Эпителиальные опухоли вилочковой железы (тимомы, нейроэндокринные опухоли, рак) относятся к редким опухолям, однако они составляют около 50% всех новообразований переднего средостения. В настоящее время морфологическая диагностика эпителиальных опухолей тимуса осуществляется в соответствии с Международной классификацией ВОЗ [1]. Тимомы характеризуются выраженной вариабельностью клеточного состава и могут иметь сходную микроскопическую картину с другими медиастинальными новообразованиями. В зависимости от типа (А, АВ, В1, В2, В3) тимомы необходимо дифференцировать с лимфомами, нейроэндокринными, герминогенными, мезенхимальными, а также метастатическими опухолями [2—5]. Критерии цитологической диагностики тимом и возможности дополнительных методов исследования в уточнении диагноза мало изучены [3—5]. В отечественной литературе нет публикаций по использованию иммуноцитохимического (ИЦХ) метода в диагностике опухолей вилочковой железы. В зарубежных исследованиях по цитологической диагностике тимом иммунофенотипические характеристики представлены в основном на гистологических препаратах [2, 6].

Цель исследования — изучить цитологические и иммунофенотипические признаки эпителиальных опухолей вилочковой железы и определить оптимальный набор антител для ИЦХ-диагностики тимом.

Выполнены 226 ИЦХ-исследований 43 новообразований средостения. Из них: тимомы — 18 (тип, А — 2, тип АВ — 5, тип В1 — 4, тип В2 — 3, тип В3 — 4), рак вилочковой железы — 2, нейроэндокринные опухоли — 2, лимфомы — 8, солитарная фиброзная опухоль — 2, метастатические опухоли — 11 (аденокарцинома легкого — 3, мелкоклеточный рак легкого — 3, карциноид легкого — 2, рак щитовидной железы — 2, рак молочной железы — 1). Во всех наблюдениях диагноз был подтвержден гистологическим и иммуногистохимческими (ИГХ) исследованиями.

Материал, полученный при тонкоигольной аспирационной биопсии или операционном исследовании, помещали в микропробирку со специальной питательной средой. Препараты готовили с помощью цитоцентрифуги Cytospin-3 («Shandon», Англия) в режиме 1000 об/5 мин. Контроль качества проводили окрашиванием двух препаратов рутинным методом по Паппенгейму. При наличии в мазках достаточного материала (200—300 клеток) выполняли ИЦХ-исследование на неокрашенных препаратах. Выбор антител для ИЦХ-исследования проводили с учетом ИГХ-исследований и рекомендаций ВОЗ для диагностики и дифференциальной диагностики тимом [1]. ИЦХ-исследования проводили на иммуностейнере BenchMark ULTRA. В работе использовали кроличьи и мышиные антитела Cell Marque: CD1a (клон EP3622, 1:25—1:100), CD3 (клон MRQ-39, 1:100—1:500), CD5 (клон 4С7, 1:10—1:50), CD8 (клон SP16, 1:100—1:500), TdT (клон EP266, 1:50—1:200), CD20 (клон L26, 1:100—1:500), CD34 (клон QBEnd/10, 1:50—1:200), CD117 (клон YR145, 1:100—1:500), СК5/6 (клон D5&16B4, 1:50—1:200), CK7 (клон OV-TL12/30, 1:100—1:500), CK19 (клон A53-B/A2.26, 1:100–1:500), Cytokeratin cocktail AE1&AE3 (клон AE1/AE3, 1:25—1:50), Synaptophysin (клон MRQ-40, 1:100 -1:500), Chromogranin, А (клон LK2H10, 1:100−1:500), TTF1 (клон 8G7G3/1, 1:100–1:500), Thyroglobulin (клон 2H11+6E1, 1:100–1:500); Calcitonin (клон SP17, 1:100—1:500); Dako: CD4 (клон 4В12, готовый), CD8 (клон С8/144 В, готовый), p63 (клон DAK-p63, 1:50), Estrogen receptor α (клон 1D5, 1:35); Spring: CD99 (клон M4194, 1:200).

Цитологическая картина тимомы типа, А представлена преимущественно веретенообразными опухолевыми клетками, располагающимися в плотных скоплениях, разнонаправленных структурах, пучках (рис. 1).

При ИЦХ-исследовании тимомы типа, А (2 наблюдения) в веретенообразных опухолевых клетках наблюдалась позитивная реакция с цитокератинами AE1/AE3, CD20. Согласно данным литературы, экспрессия CD20 в эпителиальных клетках — частый и полезный признак для морфологической идентификации эпителиального компонента тимом типов, А и АВ [1, 6].

Цитограмма тимомы типа A имеет сходные микроскопические признаки с веретеноклеточной нейроэндокринной опухолью, мезенхимальными новообразованиями. При дифференциальной диагностике веретеноклеточной нейроэндокринной опухоли с тимомой типа A наряду с выявлением характерных микроскопических признаков (крупнозернистый хроматин ядер, розеткоподобные структуры) существенную помощь оказывает ИЦХ-исследование с нейроэндокринными маркерами. В клетках нейроэндокринной опухоли средостения (2 наблюдения) определялась диффузная экспрессия синаптофизина, хромогранина A. Тимому типа, А трудно дифференцировать с солитарной фиброзной опухолью, которая также состоит преимущественно из веретенообразных и вытянутых клеток. Характерным микроскопическим признаком солитарной фиброзной опухоли является наличие ангиоперицитомоподобных структур и ветвящихся капилляров, которые в трудных диагностических случаях позволяет выявить ИЦХ-исследование. Клетки эндотелия сосудистых структур экспрессируют CD34.

