Доброхотова Ю.Э.

ФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России

Саламова К.К.

ФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России

Особенности микробиоты репродуктивного тракта у пациенток с патологией эндометрия

Авторы:

Доброхотова Ю.Э., Саламова К.К.

Подробнее об авторах

Прочитано: 1252 раза


Как цитировать:

Доброхотова Ю.Э., Саламова К.К. Особенности микробиоты репродуктивного тракта у пациенток с патологией эндометрия. Российский вестник акушера-гинеколога. 2023;23(6‑2):107‑113.
Dobrokhotova YuE, Salamova KK. Peculiarities of reproductive tract microbiota in patients with endometrial pathology. Russian Bulletin of Obstetrician-Gynecologist. 2023;23(6‑2):107‑113. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/rosakush202323062107

Рекомендуем статьи по данной теме:

Введение

В человеческом организме количество бактериальных клеток превышает число собственных клеток. Бактерии организованы в различные сообщества, связаны с различными участками кожи, поверхностями слизистых оболочек и даже с внутренними органами. Локально-специфические взаимодействия между человеческим организмом и микроорганизмами, как оказалось, являются существенными для многих аспектов физиологии человека. Легкие и мочевой пузырь, ранее считавшиеся физиологически стерильными, содержат уникальный микробиом. Таким образом, обычное деление на стерильные и нестерильные органы отражает недооценку масштаба многообразия бактериального сообщества человеческого организма [1—6]. Давно известно, что в женском репродуктивном тракте микробиом может быть очень разнообразным [7, 8]. Наибольшее внимание исследователи уделяли влагалищному биотопу, хотя в последние десятилетия накоплены данные, свидетельствующие, что остальная часть женской репродуктивной системы, включая полость матки, также не является стерильной [9].

В настоящее время существует предположение, что матка содержит свою собственную микробиоту, в которой микробы могут влиять как на нормальную функцию матки, так и на патологически измененную. Однако полностью микробиоту матки и взаимоотношения между человеческим организмом и микробом еще предстоит выяснить [10, 11].

Данные о нормальной микробиоте верхних отделов половых путей немногочисленны [12]. Следует отметить, что микробиом верхних отделов половых путей количественно и качественно отличается от такового нижних половых путей; однако данные секвенирования (последовательного изучения) были нацелены только на ограниченное количество бактерий [13].

В отечественном исследовании, выполненном в 2020 г., ДНК Gardnerella vaginalis была обнаружена у 30% пациенток с патологией эндометрия, тогда как у здоровых женщин этот микроорганизм был обнаружен в 16,7% наблюдений [14].

Описаны изменения микробиоты полости матки при эндометриозе. Так, авторы обнаружили, что представители условно-патогенной микрофлоры, такие как гарднерелла, энтерококк, стрептококк и стафилококк выявлялись преимущественно в мазках эндометрия у женщин с диагнозом эндометриоз; за ними следовали другие микроорганизмы, включая Actinomyces, Corynebacterium, Fusobacterium, Prevotella и Propionibacterium; в то же время Lactobacillus spp. в основном была обнаружена у пациенток контрольной группы [15].

Для определения роли микробиоты в развитии гиперпластических процессов в эндометрии и рака женской половой системы были взяты образцы эндометрия 31 женщины, которым проводилась гистероскопия по поводу рака эндометрия, гиперплазии эндометрия или других доброкачественных заболеваний. Было проведено секвенирование 16S-рибосомальной РНК для качественной и количественной оценки бактериального разнообразия в образце. В репродуктивном тракте пациенток с гиперплазией и раком эндометрия преобладали микроорганизмы Anaerostipes, Dialister, Peptoniphilus, Ruminococcus, Anaerotruncus, Atopobium, Bacteroides и Porphyromonas по сравнению с таковыми при доброкачественных заболеваниях, что позволяет предполагать значение инфекционного (воспалительного) фактора в возникновении рака эндометрия [5].

Результаты исследования [5] позволяют предположить, что обнаружение Atopobium vaginae и идентифицированных Porphyromonas spp. в репродуктивном тракте в сочетании с высоким влагалищным pH статистически значимо ассоциируется с наличием рака эндометрия. Учитывая документальные данные о связи идентифицированных микроорганизмов с наличием других патологических состояний, можно предполагать, что эти результаты указывают на возможность участия микробиома в проявлении, этиологии или прогрессировании рака эндометрия, что требует дальнейшего изучения.

Определили также [16], что между микробиотой здоровых женщин и пациенток с полипами эндометрия наблюдались существенные различия.

Состав микробиоты как матки, так и нижних отделов половых путей, возможно, может служить показанием к проведению диагностики рака [5].

Цель исследования — изучить микробиоту репродуктивного тракта (влагалище, полость матки) у пациенток с гиперплазией и полипами эндометрия.

Материал и методы

Микробиоту репродуктивного тракта оценивали у 20 пациенток с гиперплазией эндометрия (1-я группа), у 20 пациенток с полипами эндометрия (2-я группа) и у 20 пациенток без патологии эндометрия (3-я, или контрольная, группа). Медиана возраста пациенток с гиперплазией эндометрия составила 43 года (от 28 до 55 лет), медиана возраста пациенток с полипами эндометрия — 41 год (от 32 до 45 лет). Медиана возраста пациенток без патологических изменений эндометрия составила 40,5 года (от 22 до 55 лет). Во всех образцах эндометрия у пациенток 1-й группы была выявлена гиперплазия без атипии. Во 2-й группе у всех пациенток наблюдался железисто-фиброзный полип. В контрольной группе у 10 (50%) пациенток был выявлен пролиферативный эндометрий и соответственно у 10 (50%) пациенток — фаза неполноценной секреции. Забор материала из влагалища выполнен с помощью зонда-тампона. С целью исключения контаминации и чистоты эксперимента забор материала из полости матки осуществляли с помощью эндобраша Бренд Laboratoire C.C.D. (Франция). Этот инструмент состоит из двух частей: внешнего прозрачного полипропиленового контура, имеющего отметки 4, 7 и 10 см от дистального кольца инструмента, соответствующие глубине его введения, и внутренней части инструмента, которая представляет собой белый полипропиленовый мандрен, соединенный с нейлоновой щеткой. Кончик щетки снабжен колпачком, аналогичным по диаметру внешней части инструмента. После забора эндометриального мазка выполняли обработку внешнего контура. Отделяемое помещали в пробирку с транспортной средой.

Микробиоту репродуктивного тракта оценивали с помощью ПЦР-метода в режиме реального времени с применением наборов АмплиСенс Флороценоз.

При физикальном осмотре пациенток каких-либо особенностей не выявлено. Все пациентки имели телосложение по женскому типу. Массо-ростовые показатели у обследованных варьировали в широких пределах. Статистически значимых различий по росту, массе тела и индексу массы тела в 3 группах не выявлено. При сборе анамнеза отмечались незначительные колебания менструального цикла, особенно у пациенток перименопаузального периода, что можно объяснить физиологическими изменениями, характерными для данного периода, обусловленными чаще всего недостаточностью лютеиновой фазы менструального цикла.

Медиана наступления менархе в трех группах составила 13 лет (от 12 до 16 лет). При анализе полученных результатов обращает на себя внимание отсутствие существенных колебаний в сроке наступления менархе, продолжительности менструации и длительности менструального цикла у обследуемых пациенток, в том числе при сравнении с контрольной группой. При анализе гинекологического анамнеза пациенток, отмечено отсутствие статистически значимых отличий в особенностях репродуктивного здоровья пациенток разных групп.

Результаты и обсуждение

При анализе микробиоты влагалища (рис. 1) выявлено, что основная микрофлора влагалища у пациенток как с гиперплазией эндометрия (1-я группа), так и без патологии представлена лактобактериями, бактероидами, энтеробактериями. У пациенток с гиперплазией эндометрия статистически значимо чаще встречались Ureaplasma parvum и Gardnerella vaginalis во влагалище по сравнению с таковыми контрольной группы (p<0,05).

