Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Валеев В.В.

ФГБУН «Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова» РАН, Санкт-Петербург, Россия

Трашков А.П.

Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет, Санкт-Петербург

Коваленко А.Л.

Дирекция по науке ООО "НТФФ "Полисан", Санкт-Петербург

Петров А.Ю.

ФГБУН «Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова» РАН, Санкт-Петербург, Россия

Васильев А.Г.

Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет, Санкт-Петербург

Профилактика и коррекция антрациклиновой ангиопатии в эксперименте

Авторы:

Валеев В.В., Трашков А.П., Коваленко А.Л., Петров А.Ю., Васильев А.Г.

Подробнее об авторах

Просмотров: 880

Загрузок: 9


Как цитировать:

Валеев В.В., Трашков А.П., Коваленко А.Л., Петров А.Ю., Васильев А.Г. Профилактика и коррекция антрациклиновой ангиопатии в эксперименте. Онкология. Журнал им. П.А. Герцена. 2016;5(6):31‑34.
Valeev VV, Trashkov AP, Kovalenko AL, Petrov AYu, Vasiliev AG. Prevention and correction of anthracycline-induced angiopathy: an experimental study. P.A. Herzen Journal of Oncology. 2016;5(6):31‑34. (In Russ.)
https://doi.org/10.17116/onkolog20165631-34

Рекомендуем статьи по данной теме:
Вли­яние прог­рам­мы кар­ди­орес­пи­ра­тор­ных тре­ни­ро­вок на уро­вень мо­ле­кул меж­кле­точ­ной ад­ге­зии у па­ци­ен­ток с пос­тмас­тэк­то­ми­чес­ким син­дро­мом. Воп­ро­сы ку­рор­то­ло­гии, фи­зи­оте­ра­пии и ле­чеб­ной фи­зи­чес­кой куль­ту­ры. 2024;(4):45-51
Роль би­омар­ке­ров эн­до­те­ли­аль­ной дис­фун­кции в прог­но­зи­ро­ва­нии прог­рес­си­ро­ва­ния уме­рен­ных ког­ни­тив­ных на­ру­ше­ний у па­ци­ен­тов с фак­то­ра­ми сер­деч­но-со­су­дис­то­го рис­ка. Жур­нал нев­ро­ло­гии и пси­хи­ат­рии им. С.С. Кор­са­ко­ва. 2024;(9):88-95
Воз­мож­нос­ти при­ме­не­ния этил­ме­тил­гид­рок­си­пи­ри­ди­на сук­ци­на­та в ком­плексной те­ра­пии ар­те­ри­аль­ной ги­пер­тен­зии. Кар­ди­оло­гия и сер­деч­но-со­су­дис­тая хи­рур­гия. 2024;(5):572-580
Мор­фо­фун­кци­ональ­ные и би­охи­ми­чес­кие де­тер­ми­нан­ты эн­до­те­ли­аль­ной дис­фун­кции пос­ле но­вой ко­ро­на­ви­рус­ной ин­фек­ции COVID-19. Про­фи­лак­ти­чес­кая ме­ди­ци­на. 2024;(10):90-96
Из­ме­не­ния ли­пид­но­го про­фи­ля, струк­тур­но-фун­кци­ональ­но­го сос­то­яния со­су­дов у па­ци­ен­тов с лим­фо­ма­ми и сер­деч­но-со­су­дис­ты­ми ток­си­чес­ки­ми рис­ка­ми при про­ве­де­нии хи­ми­оте­ра­пии. Про­фи­лак­ти­чес­кая ме­ди­ци­на. 2024;(10):117-124
Осо­бен­нос­ти ско­рос­тных ха­рак­те­рис­тик ар­те­ри­аль­но­го кро­во­то­ка при эн­до­те­ли­аль­ной дис­фун­кции. Про­фи­лак­ти­чес­кая ме­ди­ци­на. 2024;(12):100-106
Бли­жай­шие ре­зуль­та­ты при­ме­не­ния пре­па­ра­та Сла­ви­норм у па­ци­ен­тов с ате­рос­кле­ро­ти­чес­ки­ми за­бо­ле­ва­ни­ями ар­те­рий ниж­них ко­неч­нос­тей. Кар­ди­оло­гия и сер­деч­но-со­су­дис­тая хи­рур­гия. 2025;(1):102-108

Несмотря на значительные достижения в области молекулярной онкологии, биохимии и патофизиологии опухолевых клеток и исследований механизмов взаимодействия опухоли с окружающими тканями, наблюдаемые в последнее десятилетие, существенного прорыва в создании высокоселективных, таргетных молекул, способных полностью вытеснить из обращения системные цитостатические лекарственные препараты, не произошло. Удельный вес таргетных препаратов в структуре противоопухолевой терапии остается невысоким, что объясняется не только их высокой стоимостью, но и слабой корреляцией между впечатляющими результатами, достигнутыми на экспериментальном этапе изучения, и наблюдениями в клинической практике [1—3]. Таким образом, использование в лечении новообразований классических системных противоопухолевых средств и проблема их углубленного клинического изучения остаются актуальными в настоящее время.

Основными направлениями развития химиотерапии являются увеличение избирательности ее действия на злокачественные клетки и ассоциированные с ними элементы стромы опухоли и минимизация системного воздействия используемых препаратов на различные органы и ткани, напрямую не вовлеченные в патологический процесс. При этом различные осложнения лекарственной терапии опухолей остаются весьма распространенным явлением в клинической практике, накладывают серьезные ограничения на тактику лечения пациентов и ухудшают прогноз заболевания.

Наиболее остро эти вопросы стоят в отношении применения доксорубицина — представителя группы антрациклиновых антибиотиков, высокая эффективность которого в отношении широкого спектра опухолей подтверждена в ходе многочисленных экспериментальных и клинических исследований [4, 5]. Критическим моментом для назначения доксорубицина является его выраженная токсичность в отношении сердечно-сосудистой системы. Доксорубицининдуцированная кардиотоксичность является одной из наиболее частых причин отмены препарата, увеличения длительности интервала времени до его последующего введения или снижения эффективной дозы. Это приводит к изменению схемы терапии и ухудшению прогноза лечения. В качестве средств фармакологической кардиопротекции широко используют арсенал антигипертензивных и кардиотонических препаратов (ингибиторы АПФ, бета-блокаторы), заимствованных из кардиологической практики [6, 7]. Однако их лекарственное взаимодействие с цитостатическими препаратами изучено слабо и эффективность применения недостаточна. При этом практически незамеченной остается проблема ангиопротекции и, в частности, медикаментозной коррекции эндотелиальной дисфункции, являющейся триггером поражения системы кровообращения антрациклиновыми антибиотиками [8—10].

Вышеизложенное делает актуальной проблему поиска и апробации новых фармакологических средств, обеспечивающих не только защиту миокарда при проведении химиотерапии с использованием доксорубицина, но и общее ангиопротективное действие.

Целью настоящего исследования являлось изучение применения нового комбинированного инфузионного раствора натрия-L-аргинина сукцината (торговое название — «Унифузол», ООО «НТФФ «ПОЛИСАН», Россия) для профилактики и лечения ангиотоксического действия доксорубицина в остром эксперименте in vivo.

Материал и методы

Эксперимент выполнен на 102 самцах-альбиносах серых крыс массой тела на момент включения в исследование 200—220 г., разведения ФГУП ПЛЖ «Рапполово» (Ленинградская область). Содержание, питание и контроль состояния животных, все виды манипуляций и эвтаназию проводили в соответствии с нормами биоэтики и законодательства Российской Федерации, регламентирующими работы с использованием лабораторных животных.

Методом случайных чисел животные были разделены на группы:

— контроль (n=12) — интактные животные без признаков инфекционной и/или соматической патологии для анализа нормальных показателей;

— доксорубицин (n=45) — животные, которым вводили однократно внутрибрюшинно препарат Доксорубицин Эбеве («EBEWE Pharma Ges. mbH Nfg. KG», Австрия) в дозе 12,6 мг/кг (LD50 для крыс по данным фирмы-производителя);

— унифузол (n=45) — животные, которым вводили однократно внутрибрюшинно доксорубицин и затем в течение 10 сут проводили лечение препаратом унифузол в объеме 2,5 мл внутривенно один раз в сутки.

Взятие крови для анализа проводили на 3-и, 10-е и 28-е сутки после введения доксорубицина путем транскутанной пункции сердца животного в условиях общего обезболивания (инъекционный золетиловый наркоз, 0,7 мл/кг массы тела, внутрибрюшинно) с помощью вакуумной системы Monovette («SARSTEDT», Германия) с антикоагулянтом (К3-ЭДТА) в объеме 6 мл. Обработку материала осуществляли сразу после взятия. Для отделения от плазмы крови эритроцитов и лейкоцитов проводили ее центрифугирование с ускорением 240 g в течение 7 мин и последующим перенесением плазмы в другую пластиковую пробирку. Повторным центрифугированием с ускорением 1200 g в течение 15 мин получали плазму крови полностью свободную от форменных элементов. Полученный материал исследовали либо немедленно, либо замораживали при –20 °С для последующего иммуноферментного анализа на срок, не превышающий 6 мес.

