Введение

Общий анализ мочи является важным диагностическим инструментом не только при заболеваниях почек и мочевыводящих путей, но и при ряде эндокринных, метаболических и наследственных заболеваний, при беременности, а также при выявлении нежелательных эффектов препаратов. Общий анализ мочи включает в себя среди прочего и оценку количества элементов осадка. Известно, что метод световой микроскопии осадка мочи плохо стандартизирован и трудоемок, а его качество во многом определяется квалификацией специалиста, проводящего исследование [2, 4, 5, 6, 11]. С появлением автоматических аналитических систем были предложены решения и для подсчета элементов осадка мочи [3, 7, 8]. Автоматизация исследования позволяет не только улучшить аналитическое качество диагностики, но и сократить время оборота теста/turnaround time (ТАТ), увеличить пропускную способность лаборатории за счет экономии времени, освободить высококвалифицированный персонал для решения других задач. При этом новые технические разработки позволяют добиться более высокой чувствительности при выявлении взвешенных частиц почечного происхождения [1].

В клинико-диагностических лабораториях для исследования осадка мочи могут одновременно использоваться и традиционная световая микроскопия, и автоматизированный подсчет элементов осадка мочи. Как правило, световая микроскопия применяется в качестве метода, уточняющего результаты автоматизированного подсчета. Параллельное использование этих двух методов требует приобретения двух видов вакуумных контейнеров (ВК): с коническим и с круглым дном. Традиционно используемые для световой микроскопии ВК имеют коническую форму дна. Это обеспечивает возможность удаления надосадочной жидкости после центрифугирования для получения необходимого объема осадка и результирующего коэффициента количества частиц [2, 4, 6, 11]. Для проведения автоматизированного подсчета элементов осадка мочи необходимы ВК с круглым дном, что отражено в последней версии европейских рекомендаций по анализу мочи, принятой в 2023 г. (EFLM European Urinalysis Guideline Update, 2023) [1]. Такая форма дна способствует сохранности лейкоцитов и цилиндров при ресуспендировании компонентов осадка. Поскольку количество элементов осадка напрямую зависит от объема/плотности осадка, то важным фактором обеспечения качества микроскопического исследования мочи является стандартизация сбора пробы и проведения исследования. Различные анализаторы перемешивают пробу по-разному (потоком воздуха или ресуспендируют осадок с помощью пробозаборной иглы). На практике неоднократно возникали вопросы по поводу достоверности результатов исследования осадка мочи при использовании современных ВК с разным дном при разных методах исследования биологического материла.

Цель исследования — сравнить результаты исследования элементов осадка мочи с помощью световой микроскопии и автоматизированного подсчета, полученные с использованием вакуумных контейнеров с коническим и с круглым дном.

Материал и методы

Материалом исследования послужили пробы мочи 40 пациентов СПб ГБУЗ «Клиническая больница Святителя Луки». Сбор мочи проводился пациентами в стерильный одноразовый контейнер для сбора мочи с крышкой объемом 120 мл. Всего было получено 40 проб мочи. Перед аликвотированием содержимое контейнера для сбора мочи тщательно перемешивали путем плавного покачивания. Биологический материал из каждого контейнера для сбора мочи аликвотировали с использованием переходника (держателя для переноса мочи в ВК, длина пробозаборника 16 см) в 4 ВК объемом 9 мл Vacuette с коническим дном (Greiner Bio-One, Австрия) и 4 ВК объемом 9 мл Acti-Fine с круглым дном («Гранат Био Тех», Россия). Всего из 40 проб мочи было получено 320 аликвот. За основу был взят протокол исследования GP-34A Института клинических лабораторных стандартов (CLSI), в соответствии с которым разделенные пробы крови пациента в вакуумных контейнерах одного производителя с одинаковым объемом наполнения измеряются в дубликатах (не менее 20 пар проб) [9]. Мы применили этот протокол в отношении другого биологического материала — мочи. Световая микроскопия и автоматизированный подсчет элементов осадка мочи проводились в течение 30 мин после доставки проб в лабораторию.

Подготовка 160 аликвот (моча от каждого пациента, собранная в 2 ВК с коническим дном и 2 ВК с круглым дном) к световой микроскопии включала в себя последующее центрифугирование при 1500 об/мин 10 мин и декантирование супернатанта при помощи пластиковой пипетки Пастера объемом 6 мл. Световая микроскопия осадка мочи выполнялась одним специалистом в капле объемом 40 мкл с зашифрованной маркировкой с помощью микроскопа Olympus CX21 (объектив ×10 и ×40, окуляр 10).

Автоматизированный подсчет элементов осадка мочи проводился из 160 аликвот (моча от каждого пациента, собранная в 2 ВК с коническим дном и 2 ВК с круглым дном) методом проточной микроскопии на автоматическом анализаторе мочевого осадка IRIS IQ200 SPRINT с применением технологии Digital Flow Morphology.

