p=0,1458), а гомозиготы 6А/6А в 5,133 раза (p=0,0158) выше, чем обладатели дикого генотипа, однако для отдельных генотипов различия не являются статистически значимыми. Общий риск для носителей аллеля 6А составил 2,253 (р=0,0182). В табл. 2 представлены

Таблица 2. Отношение шансов, доверительный интервал и значение р для различных генотипов по редким аллелям генов
результаты статистического анализа с указанием ОШ, ДИ и р-значения для носительства аллеля, гетерозиготного и гомозиготного генотипов, а также общий риск для каждого полиморфизма.

Важно отметить, что именно значение ОШ общего риска является интегральным показателем влияния носительства полиморфного аллеля на вероятность развития заболевания, поэтому общий риск учитывается в первую очередь.

Представленное исследование является пилотным в изучении молекулярно-генетических предик-торов развития ВБМТ у женщин репродуктивного возраста. Согласно полученным предварительным результатам, полиморфные варианты генов ММР-3 и VEGF могут оказывать влияние на риск развития варикозной трансформации вен таза.

Надо отметить, что существуют указания на наличие ассоциативных связей носительства полиморфных аллелей генов ММР и высокого риска ВБНК, в частности, в качестве генов-предикторов описаны ММР-9, ММР-1, ММР-3 и некоторые другие [7—9]. Также ранее было показано увеличение риска ВБНК для редкого аллеля VEGF в популяции Западно-Сибирского региона [11. Учитывая большую частоту выявления в группе исследования таких сопутствующих заболеваний, как ВБНК и хронический геморрой, есть основания предполагать сходство патогенетических процессов варикозной трансформации как подкожных вен нижних конечностей, так и венозных сплетений малого таза и яичниковых вен. Клинические подтверждения этому можно найти в литературе, однако с использованием молекулярно-генетических технологий схожесть процессов патогенеза данных состояний продемонстрирована впервые.

Полученные в ходе изучения полиморфизмов ММР-3 и VEGF сведения о влиянии на риск ВБМТ являются предварительными и отражают результаты пилотного исследования патогенеза варикозного расширения вен в системе нижней полой вены. Выявленное увеличение риска для носителей полиморфных аллелей является основанием для проведения дальнейших исследований с целью поиска молекулярно-генетических предикторов ВБМТ. Важно отметить, что пациенткам выполнено комплексное диагностическое исследование, включающее молекулярно-генетический анализ и бесконтрастную МР-ангиографию, которая является одним из наиболее диагностически ценных и объективных методов визуализации расширения вен малого таза и оценки параметров рефлюкса по гонадным венам [12], что усиливает специфичность молекулярно-генетических методов.

Результаты получены в популяции Западно-Сибирского региона, и, вероятно, на данном начальном этапе их некорректно интерпретировать в глобальном масштабе, однако это открывает перспективы для поиска интегральных маркеров патогенетических процессов при варикозной трансформации венозной стенки различной анатомической локализации.

Выявлено, что носительство полиморфного аллеля 5A/6A гена ММР-3 и полиморфного аллеля С гена VEGF увеличивает риск развития варикозной трансформации в системе нижней полой вены с ОШ=2,253 (p=0,0182) и ОШ=4,344 (p=0,00001) соответственно. С учетом этногенетических особенностей статистически значимое влияние носительства аллельных вариантов генов ММР-3 и VEGF на риск развития ВБМТ описано нами впервые.

Исследование выполнено при финансовой поддержке гранта Президента Р.Ф. (№МД-5175.2016.7) в части МРТ, гранта Российского фонда фундаментальных исследований (№ 16−34−00554 мол_а) в части клинического анализа и ФАНО России по теме 0333−2016−0003 в части работ по постпроцессингу.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — А.И., К.С., А.А.

Сбор и обработка материала — А.А., К.С.

Статистическая обработка данных — Ю.В.

Написание текста — К.С., Ю.В.

Редактирование — К.С., В.В.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail