Сенсоневральная тугоухость (СНТ) — заболевание клинически и наследственно гетерогенное. Идентификация генов глухоты позволяет осознать молекулярные механизмы процесса слуха, что предопределяет перспективы развития ДНК-диагностики этого заболевания.
Наиболее распространенной мутацией у больных наследственной СНТ является делеция 35delG в гене GJB2, кодирующем межклеточные коннексиновые каналы. Частота встречаемости данной делеции составляет в среднем 80% [1]. Прогрессирующая с возрастом сенсоневральная глухота, если она наследуется по линии матери, часто связана с заменой аланина (А) на гуанин (Г) в позиции 1555 гена 12S рРНК. Предрасположенность к повышенной чувствительности к ототоксичным антибиотикам часто обусловлена наличием мутации (A1555G), а также делеции тимина в позиции 961, 961delТ. В гене транспортной РНК, которая переносит серин, известны три мутации, которые вызывают изолированную тугоухость. Это мутация A7445G (замена гуанина на аденин в позиции 7445), мутация 7472insС (вставка цитозина в позиции 7472) и мутация Т7511С (замена тимина на цитозин в позиции 7511) [2].
Главными участниками второй фазы метаболизма ксенобиотиков являются ферменты глутатион-S-трансферазы (GST), превращающие токсичные промежуточные продукты первой фазы в водорастворимые нетоксичные соединения путем образования коньюгатов с глутатионом [3]. У человека встречаются 3 аллельных варианта гена GSTM1: GSTM 1-А и GSTM 1-В, кодирующие белки со сходной ферментативной активностью, и GSTM 1-0, который содержит протяженную делецию и кодирует неактивный вариант фермента — нулевой аллель [4].
Таким образом, можно предположить, что гены GST могут быть вовлечены в патогенез различных нейродегенеративных заболеваний, в том числе и СНТ.
Материал и методы
В качестве материала для исследований послужили образцы ДНК 200 человек: 109 пациентов, проходивших стационарное лечение в клинике оториноларингологии Военно-медицинской академии по поводу понижения слуха двустороннего или одностороннего характера, и 91 отиатрически здоровых лиц, вошедших в контрольную группу. Средний возраст обследованных составил 40,4 года. Среди обследованных лиц было 59 женщин и 141 мужчина.
Выделение ДНК выполняли из цельной венозной крови стандартным методом фенол-хлороформной экстракции [5]. Анализ мутаций проводили методом полимеразной цепной реакции с последующей рестрикцией специфическими эндонуклеазами на амплификаторе ДНК-технология с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы «Силекс» (Россия) [6]. Исследовали мутацию 35delG в гене GJB2 (DFNB1). Проводили анализ генов MTRNR1 (12S р-РНК) и MTTS1 (т-РНК серина) у больных с приобретенной сенсоневральной тугоухостью. Исследовался полиморфизм гена второй фазы детоксикации GSTM1. Всем пациентам выполнено полное аудиологическое исследование, включающее составление слухового паспорта, пороговую и надпороговую тональную аудиометрию, речевую аудиометрию, исследование слуховой чувствительности к ультразвуку, импедансную аудиометрию; по показаниям для исключения невриномы VIII черепного нерва при односторонней тугоухости выполнялось магнитно-резонансное исследование головного мозга с визуализацией зон мосто-мозжечкового угла.
Поражение слуховой системы оценивалось по балльной системе с использованием классификации СНТ: по степени понижения слуха — тугоухость I степени 20—40 дБ — 1 балл, II степени — 41—55 дБ — 2 балла, III степени — 56—70 дБ — 3 балла, IV — 71—90 дБ — 4 балла, 91 дБ и более глухота — 12 баллов; по локализации процесса — одно- и двусторонняя; по преимущественному охвату частот — до 500 Гц — низкочастотная, до 2000 Гц — среднечастотная, свыше 2000 Гц — высокочастотная. Учитывался возраст начала заболевания: до 20 лет — 6 баллов, до 30 лет — 5 баллов, до 40 лет — 4 балла, до 50 лет — 3 балла, до 60 лет — 2 балла, свыше 60 лет — 1 балл.
Результаты исследования
Больные с тугоухостью распределились по нозологическим формам следующим образом: 94 (86,2%) обследованных страдали СНТ, 15 (13,8%) пациентов — кондуктивной тугоухостью (отосклерозом, который был подтвержден интраоперационно). По этиологии заболевания больные СНТ были представлены тремя группами. У 31 пациента в качестве этиологического фактора установлены сосудистые причины понижения слуха (гипертоническая болезнь, стресс, вегетососудистая дистония), у 29 — травматические (взрывная, аку- баро- и черепно-мозговая травма, шум), у 34 — инфекционно-токсические (гриппозная, риновирусная, бактериальная инфекция респираторного тракта и среднего уха, лекарственная интоксикация).