Рис. 1. Распределение микробиоты влагалища у пациенток 1-й и 3-й групп.

* — p<0,05 при сравнении данных 1-й и 3-й групп. Здесь и на рис. 2, 4, 5: Gv — Gardnerella vaginalis, Av — Atopobium vaginae, Lacto — лактобактерии, Bact — бактероиды, UP — Ureaplasma parvum.

У пациенток с полипами эндометрия (2-я группа) статистически значимо чаще наблюдались стафилококк и Gardnerella vaginalis по сравнению с этими микроорганизмами в контрольной группе (p<0,01) (рис. 2).

Рис. 2. Распределение микробиоты влагалища у пациенток 2-й и 3-й групп.

* — p<0,05 при сравнении показателей 2-й и 3-й групп.

Нарушение микробиоты влагалища по типу бактериального вагиноза в 1-й группе встречалось у 25% (n=5), во 2-й группе — у 40% (n=8), и в контрольной группе — только у 10% пациенток (n=2) (рис. 3).

Рис. 3. Число наблюдений бактериального вагиноза у пациенток с патологией эндометрия и в контрольной группе.

Средняя численность бактерий во влагалище у пациенток с гиперплазией эндометрия и без гиперплазии представлена на рис. 4.

Рис. 4. Среднее количество различных бактерий во влагалище у пациенток с гиперплазией эндометрия и у пациенток контрольной группы.

С помощью метода полимеразной цепной реакции ДНК условно-патогенных микроорганизмов определялась в геномных эквивалентах на 1 мл биоматериала (ГЭ/мл). С целью числовой наглядности полученные значения переведены в десятичные логарифмы (лог 10).

В 1-й группе общее количество условно-патогенных микроорганизмов было выше, чем в контрольной группе, а количество лактобактерий ниже. Средняя численность Ureaplasma parvum во влагалище в 1,2 раза выше; Gardnerella vaginalis в 1,1 раза выше, концентрация стафилококков в 1,3 раза выше, стрептококков — в 1,3 раза, а общее количество лактобактерий в 1,2 раза ниже по сравнению с этим показателем контрольной группы. Различие полученных данных было статистически незначимым (p>0,05).

Во 2-й группе пациенток средняя численность Ureaplasma parvum во влагалище была в 1,3 раза выше, Gardnerella vaginalis — в 1,05 раза выше, стафилококков — в 1,7 раза, стрептококков — в 1,4 раза выше, а общее количество лактобактерий в 1,2 раза ниже по сравнению с таковыми в контрольной группе, различие полученных данных статистически не значимо (p>0,05) (рис. 5).

Рис. 5. Среднее количество различных бактерий во влагалище у пациенток с полипами эндометрия и у пациенток контрольной группы.

Во всех группах в 100% наблюдений микробиота полости матки была представлена лактобактериями, бактероидами, энтеробактериями, Gardnerella vaginalis и Ureaplasma parvum, условно-патогенная микрофлора встречалась также в контрольной группе, но в меньшем количестве.

У пациенток 1-й группы с гиперплазией эндометрия общая численность Gardnerella vaginalis в полости матки была в 1,9 раза больше, чем в 3-й группе (5,2 и 2,7 ГЭ/мл соответственно), количество лактобактерий — в 1,2 раза меньше, чем в контрольной группе (4,5 и 5,3 ГЭ/мл соответственно), общая численность бактероидов — в 1,4 раза больше (5,9 и 4,3 ГЭ/мл соответственно) (рис. 6).

Рис. 6. Количество различных бактерий в полости матки у пациенток с гиперплазией эндометрия и пациенток контрольной группы.

У пациенток 2-й группы среднее количество Gardnerella vaginalis в полости матки составило 3,2 ГЭ/мл, бактероидов — 5,2 ГЭ/мл, что в 1,2 раза больше, чем у пациенток без патологии эндометрия, а численность лактобактерий была в 1,3 раза ниже, чем в контрольной группе (4,1 и 5,3 ГЭ/мл соответственно). Статистически значимых различий по численности микробиоты в эндометрии у пациенток с патологией эндометрия и без патологии не выявлено.

