Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Шмакова Н.А.

ФГБУ «Уральский научно-исследовательский институт материнства и младенчества» Минздрава России

Чистякова Г.Н.

ФГБУ «Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества» Минздрава России

Ремизова И.И.

ФГБУ «Уральский научно-исследовательский институт материнства и младенчества» Минздрава России

Гришкина А.А.

ФГБУ «Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества» Минздрава России

Иммуногистохимические особенности цервикального эпителия при ассоциированных с вирусом папилломы человека цервикальных плоскоклеточных интраэпителиальных поражениях высокой степени онкогенного риска

Авторы:

Шмакова Н.А., Чистякова Г.Н., Ремизова И.И., Гришкина А.А.

Подробнее об авторах

Прочитано: 614 раз


Как цитировать:

Шмакова Н.А., Чистякова Г.Н., Ремизова И.И., Гришкина А.А. Иммуногистохимические особенности цервикального эпителия при ассоциированных с вирусом папилломы человека цервикальных плоскоклеточных интраэпителиальных поражениях высокой степени онкогенного риска. Российский вестник акушера-гинеколога. 2020;20(6):27‑31.
A Shmakova N, Chistyakova GN, Remizova II, Grishkina AA. Immuno-histochemical features of the cervical epithelium in human papillomavirus-associated cervical squamous intraepithelial lesions of high oncogenic risk degree. Russian Bulletin of Obstetrician-Gynecologist. 2020;20(6):27‑31. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/rosakush20202006127

Рекомендуем статьи по данной теме:
Ди­на­ми­ка экспрес­сии NOD-по­доб­ных ре­цеп­то­ров кле­ток тка­ней па­ро­дон­та па­ци­ен­тов с аг­рес­сив­ной фор­мой па­ро­дон­ти­та. Сто­ма­то­ло­гия. 2024;(6-2):10-14
Экспрес­сия NOD-по­доб­ных ре­цеп­то­ров в тка­нях па­ро­дон­та па­ци­ен­тов с аг­рес­сив­ной фор­мой па­ро­дон­ти­та. Сто­ма­то­ло­гия. 2025;(4):17-21

Введение

Рак шейки матки (РШМ) занимает лидирующие позиции по заболеваемости и смертности от злокачественных новообразований у женщин во всем мире [1]. За последнее десятилетие в России регистрируется неуклонный рост распространенности и заметное «омоложение» этой патологии с 15,5 до 25,8 на 100 тыс. населения. В настоящее время это заболевание занимает 5-е место (5,3%) среди всех злокачественных новообразований у женщин [2, 3].

Данные зарубежных исследований демонстрируют внушительные показатели относительно распространенности цервикальных плоскоклеточных интраэпителиальных поражений низкой (LSIL — low-grade squamous intraepithelial lesions) и высокой (HSIL — high-grade squamous intraepithelial lesions) степени онкогенного риска (классификация Бетесда (система), 1991 г.), по результатам которых установлено, что в мире число заболевших HSIL превышает 30 млн [3]. При этом согласно статистике у женщин репродуктивного возраста изучаемая патология занимает от 10,7 до 38,8% в структуре гинекологических заболеваний [4—6].

Именно с вирусом папилломы человека (ВПЧ) связано 9% всех новых случаев РШМ у женщин [7, 8]. Однако риск его развития наблюдается при персистенции ВПЧ-инфекции в течение 2 лет и более и повышается за счет вирогении и интеграции ДНК ВПЧ в геном клетки. Благоприятный исход с самостоятельной элиминацией ВПЧ возможен, однако вирус обладает способностью «обманывать» иммунную систему макроорганизма, приобретая определенные эволюционные особенности [9].

Данные исследований по анализу результатов длительно текущих ВПЧ-ассоциированных плоскоклеточных интраэпителиальных поражений показали, что при LSIL наблюдаются достаточно высокие показатели регресса — до 57%, прогрессирование процесса зарегистрировано в 11%, персистенция в 32% и лишь в 1% наблюдений отмечена онкотрансформация. При HSIL показатели менее позитивные, так как регресс предракового процесса наблюдается только в 32% наблюдений, при этом малигнизация происходит в 12% наблюдений [9, 10].

Исследования по изучению молекулярных механизмов инфицирования, размножения и персистенции ВПЧ и вызываемой им инфекции доказали необходимость применения не только противовирусной, но и иммуномодулирующей терапии. Тем не менее, несмотря на понимание данных механизмов, в настоящее время существующие методы терапии ВПЧ-ассоциированных цервикальных плоскоклеточных интраэпителиальных поражений высокой степени онкогенного риска не всегда являются достаточно эффективными, и в итоге рецидивы после лечения, по данным литературы, достигают 20—30% [11—13]. При этом именно от ответной реакции организма хозяина на внедрение вируса зависит степень риска развития цервикальной неоплазии и РШМ, что определяется индивидуальным генетическим «портретом» иммунной системы в виде прежде всего ее реактивности в плане локальной защиты органов урогенитального тракта [14—16]. Однако характер иммунного ответа определяется тем, по какому пути он будет происходить — по Th1 или Th2. Кроме того, именно дисбаланс Т-хелперов Th1 или Th2 приводит к развитию не только аутоиммунных, но и хронических процессов, их прогрессированию, что позволяет ожидать более тяжелое и осложненное течение вирусного воспалительного процесса при переключении с клеточного иммунитета на гуморальный [17—19].

