Влияние низкоинтенсивного лазерного облучения крови на функциональную активность нейтрофилов у больных внебольничной пневмонией

Внебольничная пневмония (ВП) остается одной из самых распространенных острых неспецифических патологий легких и представляется важнейшим социально значимым инфекционным заболеванием населения всех возрастов и профессий. Учитывая тяжесть клинического течения, частое развитие осложнений и возможный затяжной характер воспалительного процесса, возникает необходимость в более глубоком изучении и постоянном совершенствовании методов, позволяющих судить об активности воспалительного процесса, а также в поиске способов его скорейшего разрешения.

Как известно, развитие и исходы острого воспаления зависят от функционального состояния нейтрофилов, ответственных за процесс фагоцитоза и внутриклеточное переваривание возбудителей инфекционных заболеваний [1]. В результате гиперактивации нейтрофилов происходит высвобождение ферментов и факторов бактерицидности во внеклеточное пространство [2].

Данные литературы свидетельствуют о том, что фагоцитарная способность нейтрофилов может варьировать под действием различных антигенов и токсинов [3]. Так, снижение фагоцитарной активности нейтрофилов наблюдается при хронически протекающих заболеваниях, в то время как при остром воспалительном процессе отмечается повышенная активность лейкоцитов [4].

В последние годы большое внимание уделяется использованию лазерной терапии в лечении бронхолегочных заболеваний. В клинических исследованиях показано, что применение внутривенного лазерного облучения крови (ВЛОК) активизирует иммунную систему, вызывает усиление бактерицидной активности сыворотки крови и системы комплемента, улучшает динамику показателей функции внешнего дыхания, способствует уменьшению тяжести заболевания [5].

Несмотря на имеющиеся данные, остаются не до конца изученными вопросы применения низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) в комплексной терапии ВП, а именно его влияние на функциональную активность нейтрофилов, оцениваемую по значению теста с нитросиним тетразолием (НСТ).

Цель настоящей работы — изучение влияния НИЛИ крови на показатели НСТ-теста у больных ВП.

Под наблюдением находились 100 больных ВП в возрасте от 19 до 75 лет (средний возраст 54±14 лет), в том числе 61 (61%) мужчина и 39 (39%) женщин. Диагноз «пневмония» устанавливался на основании характерных жалоб на повышение температуры тела, кашель с отделением мокроты, боль в грудной клетке, связанную с дыханием или кашлем, физикальных данных, показателей лабораторных методов исследования, свойственных данной патологии, а также инфильтративных изменений на рентгенограмме.

Обследование больных проводили утром в 1-й и 2-й дни госпитализации и через 3—4 дня после завершения лечения. Все больные случайным методом были разделены на 2 группы: контрольную (n=30) и основную (n=70). Группу сравнения составили 30 практически здоровых лиц, которые были обследованы для получения средних нормальных значений изучаемых показателей.

С учетом тяжести течения ВП все больные были распределены на 3 группы: легкое течение воспалительного процесса наблюдалось у 15 (21,2%) пациентов основной группы и 7 (23,3%) больных контрольной группы; среднетяжелое течение заболевания — у 42 (60%) пациентов основной группы и 18 (60%) больных контрольной группы; тяжелое течение процесса — у 13 (18,5%) пациентов основной группы и 5 (16,6%) больных контрольной группы.

Медикаментозная терапия проводилась всем больным в течение 10—14 дней в соответствии со стандартом лечения В.П. Антибактериальная терапия в составе макролида и цефалоспорина III поколения назначалась эмпирически. Больным основной группы дополнительно к традиционной терапии проводился курс ВЛОК. Для внутривенной лазерной терапии использовали аппарат Матрикс-ВЛОК («Матрикс», Россия) с длиной волны 0,405 мкм, выходной мощностью на торце магистрального световода 1 мВт [6]. Лазерное облучение проводили в течение 5—7 мин в непрерывном режиме излучения, курс лечения состоял из 7 процедур, выполняемых ежедневно.