По данным нашего исследования, основная микрофлора влагалища как у пациенток с патологией эндометрия, так и без патологии была представлена лактобактериями, бактероидами, энтеробактериями. В нормальном микробиоме влагалища у здоровых женщин обычно преобладают различные виды Lactobacilli [17], хотя различия в зависимости от возраста и гормонального фона очевидны [18]. Доминирующими микроорганизмами в микробиоте влагалища и шейки матки (нижний тракт) у здоровых женщин были Prevotella и Lactobacillus, что согласуется с данными современной литературы по вагинальному микробиому.

В состав нормальной микрофлоры влагалища могут входить стафилококки, микоплазмы, коринебактерии, стрептококки, пептострептококки, гарднереллы, энтерококки, энтеробактерии, вейлонеллы и бифидобактерии, а также дрожжевые грибы рода Candida. Однако суммарный удельный вес этих микроорганизмов не должен превышать 5—8% [19].

Представители условно-патогенной микрофлоры были обнаружены во всех группах, однако общее количество условно-патогенной микрофлоры во влагалище у пациенток с гиперплазией и полипами эндометрия превышало таковое у пациенток контрольной группы.

В исследовании M. Walter-Antonio [5] выявлено, что Atopobium vaginae в сочетании с Porphyromonas spp. в нижних половых путях статистически значимо связаны с гиперплазией и раком эндометрия, чувствительность — 73—93%, специфичность — 67—90%.

В нашем исследовании микробиота полости матки у пациенток с патологией эндометрия была представлена лактобактериями, бактероидами, энтеробактериями, Gardnerella vaginalis и Ureaplasma parvum, условно-патогенная микрофлора встречалась также в контрольной группе, но в меньшем количестве, также было отмечено снижение общей численности лактобактерий в полости матки у пациенток с патологией эндометрия.

По данным литературы, в зависимости от патологии эндометрия численность лактобактерий в полости матки меняется. Снижение количества лактобактерий отмечалось у пациенток с эндометриозом [20], а также у пациенток с бесплодием [21], при этом констатировано увеличение количества Lactobacillus, Bifidobacterium, Gardnerella, Streptococcus, Alteromonas и Euryarchaeota (Archaea) и снижение количества Pseudomonas и Enterobacteriaceae в образцах эндометрия у пациенток с полипами эндометрия по сравнению с таковыми у здоровых женщин.

Микробные сообщества представлены во всех отделах репродуктивного тракта и играют определенную роль в развитии патологии эндометрия. Молекулярные механизмы, способствующие нарушению тканевого и клеточного гомеостаза с возникновением гиперпластических изменений при наличии инфекционного агента и местной воспалительной реакции в эндометрии, изучены недостаточно. Необходимо исследовать микробиоту репродуктивной системы, чтобы понять синергические взаимодействия между микробиотой репродуктивного тракта и локально-специфическими изменениями в органе. Согласно консервативным оценкам около 15% всех типов новообразований связаны с различными инфекционными агентами. Тем не менее имеющихся знаний недостаточно, чтобы объяснить, как микробиом способствует росту и развитию рака [22]. Известно, что воспаление является защитным механизмом организма, реализуемым в ответ на действие патогенных факторов, в результате чего происходит их элиминация из организма. Однако длительный воспалительный процесс не оказывает протективного действия, а, наоборот, приводит к деструктивным изменениям в эндометрии [23].