Выраженность ангиотоксического действия доксорубицина и эффективность проводимого лечения оценивали по динамике маркеров эндотелиальной дисфункции и балансу про- и антивоспалительных цитокинов. Анализ сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF), тканевого активатора плазминогена (tPA), ингибитора активатора плазминогена 1-го типа (PAI-1), оксида азота II (NO), эндотелина-1 (ЭТ-1), концентрацию интерлейкинов 1β и 10 (IL-1β и IL-10) и фактора некроза опухолей-альфа (TNF-α) определяли методом иммуноферментного анализа при помощи наборов реактивов компаний «Cusabio» (Китай) и «Technoclone» (Австрия) в соответствии с инструкцией фирм-производителей. Кроме того, методом световой микроскопии определяли содержание в крови десквамированных эндотелиоцитов по методике Н. Sinzinger [11].

Статистическую обработку проводили при помощи программы SPSS. Данные приведены в виде M±SE (средняя арифметическая ± ошибка средней арифметической). Проверка характера распределения данных проводилась путем расчета критерия Колмогорова—Смирнова. Сравнение средних данных независимых выборок осуществляли при помощи t-критерия Стьюдента (при нормальном характере распределения вариант в выборочной совокупности) и U-критерия Манна—Уитни (при распределении вариант в выборочной совокупности, отличном от нормального). Установление корреляций между показателями различных групп проводили по критерию Спирмена. Достоверным уровнем различий принимали вероятность не менее 95% (р<0,05), что является стандартом в медико-биологических исследованиях.

Результаты и обсуждение

Введение подопытным животным доксорубицина приводило к значительным нарушениям сердечно-сосудистой, гепатобилиарной, дыхательной и мочевыделительной систем, наиболее выраженным в остром периоде — первые 72 ч от момента введения препарата. Полиорганная дисфункция, развившаяся вследствие введения доксорубицина, привела к гибели более 50% животных, не получивших лечение (табл. 1). Применение унифузола оказало выраженный терапевтический эффект, что выражалось в статистически значимом снижении показателя общей летальности крыс в 2,2 раза (p<0,05) по сравнению с группой животных, не получивших фармакологической поддержки (27 и 58% соответственно). При этом достоверное снижение показателя летальности в группе унифузол по сравнению с группой доксорубицин отмечалось прежде всего в отсроченном периоде эксперимента (с 11-х по 28-е сутки), когда гибель животных была обусловлена прежде всего антрациклиновой кардиомиопатией, а не острой интоксикацией (см. рисунок).

Таблица 1. Влияние препарата Унифузол (раствор для инфузий) на общую летальность подопытных крыс с острой интоксикацией доксорубицином Примечание. * — различия с показателями группы доксорубицин достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05).

Влияние препарата Унифузол (раствор для инфузий) на летальность подопытных крыс с острой интоксикацией доксорубицином в различные периоды течения заболевания. * — различия с показателями группы доксорубицин достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05).

Интоксикация доксорубицином сопровождалась лабораторными признаками воспаления в организме подопытных животных: начиная с 3-х суток и на протяжении всего периода эксперимента регистрировалось достоверное повышение уровней провоспалительных цитокинов (TNF-α и IL-1β) в крови животных обеих экспериментальных групп, наиболее выраженное в группе, не получившей фармакологической поддержки унифузолом (табл. 2). При этом в группе доксорубицин повышение концентрации в крови провоспалительных белков сопровождалось снижением противовоспалительного цитокина IL-10 на 3-и и 10-е сутки, в то время как в группе унифузол уровень IL-10 сохранялся на уровне контрольных значений (3-и сутки), а в последующем увеличивался (10-е сутки). К 28-му дню наблюдений IL-10 в обеих экспериментальных группах не имел достоверных различий с показателями интактных крыс.

