Контроль качества HLA-типирования в лабораториях России

Контроль качества является важным аспектом любого лабораторного исследования, в том числе при определении генов главного комплекса гистосовместимости или системы HLA (Human antigen leucocyte, антигены лейкоцитов человека). Ошибки в определении HLA-фенотипа (типировании генов HLA) могут повлечь за собой весьма значимые клинические последствия. Применение результатов HLA-типирования для определения гистосовместимых пар при проведении пересадки органов и тканей свидетельствует о критической значимости этого метода в трансплантологии. Контроль качества в HLA-типировании — это вопрос не только исследовательской достоверности, но и сохранения жизни пациентов. Применение неверных результатов HLA-типирования в качестве дополнительных дифференциально-диагностических критериев аутоиммунных заболеваний может привести к неправильной диагностике и последующей неадекватной терапии, что угрожает жизни пациентов. Поэтому соблюдение строгих стандартов качества на всех этапах HLA-типирования — от преаналитического до постаналитического — имеет чрезвычайно важное значение. Контроль качества HLA-типирования — это комплекс мер, направленных на обеспечение достоверности и сопоставимости, включающий внутренний и внешний контроль. Внутренний контроль подразумевает работу лаборатории в соответствии со стандартными операционными процедурами, систематическую проверку работы оборудования лаборатории, валидацию всех вновь поступающих реагентов, а также систематическое повышение квалификации персонала. Внешний контроль — это оценка работы лаборатории сторонней организацией. Он включает в себя участие в программах межлабораторных испытаний, где лаборатории анализируют одни и те же образцы, а результаты сравниваются. В связи с тем, что в России не разработана программа таких испытаний по HLA-типированию, некоторые лаборатории Российской Федерации участвуют в выполнении заданий внешнего международного контроля качества HLA-типирования, проводимого Европейской федерацией иммуногенетики (European federation for Immunogenetics, EFI).

Цель работы — анализ результатов внешнего контроля качества HLA-типирования в 2023 и 2024 гг. в РФ.

Внешний контроль качества HLA-типирования в 2023—2024 гг. для 45 лабораторий стран Центральной и Восточной Европы традиционно был организован Медицинским университетом г. Вены (Австрия), являющимся провайдером этих испытаний от Европейской федерации иммуногенетики. Как и в предыдущие годы, активное участие в нем принимали лаборатории нашей страны. Свыше 33,3% от общего количества участников были лаборатории из России: 15 из 46 в 2023 г. и 15 из 45 в 2024 г.

Минимальным уровнем выполнения заданий внешнего контроля качества HLA-типирования является определение групп аллелей генов HLA-A, B, DRB1 10 образцов ДНК, выделенных из ядросодержащих клеток периферической крови здоровых доноров, предоставляемых участникам организатором испытаний. Определение дополнительных генов (HLA-C, DPB1, DPA1, DQA1, DRB3/4/5) выполняется лабораторией по желанию. Методы, используемые для выполнения заданий внешнего контроля, и уровни разрешения HLA-типирования были описаны нами ранее [1], и они не изменились.

Как и в предыдущие годы (2017—2022 гг.), большая часть лабораторий нашей страны представила результаты HLA-типирования на уровне высокого или аллельного разрешения: 10 (66,7%) из 15 в 2023 г. и 12 (80%) из 15 в 2024 г. (это наибольший показатель с 2017 г.). Наиболее полно выполнили программу внешнего контроля качества 5 (33,3%) лабораторий в 2023 г. и 6 (40%) — в 2024 г., представив результаты как базового, так и высокоразрешающего или аллельного HLA-типирования. Результаты только высокоразрешающего или аллельного HLA-типирования продемонстрировали 5 (33,3%) лабораторий в 2023 г. и 6 (40%) — в 2024 г. О выполнении только базового разрешения отчитались 5 (33,3%) лабораторий в 2023 г. и 3 (20%) — в 2024 г. (табл. 1).

Таблица 1. Количество лабораторий РФ, выполнявших HLA-типирование контрольных образцов, в зависимости от уровня разрешения и спектра определяемых генов HLA

Следует упомянуть, что в 2024 г. организатором внешнего контроля качества предлагалось выполнить определение не только генов HLA, но и генов MICA, MICB, KIR и CCR5. Только 1 лаборатория нашей страны представила результаты определения генов KIR, остальные — не принимали участия в этих испытаниях (см. табл. 1).