Заключение

У пациенток с патологией эндометрия во влагалище статистически значимо чаще встречалась условно-патогенная микрофлора: у пациенток с гиперплазией эндометрия — Ureaplasma parvum и Gardnerella vaginalis, а у пациенток с полипами эндометрия — стафилококк и Gardnerella vaginalis. Общая численность условно-патогенной микрофлоры была выше в группе пациенток с патологией эндометрия по сравнению с таковой у женщин контрольной группы, при этом общее количество лактобактерий оказалось ниже. Наше исследование показало, что частота развития дисбиоза у пациенток с гиперплазией и полипами эндометрия выше, чем у женщин без этих заболеваний. Профилактика патологии эндометрия складывается не только из своевременного выявления ановуляции и ее предупреждения, коррекции эндокринных нарушений, но и лечения пациенток с дисбиозом влагалища женских половых органов.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Ю.Э. Доброхотова, К.К. Саламова

Сбор и обработка материала — Ю.Э. Доброхотова, К.К. Саламова

Статистическая обработка — К.К. Саламова

Написание текста — К.К. Саламова

Редактирование — Ю.Э. Доброхотова

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Participation of the authors:

Concept and design of the study — Yu.E. Dobrokhotova, K.K. Salamova

Data collection and processing — Yu.E. Dobrokhotova, K.K. Salamova

Statistical processing of the data — K.K. Salamova

Text writing — K.K. Salamova

Editing — Yu.E. Dobrokhotova

Authors declare lack of the conflicts of interests.

Список литературы:

  1. Aagaard K, Ma J, Antony KM, Ganu R, Petrosino J, Versalovic J. The placenta harbors a unique microbiome. Sci Transl Med. 2014;6:237ra265.
  2. Branton WG, Ellestad KK, Maingat F, Wheatley BM, Rud E, Warren RL, Holt RA, Surette MG, Power C. Brain microbial populations in HIV/AIDS: α-Proteobacteria predominate independent of host immune status. PLoS One. 2013;8:1:e54673.
  3. Garcia-Grau I, Simon C, Moreno I. Uterine microbiome — low biomass and high expectations. Biol Reprod. 2019;101:6:1102-1114. https://doi.org/10.1093/biolre/ioy257
  4. Urbaniak C, Cummins J, Brackstone M, Macklaim JM, Gloor GB, Baban CK, Scott L, O’Hanlon DM, Burton JP, Francis KP, Tangney M, Reid G. Microbiota of human breast tissue. Appl Environ Microbiol. 2014;80:10:3007-3014.
  5. Walter-Antonio MRS, Chen J, Multuni F, Hokenstad A, Distad TJ, Cheek EH, Keeney GL, Creedon DJ, Nelson H, Mariani A, Chia N. Potential contribution of the uterine microbiome in the development of endometrial cancer. Genome Med. 2016;8:1:122. 
  6. Wolfe AJ, Toh E, Shibata N, Rong R, Kenton K, Fitzgerald MP, Mueller ER, Schreckenberger P, Dong Q, Nelson DE, Brubaker L. Evidence of uncultivated bacteria in the adult female bladder. J Clin Microbiol. 2012;50:4:1376-1383.
  7. Козлова А.А., Николаева А.В., Припутневич Т.В., Баранов И.И., Мешалкина И.В. Микробиом влагалища женщины во время беременности и в послеродовом периоде: динамика, взаимосвязь с кишечной микрофлорой, влияние на становление микробиоты новорожденного. Акушерство и гинекология: новости, мнения, обучение. 2021;9:4:71-78.  https://doi.org/10.33029/2303-9698-2021-9-4-71-78
  8. Лебедева О.П., Грязнова М.В., Козаренко О.Н. Сыромятников М.Ю., Попов В.Н. Микробиом влагалища при нарушениях менструального цикла (обзор). Научные результаты биомедицинских исследований. 2021;7:4:433-450.  https://doi.org/10.18413/2658-6533-2021-7-4-0-9
  9. Moreno I, Simon C. Deciphering the effect of reproductive tract microbiota on human reproduction. Reprod Med Biol. 2018;18:1:40-50. (In Russ.). https://doi.org/10.1002/rmb2.12249
  10. Molina, NM, Sola-Leyva A, Saez-Lara MJ, Plaza-Diaz J, Tubić-Pavlović A, Romero B, Clavero A, Mozas-Moreno J, Fontes J, Altmäe S. New opportunities for endometrial health by modifying uterine microbial composition: Present or future? Biomolecules. 2020;10:4:593.  https://doi.org/10.3390/biom10040593
  11. El-Hamarneh T, Hey-Cunningham AJ, Berbic M, Al-Jefout M, Fraser IS, Black K. Cellular immune environment in endometrial polyps. Fertil Steril. 2013;100:5:1364-1372.
  12. Romero R, Espinoza J, Mazor M. Can endometrial infection/inflammation explain implantation failure, spontaneous abortion, and preterm birth after in vitro fertilization? Fertil Steril. 2004;82:4:799-804. 
  13. Mitchell C, Haick MA, Nkwopara E, Garcia R, Rendi M, Agnew K, Fredricks DN, Eschenbach D. Colonization of the upper genital tract by vaginal bacterial species in non-pregnant women. Am J Obstet Gynecol. 2015;212:5:611.e1-9.  https://doi.org/10.1016/j.ajog.2014.11.043
  14. Voroshilina ES, Zornikov DL, Koposova OV, Islamidi DK, Ignatova KY, Abakumova EI, Kurbatova NV, Plotko EE. The use of real-time PCR for evaluation of endometrial microbiota. Bulletin of Russian State Medical University. 2020;1:14-20. 
  15. Khan KN, Fujishita A, Kitajima M, Hiraki K, Nakashima M, Masuzaki H. Intra-uterine microbial colonization and occurrence of endometritis in women with endometriosis. Hum Reprod. 2014;29:2446-2456.
  16. Fang R-L, Chen L-X, Shu WS, Yao S-Z, Wang S-W, Chen Y-Q. Barcoded sequencing reveals diverse intrauterine microbiomes in patients suffering with endometrial polyps. Am J Transl Res. 2016;8:3:1581-1592.
  17. Ravel J, Gajer P, Abdo Z, Schneider GM, Koenig SSK, McCulle SL, Karlebach S, Gorle R, Russell J, Tacket CO, Brotman RM, Davis CC, Ault K, Peralta L, Forney LJ. Vaginal microbiome of reproductive-age women. Proc Nat Acad Sci. 2011;108:suppl. 1:4680-4687.
  18. Gajer P, Brotman RM, Bai G, Sakamoto J, Schütte UME, Zhong X, Koenig SSK, Fu L, Ma, ZS Zhou X, Abdo Z, Forney LJ, Ravel J. Temporal dynamics of the human vaginal microbiota. Sci Transl Med. 2012;4:132:132ra52.
  19. Майоров М.В., Жуперкова Е.А., Жученко С.И., Черняк О.Л. Вагинальный биоценоз. Современные представления о норме и патологии. Медицинские аспекты здоровья женщины. 2017;1:33-40. 
  20. Khan KN, Fujishita A, Masumoto H, Muto H, Kitajima M, Masuzaki, H Kitawaki J. Molecular detection of intrauterine microbial colonization in women with endometriosis. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2016;:199:69-75. 
  21. Kyono K, Hashimoto T, Kikuchi S, Nagai Y, Sakuraba Y. A pilot study and case reports on endometrial microbiota and pregnancy outcome: An analysis using 16S rRNA gene sequencing among IVF patients, and trial therapeutic intervention for dysbiotic endometrium. Reprod Med Biol. 2018;18:1:72-82.  https://doi.org/10.1002/rmb2.12250
  22. Доброхотова Ю.Э., Якубова К.К. Микробиота репродуктивного тракта и гиперпластические процессы эндометрия (обзор литературы). РМЖ. Медицинское обозрение. 2018;10:14-16. 
  23. Шамилова А.М., Ильина И.Ю., Боровкова Е.И., Доброхотова Ю.Э. Хронический эндометрит. Пути улучшения методов диагностики. РМЖ. Мать и дитя. 2021;4:3:243-249.  https://doi.org/10.32364/2618-8430-2021-4-3-243-249

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.