Поэтому высокий риск онкотрансформации HSIL определяет необходимость поиска новых прогностических маркеров для подбора максимально эффективной терапии с целью снижения риска рецидивирования и прогрессирования этой патологии.

Цель исследования — выявить особенности иммунного микроокружения в клеточных структурах шейки матки при ВПЧ-ассоциированных цервикальных интраэпителиальных поражениях высокой степени онкогенного риска.

Материал и методы

Проведено обследование 40 пациенток с цервикальными плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями высокой степени онкогенного риска в возрасте от 18 до 45 лет (1-я группа), средний возраст составил 30,3±0,97 года. Группу сравнения составили 30 пациенток, прооперированных по поводу гинекологической патологии, не связанной с отклонениями от нормы в шейке матки и онкологическими заболеваниями органов репродуктивной системы. Всем пациенткам после получения их информированного согласия на забор материала выполнено гистологическое исследование биоптата шейки матки с проведением иммуногистохимической реакции, включающей оценку доли клеток, экспрессирующих рецепторы CD56, CD3, CD20, CD138 и M-CSF в цервикальном эпителии. Оценка полученных результатов осуществлялась по степени флюоресценции и количеству образованных комплексов антиген—антитело в процентном эквиваленте. Подсчет количества позитивных клеток проводили с использованием микроскопа Axio Zeiss ZEN Blue при увеличении 400 не менее чем в 10 полях зрения. Полученные данные обработаны с использованием таблицы Microsoft Excel 2010 и стандартных пакетов программ (SPSS 23.0, Statistica for Windows 10). Количественные признаки, распределение которых не соответствовало закону нормального, оценивались с помощью непараметрического критерия — медианы, нижнего и верхнего квартилей Me [LQ; UQ]. Анализ статистической значимости различий количественных признаков, не соответствующих закону нормального распределения, выполнен с помощью критерия χ2 Пирсона с поправкой Йейтса. Статистически значимыми считали различия при p≤0,05. Для оценки взаимосвязи между показателями определяли коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Учитывали корреляционные связи признаков, которые соответствовали средней (0,7≥r≥0,5) и высокой (r≥0,7) степеням при уровне статистической значимости p≤0,05.

Результаты и обсуждение

Исследование ряда показателей локального иммунного микроокружения посредством иммуногистохимической реакции биопсийного материала патологически измененных тканей шейки матки у пациенток с ВПЧ-ассоциированными цервикальными плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями высокой степени онкогенного риска продемонстрировало значимые изменения по сравнению с аналогичными показателями у пациенток группы сравнения (см. таблицу).

Таблица. Результаты иммуногистохимического исследования экспрессии рецепторов в цервикальном эпителии у обследованных пациенток, Me [LQ; UQ]

Показатель

1-я группа пациентки с HSIL (n=40)

2-я группа сравнения (NILM) (n=30)

p

CD56, %

1 [0,4; 3]

1,75 [0,5; 4]

p1—2>0,05

CD20, %

1,5 [1; 4]

0,1 [0; 0,2]

p1—2=0,00

CD3, %

45 [29; 80]

16 [10; 21]

p1—2=0,00

CD138, %

в клетках эпителия

100 [100; 100]

100 [100; 100]

p1—2>0,05

в клетках стромы

12 [5; 19,5]

5 [1; 7,5]

p1—2=0,002

M-CSF, баллы

в клетках эпителия

8 [4; 8]

8,5 [6; 9]

p1—2=0,017

в клетках стромы

6 [4; 8]

9 [6; 9]

p1—2>0,05

Оценка количества клеток, экспрессирующих CD3 как основного маркера T-лимфоцитов, продемонстрировала статистически значимое превышение его уровня в цервикальном эпителии у пациенток с ВПЧ-ассоциированными HSIL по сравнению с аналогичным показателем 2-й группы (χ2=70,5; p=0,00), что отражает готовность клеточного иммунитета к формированию соответствующего иммунологического ответа при достаточной активности моноцитарно-макрофагального звена, презентирующего антиген Т-лимфоцитам.

Анализ экспрессии рецепторов CD56 — одного из главных маркеров натуральных киллеров (NK-клеток), способных уничтожать клетки, пораженные патологическим агентом, без предварительной иммунизации, относительно их цитотоксической активности достоверных различий показателей между обследуемыми группами не выявил (p>0,05). В то же время, по данным литературы, при эпизодах вирусных инфекций доказана их недостаточность [20].