Все лаборатории нашей страны как в 2023 г., так и в 2024 г. не только выполнили типирование «обязательных» генов HLA-A, B, DRB1, но и расширили свои результаты сведениями о дополнительных генах, что свидетельствует о положительной тенденции в развитии иммуногенетических исследований в нашей стране, так как в предыдущие годы несколько лабораторий выполняли типирование только генов HLA-A, B, DRB1 [1, 2]. Так, в 2023 г. 10 лабораторий определили 5 генов: HLA-A, B, C, DQB1, DRB1, имеющих наибольшее значение при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК). Однако ¹/₂ этих лабораторий выполнила типирование только на уровне низкого разрешения, что далеко не в полной мере соответствует современным требованиям, предъявляемым к иммуногенетическому обследованию донора и реципиента при аллогенной ТГСК. Безусловно, положительным фактом является то, что в 2023 г. 40% (6 из 15) и почти ¹/₂ (7 из 15) лабораторий в 2024 г. выполнили типирование шести генов, включив в исследование ген HLA-DPB1. Определение этого гена важно для выбора оптимального донора гемопоэтических стволовых клеток, так как неприемлемые несовпадения донора и реципиента по аллелям гена HLA-DPB1 коррелируют с развитием тяжелой формы острой реакции «трансплантат против хозяина» и повышением летальности у пациентов с онкогематологическими заболеваниями после аллогенной ТГСК [3, 4]. Наибольший спектр установленных генов HLA представила 1 лаборатория, включив в исследование гены HLA — DQA1, DRB3/4/5, DPA1.

В 2023 г. HLA-типирование на уровне базового разрешения всеми нашими лабораториями было выполнено безошибочно. Однако в 2024 г. двумя лабораториями было допущено по 1 ошибке при определении генов HLA-DRB1. В одном случае не выявлена вторая группа аллелей, во втором — неправильно определена одна из групп аллелей. Обращает на себя внимание отсутствие ошибок, связанных с представлением «гомозиготного» результата на уровне базового разрешения, что наблюдалось ранее [1, 2].

При выполнении высокоразрешающего/аллельного HLA-типирования не удалось избежать ошибок. В 2023 г. одной лабораторией было допущено 2 ошибки при типировании гена HLA-DPB1, типирование генов HLA класса I, было выполнено безошибочно. В 2024 г. было 4 ошибки, допущенные одной лабораторией: в 3 случаях — при типировании гена HLA-A(табл. 2), в 1 — гена HLA-DQB1(табл. 3). Все эти 4 ошибки связаны с неправильным представлением «гомозиготного результата».

Таблица 2. Количество ошибок, допущенных при выполнении типирования HLA-генов класса I в 2023—2024 гг.

Таблица 3. Количество ошибок, допущенных при выполнении типирования HLA-генов класса II в 2023—2024 гг.

Согласно критериям оценки выполнения HLA-типирования контрольных образцов, которые были представлены нами в предыдущей работе [1], в 2023 и в 2024 гг. результаты HLA-типирования на уровне базового разрешения всех участвовавших лабораторий РФ соответствовали Европейским стандартам иммуногенетики [5]. Успешным выполнение HLA-типирования на уровне высокого/аллельного разрешения признано у 14 лабораторий из 15 участвовавших в 2023 г. и у всех лабораторий в 2024 г.

Результаты проведенного анализа итогов выполнения заданий внешнего международного контроля качества в 2023—2024 гг. демонстрируют определенную положительную тенденцию — практически полное отсутствие ошибок при выполнении HLA-типирования на уровне базового разрешения, широко востребованного в нашей стране при проведении органной трансплантации, а также расширение спектра определяемых генов HLA. Наличие единичных ошибок при выполнении высокоразрешающего типирования, безусловно, требует проведения анализа причин этих ошибок и дополнительного тренинга персонала.

Развитие Федерального регистра доноров костного мозга [6], увеличение количества медицинских организаций, осуществляющих в нашей стране трансплантацию органов и (или) тканей человека [7], требует безукоризненного выполнения HLA-типирования, являющегося крайне важным инструментом в современных медицинских исследованиях [8]. Контроль качества лабораторных исследований в этой области представляет собой критическую задачу, требующую внимания и соблюдения высоких стандартов на всех этапах работы. Применение современных технологий и постоянное обучение персонала лабораторий являются основными шагами к повышению качества HLA-типирования. Обеспечение высокого уровня доверия к лабораторным исследованиям позволит предоставлять эффективное и безопасное лечение пациентам, что в конечном итоге станет залогом успешной медицинской практики.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.