В цитограммах тимомы типа АВ хорошо выражен эпителиальный и лимфоцитарный компоненты. Опухолевые веретенообразные клетки располагаются в виде плотных скоплений и изолированных клеток. Цитоморфологические признаки эпителиальных клеток сходны с клетками тимомы типа А. Основным отличием является наличие большого числа лимфоцитов, которые составляют фон препарата, а также присутствуют в структурах опухолевых клеток. При ИЦХ-исследовании тимом типа АВ (5 наблюдений) в веретенообразных опухолевых клетках определялась позитивная реакция с CD20, СК19, АЕ1/АЕ3 (рис. 2).

Цитологическая картина тимомы типа В1 представлена, как правило, лимфоцитами разной степени зрелости. Эпителиальные клетки единичные, небольших размеров, с округлыми ядрами. При микроскопическом исследовании их довольно трудно обнаружить в обильном лимфоцитарном инфильтрате. При ИЦХ-исследованиях тимом типа В1 (4 наблюдения) определялись единичные эпителиальные клетки, экспрессирующие CK19, p63. В лимфоцитах наблюдался характерный иммунофенотип тимических Т-лимфоцитов: экспрессия CD3, CD99, CD1a, ТdT, CD4, CD8. Отмечались только единичные CD20+ В-лимфоциты.

Цитологическая картина тимомы типа В2 характеризуется наличием эпителиальных клеток полигональной формы, располагающихся в небольших группах. Ядра крупных и средних размеров, в большинстве которых видны центрально расположенные ядрышки. Лимфоцитов много, присутствуют зрелые и незрелые формы. При ИЦХ-исследовании тимомы типа B2 (3 наблюдения) определялась экспрессия в эпителиальных клетках СК19, р63. В препаратах выявлялось значительно больше кератинопозитивных клеток, чем при тимоме типа B1. Лимфоциты экспрессировали CD3, TdT.

В цитограмме тимомы типа В3 преобладает эпителиальный компонент. Клетки полигональной формы с крупными ядрами и выраженными центральными ядрышками (рис. 3).

Тимому типа В3 с атипией клеток трудно дифференцировать с плоскоклеточной карциномой тимуса. Рак вилочковой железы встречается крайне редко. В наших наблюдениях были 6 пациентов с карциномой тимуса (у 5 — плоскоклеточный рак, у 1 — аденокарцинома). Цитограммы плоскоклеточной карциномы представлены опухолевыми клетками с выраженными признаками атипии, располагающимися в бесструктурных скоплениях и разрозненно. ИЦХ-исследование проведено в двух наблюдениях плоскоклеточного рака вилочковой железы. Как и в тимомах, опухолевые клетки экспрессировали CK19, CK5/6, р63. В обоих случаях определялась экспрессия CD5 и CD117 (рис. 5, 6).

Цитологические признаки метастатических опухолей тимуса такие же, как и в других органах. Дифференцировать рак, нейроэндокринные опухоли вилочковой железы и медиастинальные метастазы по цитоморфологическим признакам затруднительно. С учетом анамнеза, клинических и ИЦХ-данных удалось уточнить диагноз некоторых метастатических опухолей: мелкоклеточного рака легкого (3), карциноида легкого (2), аденокарциномы легкого (3), рака щитовидной железы (2), рака молочной железы (1). В клетках метастатического карциноида и аденокарциномы легкого определялась экспрессия ТТF1, при папиллярном раке щитовидной железы — экспрессия тироглобулина, при раке молочной железы — позитивная реакция с рецепторами эстрогенов.

На сегодняшний день цитологическая диагностика опухолей вилочковой железы в большей степени зависит от опыта цитолога. В уточнении диагноза тимомы для идентификации эпителиального и лимфоцитарного компонентов рекомендуется проводить иммуноцитохимические исследования с использованием следующих антител: CD20, АЕ1/АЕ3 (для диагностики эпителиального компонента тимом типов, А и АВ), CK19, АЕ1/АЕ3, р63, CD5, CD117 (для диагностики эпителиального компонента тимом типов В), CD3, TdT, CD20 (для исследования лимфоцитарного компонента всех типов тимом). Использование иммуноцитохимического метода позволит более эффективно проводить цитологическую диагностику опухолей вилочковой железы.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Г. Р.Б., М.В.С.

Сбор и обработка материала — Г. Р.Б.

Статистическая обработка — Г. Р.Б.

Написание текста — Г. Р.Б.

Редактирование — Г. Р.Б., М.В.С.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

The authors declare no conflict of interest.

Сведения об авторах

Бутенко Г.Р. — https://orcid.org/0000-0002-0095-4248, e-mail: grbutenko@gmail.com

Савостикова М.В. — https://orcid.org/0000-0002-4643-04

Автор, ответственный за переписку: Бутенко Галина Романовна — e-mail: grbutenko@gmail.com

Бутенко Г.Р., Савостикова М.В. Цитологическая и иммуноцитохимическая диагностика эпителиальных опухолей вилочковой железы. Онкология. Журнал им. П.А. Герцена. 2019;8(6):419-421. https://doi.org/10.17116/onkolog20198061419