Оценка эффективности работы B-клеточного звена иммунитета осуществлялась по уровню экспрессии рецепторов CD20 и CD138 (плазматических клеток). Анализ полученных результатов показал наибольшее количество клеток, экспрессирующих маркер CD20 у пациенток с ВПЧ-ассоциированными HSIL, что являлось значимым относительно группы сравнения (χ2=37,0; p=0,00) и свидетельствовало о значительной активации этого звена иммунитета при развитии неопластического процесса. Уровень экспрессии рецепторов CD138 в клетках эпителия не выявил значимых различий между группами обследованных женщин (p>0,05). Однако этот маркер в клетках стромы имел статистически значимые различия у больных 1-й группы по сравнению со 2-й (χ2=62,7; p=0,002). Высокий уровень поверхностных антигенов (CD20), безусловно, свидетельствует о затяжном течении воспалительного процесса, что еще раз подтверждает связь ВПЧ-ассоциированных HSIL с повышением частоты развития хронического цервицита. При этом избыточное количество высокоспецифичного маркера плазматических клеток (CD138) в клетках стромы, нехарактерное для здоровой соединительной ткани, служит достоверным признаком аутоиммунного ответа, так как доказано преобладание среди аутоантител иммуноглобулинов классов M и G при аутоиммунных воспалительных процессах различной локализации [21—23]. В этом отношении интересной и показательной является работа, выполненная Я.И. Сигидиным [цит. по 24], который продемонстрировал увеличение уровня плазматических клеток у пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани (ревматизм, системная красная волчанка и др.), что подтверждает специфичность этого маркера относительно выявления пациенток с аутоантигенным воздействием лимфоидной ткани в свете современных пониманий аллергического патогенеза таких заболеваний. Относительно CD138 также проведены исследования в области заболеваний урогенитального тракта, касающихся эндометриальной патологии с бесплодием и невынашиванием беременности. Повышенная экспрессия данного мононуклеара в строме эндометрия регистрировалась только у женщин с репродуктивными потерями, что свидетельствует о высокой активности иммунологических процессов на локальном уровне [25].

В связи тем, что именно через антигенпрезентирующие клетки происходит оптимизация работы клеточного звена приобретенного иммунитета, был выполнен анализ колониестимулирующего фактора макрофагов (M-CSF). Обращала внимание достоверно более низкая инфильтрация клеток цервикального эпителия M-CSF у пациенток с ВПЧ-ассоциированными цервикальными интраэпителиальными неоплазиями высокой степени онкогенного риска относительно этого показателя 2-й группы (χ2=72,6; p=0,017). В клетках стромы у больных данной когорты статистически значимые различия в сравнении со здоровыми женщинами отсутствовали (p>0,05). Выявленные изменения данного показателя в сторону снижения активности при HSIL в клетках эпителия указывают на недостаточность дифференцировки клеток-предшественников в мононуклеарные фагоциты, сниженную способность к презентации антигена Т-лимфоцитам и могут свидетельствовать об иммунодефицитном состоянии, являясь маркером неблагоприятного исхода. Следует отметить, что в научной литературе исследований по этому показателю при изучаемой патологии не описано.

При изучении параллелей между степенью поражения и исследуемыми показателями выявлены определенные корреляции. Так, у пациенток с ВПЧ-ассоциированными цервикальными плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями высокой степени онкогенного риска найдены средние отрицательные корреляции с экспрессией рецепторов CD3 и CD20 (r= –0,64, p=0,00 для CD3 и для r= –0,62, p=0,00 CD20). Эти параллели демонстрируют значительное влияние иммунного микроокружения на развитие папилломавирусиндуцированной цервикальной неоплазии.

Таким образом, выявленные особенности локального иммунного микроокружения свидетельствуют о значительных изменениях как клеточного, так и гуморального иммунного ответа в клетках эпителия шейки матки при цервикальных плоскоклеточных интраэпителиальных поражениях высокой степени онкогенного риска в ответ на внедрение ВПЧ и могут быть маркерами прогноза развития заболевания.

Заключение

При ВПЧ-ассоциированных цервикальных плоскоклеточных интраэпителиальных поражениях высокой степени онкогенного риска отмечается повышение экспрессии рецепторов В- и Т-лимфоцитов, что демонстрирует активацию иммунного ответа при инфицировании вирусом папилломы человека.

Особенностью локального иммунного микроокружения при ВПЧ-ассоциированных HSIL является повышение экспрессии рецепторов плазматических клеток (CD138) в строме, что может быть признаком аутоиммунного ответа на местном уровне. Однако снижение инфильтрации M-CSF в клетках эпителия может свидетельствовать о подавлении вирусом папилломы человека макрофагально-фагоцитарного звена и неблагоприятном прогнозе развития заболевания.

Таким образом, выявленные корреляции между ВПЧ-ассоциированными цервикальными плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями и локальными иммунными дисфункциями свидетельствуют о влиянии иммунного микроокружения на развитие HSIL и определяют необходимость дальнейшего более детального изучения данного вопроса с целью улучшения исходов лечения.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Г.Н. Чистякова

Сбор и обработка материала — Н.А. Шмакова, А.А. Гришкина

Статистическая обработка — Н.А. Шмакова, И.И. Ремизова

Написание текста — Н.А. Шмакова

Редактирование — Г.Н. Чистякова, И.И. Ремизова

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.