Функциональную активность нейтрофилов определяли по их способности восстанавливать НСТ в спонтанном и стимулированном HCТ-тесте. Тест проводили с использованием НСТ («Sigma», с молекулярным весом 817,6) в концентрации 2 мг на 1 мл фосфатно-солевого буфера (рН 7,2—7,4). Для стимуляции нейтрофилов использовали 0,05% раствор опсонизированного зимозана, А («Sigma»). В качестве опсонинов была использована сыворотка доноров IV группы. Материалом для исследования служила венозная кровь, взятая натощак в пробирки, содержащие гепарин. Постановка реакции осуществлялась следующим образом: на два стекла наносили по 20 мкл суспензии лейкоцитов. Далее добавляли к лейкоцитам на первом стекле 20 мкл фосфатно-солевого буфера и 20 мкл раствора НСТ, к клеткам на втором стекле — 20 мкл опсонизированного зимозана (стандартный стимулятор) и 20 мкл раствора НСТ. Оба стекла инкубировали 20 мин при температуре 37 °C, после чего препараты высушивали на воздухе, фиксировали в 95% этаноле в течение 10 мин, опускали в 0,5% сафранин и быстро оттуда доставали. После промывания препаратов под струей проточной воды их высушивали на воздухе. Под световым микроскопом высчитывали процентное содержание нейтрофилов с голубой «вуалью» или синими вкраплениями, образуемыми диформазаном, на 100 лейкоцитов. По разнице между числом стимулированных диформазанпозитивных клеток и количеством спонтанных диформазанпозитивных клеток рассчитывали функциональный резерв нейтрофилов — индекс стимуляции (ИС).

Полученные данные были обработаны по общепринятым критериям вариационно-статистического анализа с вычислением средних величин (M), ошибки средней арифметической (m) с помощью пакета компьютерных программ Microsoft Excel (2010). Для оценки статистической значимости различий средних величин в случаях двух выборок использовался t-критерий (критерий Стьюдента). Различия считались достоверными при p<0,05.

Результаты исследования показателей НСТ-теста в зависимости от тяжести течения заболевания у больных ВП представлены в таблице.

Как видно из таблицы, у пациентов с легким течением ВП в основной и контрольной группах до лечения отмечались высокие показатели как спонтанного, так и стимулированного НСТ-теста, которые достоверно превышали показатели нормы. Полученные результаты совпадают с данными литературы [7, 8]. После лечения в контрольной группе наблюдалось снижение показателей спонтанного и стимулированного НСТ-теста, но они не достигли нормальных значений, что может говорить о неполном завершении патологического процесса к концу лечения. У пациентов основной группы после лечения отмечалось достоверное снижение до значений нормы спонтанного и стимулированного НСТ-теста с сохранившимся на нормальном уровне ИС, что, по нашему мнению, свидетельствует о положительном действии лазерного излучения на функциональную активность лейкоцитов и способствует адекватному ответу иммунной системы на воспалительный процесс в виде завершенности фагоцитоза.

По данным таблицы также видно, что у пациентов с ВП средней степени тяжести до лечения отмечались высокие показатели как спонтанного, так и стимулированного НСТ-теста в обеих группах, которые статистически достоверно превышали показатели здоровых людей. Однако И.С., указывающий на метаболический потенциал фагоцитирующих клеток, был достоверно снижен в исследуемых группах. Такие изменения свидетельствуют о снижении метаболического потенциала фагоцитов на фоне активного бактериального процесса в легких при ВП среднетяжелого течения.

После лечения нами получена разнонаправленная динамика показателей НСТ-теста и И.С. Так, у пациентов контрольной группы показатель спонтанного НСТ-теста снизился, что оказалось статистически незначимым и достоверно превышало значение нормы. Показатель стимулированного НСТ-теста, несмотря на достоверное снижение уровня, нормы также не достиг, а ИС оказался ниже нормальных значений.

В основной группе пациентов, получавших процедуры ВЛОК, после лечения отмечалось статистически достоверное снижение спонтанного и стимулированного НСТ-теста, а ИС увеличился до нормальных значений.

Как видно из таблицы, пациенты с ВП тяжелой степени до лечения имели достоверно низкие показатели стимулированного НСТ-теста и ИС в основной и контрольной группах, тогда как показатель спонтанного НСТ-теста был достоверно повышен в обеих группах, что свидетельствует о низких резервных возможностях бактерицидных свойств нейтрофилов.

После лечения в контрольной группе наблюдалось незначительное повышение показателей стимулированного НСТ-теста и снижение показателей спонтанного НСТ-теста, не достигших нормальных значений. Показатель И.С. недостоверно повысился до 2,52±0,32, что оказалось ниже нормы.

У пациентов основной группы после лечения выявлены достоверные изменения показателей тетразолиевой активности и ИС, которые достигли нормальных показателей.

Таким образом, результаты нашего исследования показывают, что отсутствие достоверной динамики показателей тетразолиевой активности при традиционной медикаментозной терапии свидетельствует о недостаточной функциональной активности нейтрофилов, что способствует дальнейшему сохранению воспалительного процесса в ткани легкого, тогда как включение в комплексную терапию больных ВП ВЛОК сопровождается достоверной нормализацией бактерицидной активности нейтрофилов и функционального резерва фагоцитирующих клеток, что способствует скорейшему завершению воспалительного процесса.

Конфликт интересов отсутствует.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования: Н.Б., А.Г.

Сбор и обработка материала, статистическая обработка данных, написание текста: А.Г.

Редактирование: Н.Б.