Таблица 2. Влияние препарата Унифузол (раствор для инфузий) на цитокиновый баланс в крови у подопытных крыс с острой интоксикацией доксорубицином (M±SE) Примечание. Здесь и в табл. 3: * — различия с показателями группы контроль достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05); 1 — различия с показателями группы доксорубицин достоверны на принятом уровне значимости (p<0,05).

Патогенез доксорубицининдуцированной ангиотоксичности включал в себя структурно-функциональные нарушения эндотелия (табл. 3), приводящие к развитию синдрома «эндотелиальной дисфункции» — изменению баланса между его вазоконстрикторным и вазодилатирующим, про- и антигемостатическим потенциалами. Это проявлялось в угнетении продукции VEGF — естественного митогена и стимулятора метаболизма эндотелиоцитов и tPA — важнейшего компонента эндоваскулярного пристеночного фибринолиза и маркера нормальной активности эндотелиоцитов. Одновременно отмечалось уменьшение продукции монооксида азота (NO) с одновременным увеличением синтеза и секреции вазоконстрикторных соединений (эндотелин-1) и провоспалительных цитокинов (IL-1β, TNF-α) (см. табл. 2, 3).

Таблица 3. Влияние препарата Унифузол (раствор для инфузий) на функциональное состояние эндотелия кровеносных сосудов у подопытных крыс с острой интоксикацией доксорубицином (M±SE)

Отрицательная динамика сывороточных маркеров эндотелиальной дисфункции подтверждалась данными морфологического анализа, указывающими на активацию клеточной гибели эндотелиоцитов [(лавинообразное увеличение количества десквамированных клеток (ЦЭЦ)] в крови — свидетельство прямого токсического воздействия доксорубицина на эндотелий сосудов (см. табл. 3).

Проводимая 10-дневная терапия унифузолом приводила к выраженной, статистически достоверной нормализации практически всех изучаемых в рамках данного исследования показателей структурно-функционального состояния эндотелиоцитов подопытных животных (см. табл. 3).

Прежде всего наблюдалось выраженное увеличение продукции NO в крови животных с антрациклиновой ангиопатией, получавших унифузол, на уровне тенденции уже на 3-и сутки исследования (в 2,1 раза по сравнению с группой нелеченных животных, p>0,05) и достоверно на 10-е сутки — время окончания терапии (в 4,5 раза по сравнению с группой нелеченных животных, p<0,01), обратно коррелирующее с продукцией вазоконстрикторного соединения — эндотелина-1 (r=0,67, p<0,05; см. табл. 3). Уровень эндотелина-1 у животных с доксорубицининдуцированной ангиопатией на фоне лечения унифузолом снизился на 20% (3-и сутки эксперимента) и на 40% (10-е сутки эксперимента, p<0,05), что свидетельствует о значительном эндотелиопротективном эффекте исследуемого препарата.

Применение унифузола также способствовало увеличению продукции VEGF, tPA и IL-10 с одновременным ингибированием синтеза и провоспалительных цитокинов, что свидетельствует о нормализации функциональной активности эндотелиоцитов и нарастании их репаративного потенциала (см. табл. 2, 3).

Унифузол эффективно предотвращал доксорубицининдуцированную клеточную гибель эндотелиоцитов (уменьшение уровня ЦЭЦ в крови крыс, достоверно отличающееся от показателей животных группы доксорубицин с 10-го дня эксперимента в 2,7 раза, p<0,001) (см. табл. 3).

1. Применение раствора натрия-L-аргинина сукцината (унифузол) уменьшает токсическое действие доксорубицина на эндотелий сосудов, уменьшая продукцию вазоконстрикторных соединений и увеличивая синтез регионарных вазодилататоров и фибринолитиков.

2. Выраженное эндотелиопротективное действие исследуемого препарата является патогенетическим обоснованием для дальнейшего изучения унифузола в качестве комплексного средства для кардио- и ангиопротекции при патологии сердечно-сосудистой системы различной этиологии.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования: В.В.В., А.П.Т., А.Л.К., А.Ю.П., А.Г.В.

Сбор и обработка материала: В.В.В., А.П.Т., А.Г.В.

Статистическая обработка: А.П.Т.

Написание текста: В.В.В., А.П.Т.

Редактирование: А.Л.К.

Конфликт интересов отсутствует.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо со ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail

Мы используем файлы cооkies для улучшения работы сайта. Оставаясь на нашем сайте, вы соглашаетесь с условиями использования файлов cооkies. Чтобы ознакомиться с нашими Положениями о конфиденциальности и об использовании файлов cookie, нажмите здесь.