Мутация 35delG в гене GJB2 (DFNB1) была выявлена в гетерозиготном состоянии у 2 (2,1%) больных СНТ и у 1 (1,1%) представителя контрольной группы. В одном случае мутация 35delG обнаружена у больного СНТ инфекционно-токсической этиологии, в другом — у больного с посттравматической природой заболевания.
Мутация A1555G в гене MTRNR1 выявлена у 3 (3,2%) пациентов, при этом различия достоверны по сравнению с группой контроля, где данная мутация не обнаружена (р<0,05). В группе больных сенсоневральной тугоухостью достоверно чаще встречается мутация Т7512С в гене MTTS1 — 7 (7,4%) человек по сравнению с контролем — 1 (1,1%) пациент (р<0,05). В общей совокупности мутации в митохондриальных генах среди больных СНТ выявлены у 11 (11,7%) пациентов, а в контрольной у 3 (3,3%) (различия достоверны, р<0,05).
Делеция гена GSTM1, кодирующего фермент 2-й фазы детоксикации, присутствовала более чем у 72,5% больных СНТ, вызванной инфекционно-токсическими причинами, в то время как среди обследованных из других групп лишь в 27—36% случаев, приравниваясь к популяционному распределению данной мутации. Таким образом, прослеживается сильная корреляционная связь между мутацией в гене GSTM1 и частотой развития СНТ инфекционно-токсической этиологии (коэффициент корреляции r= –1, что свидетельствует о полной обратной корреляционной связи).
Таким образом, приобретенная СНТ не является моногенным заболеванием. Перспективным должен стать поиск генетических детерминант предрасположенности к развитию тугоухости под воздействием этиологических факторов.
Распределение больных по возрасту начала заболевания не выявило существенной разницы по этому показателю между подгруппами пациентов с СНТ инфекционно-токсического генеза. Так, средний возраст начала слуховых расстройств у имеющих генотип GSTM1del был 38,7 года, а GSTM1+ — 37,7 года. Однако средний суммарный показатель тяжести поражения слуховой системы в подгруппе с нулевым аллелем составил 14,4 балла, а среди больных с генотипом GSTM1+ — 9,5 балла. Нейросенсорная тугоухость в подгруппе с мутацией GSTM1 протекала в 1,5 раза тяжелее, чем в подгруппе больных с перцептивной тугоухостью, имеющих нормальный GSTM1, что выражалось прежде всего в более значимом повышении порогов восприятия звука с вовлечением всех частот слухового диапазона, более частым двусторонним процессом и развитием глухоты среди больных с дефектом исследуемого гена. Среди больных с тугоухостью инфекционно-токсической этиологии с генотипом GSTM1del преобладала тугоухость II и III степени, а среди больных с генотипом GSTM1+ — I степени.
В группах пациентов с СНТ инфекционно-токсической этиологии с генотипом GSTM1del преобладала низкочастотная тугоухость, а среди больных с генотипом GSTM1+ — высокочастотная.
Выводы
1. Гетерозиготное носительство мутации 35delG в гене GJB2 (DFNB1) среди пациентов с приобретенной СНТ не превышает распространение данной мутации в общей популяции, мутация не встречается в гомозиготном состоянии у больных приобретенными формами тугоухости.
2. Установлено, что в патогенез приобретенной сенсоневральной тугоухости вовлечены митохондриальные гены MTRNR1 и MTTS1, ответственные за ассоциированные с аминогликозидными антибиотиками формы этого заболевания. Среди здоровых лиц частота бессимптомного носительства данных мутаций статистически незначима.
3. Полученные результаты доказывают, что мутантный аллель гена GSTM1 предрасполагает к развитию СНТ (кохлеопатии) под действием интоксикационных и инфекционных факторов. Его можно рассматривать как фактор генетического риска развития заболевания инфекционно-токсической этиологии.
4. Сенсоневральное поражение слуха у больных с мутацией GSTM1 протекает тяжелее, чем у пациентов, имеющих нормальный аллель GSTM1, что выражается в значимом повышении порогов восприятия звука с вовлечением всех частот слухового диапазона, но с преобладанием поражения на низких частотах.
5. Данное молекулярно-генетическое исследование можно рекомендовать в качестве дополнительного метода диагностики наряду с общеизвестными рутинными способами, с целью медико-генетического консультирования.