Исследовали следующие параметры: лейкоциты (WBC), эритроциты (RBC), патологические цилиндры (PAT), слизь (MUC), неплоские клетки эпителия (NEC), гиалиновые цилиндры (HYA), кристаллы (CRY), бактерии (BAC), референтные интервалы при разных методах исследования приведены в табл. 1

Таблица 1. Референтные значения измеряемых показателей. Источники: Визуальная микроскопия. Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство. Том 1. М .: ГЭОТАР-Медиа; 2012; Автоматический метод. Серия iQ200. Инструкции по эксплуатации (международные), 2020

Внутрилабораторный контроль качества для ручной методики проводился ежедневно с использованием аттестованного контрольного материала Liquichek Urinalysis Control (Bio-Rad). Для контроля качества результатов автоматизированного подсчета элементов осадка мочи на анализаторе IRIS IQ200 SPRINT (Beckman Coulter) использовался положительный и отрицательный контроль (IQ Control/Focus Set, Beckman Coulter) производителя.

Клинико-диагностическая лаборатория регулярно участвует в МСИ ФСВОК клинических лабораторных исследований (Москва) и программах международной системы внешней оценки качества RIQAS. Результаты внешней оценки качества лабораторных исследований по разделам анализа мочи в период проведения исследования были удовлетворительными.

Статистический анализ результатов проводился с использованием компьютерной программы MedCalc v. 20.218. Нормальность распределения количественных данных исследовалась с помощью критерия Д’Агостино-Пирсона. Все параметры имели ненормальное распределение. Для оценки связи между результатами исследований количества эритроцитов и лейкоцитов в аликвотах, полученных с использованием ВК с коническим и круглым дном, применялся регрессионный анализ по Пассингу-Баблоку и каппа-статистика Коэна (Cohen’s kappa). Величину взаимосвязи считали достаточной при r≥0.95. Степень согласия оценивали как хорошую при ƙ≥0,8. 95% доверительные интервалы для согласия были рассчитаны в соответствии с документом CLSI EP12-A2 [10]. Критический уровень значимости (р) при проверке статистических гипотез принимался равным 0,05.

Результаты

Непараметрический регрессионный анализ выявил высокую силу связи между результатами автоматизированной оценки количества эритроцитов (RBC) и лейкоцитов (WBC) в аликвотах, полученных с использованием ВК с круглым и коническим дном. Коэффициент ранговой корреляции Спирмена составил 0,99 (ДИ 0,983—0,995) для RBC и 0,97 (ДИ 0,972—0,992) для WBC (рисунок), что означает наличие высокой положительной связи между результатами. ДИ для интерсепта включали «0» и составили от 0,0000 до 0,4536 для RBC и от –0,08991 до 0,5572 для WBC. Для наклона ДИ включали «1» и составили от 0,9747 до 1,1000 для RBC и от 0,9324 до 1,0681 для WBC, что позволяет сделать заключение о сопоставимости результатов исследований при использовании ВК с круглым и коническим дном.

Рис. Графики регрессии по Пассингу-Баблоку: а — для параметра Эритроциты (RBC); б — для параметра Лейкоциты (WBC)

Такие показатели, как PAT, MUC, NEC, HYA, CRY, в подавляющем большинстве случаев не имели числовых значений, поэтому оценка с использованием регрессионного анализа нами не проводилась. При этом кристаллы оксалата кальция (CaOxm) и нетипичные кристаллы (YEA), обнаруженные в одной пробе, и кристаллы тройного фосфата (URI), обнаруженные в двух пробах, присутствовали в осадке мочи при использовании ВК и с круглым, и с коническим дном.

Оценка согласованности результатов автоматизированной микроскопии в аликвотах, полученных с использованием ВК с круглым и коническим дном, была высокой для всех исследуемых показателей, ƙ=1,0 (95% ДИ 1,00000—1,00000).

При оценке согласованности результатов световой микроскопии осадка мочи в аликвотах, полученных с использованием ВК с круглым и коническим дном, установлено, что ƙ=0,85 (95% ДИ 0,68—1,00) для RBC и ƙ=1,00 для остальных исследованных показателей.

Сравнение результатов световой и автоматизированной микроскопии при использовании ВК с круглым и коническим дном показало практически полное совпадение по исследуемым параметрам (лейкоциты, эритроциты, патологические цилиндры, слизь, неплоские клетки эпителия, гиалиновые цилиндры, кристаллы, бактерии) (табл. 2).

Таблица 2. Сравнение результатов, полученных из вакуумных контейнеров с коническим и с круглым дном методами световой микроскопии и автоматизированного подсчета элементов осадка мочи

Несовпадение при сравнении результатов исследований в ВК с коническим и круглым дном было выявлено по количеству эритроцитов методом световой микроскопии: в ВК с коническим дном количество проб с превышением порогового значения составило 18, в то время как в ВК с круглым дном — 20. Результаты не совпали в двух пробах: количество эритроцитов в ВК с коническим дном составило 0—1 в поле зрения (что не превышает пороговое значение), а в ВК с круглым дном — 0—2 в поле зрения (что превышает пороговое значение).

При оценке количества эритроцитов в тех же пробах методом автоматизированного подсчета различий в интерпретации результатов между ВК с коническим и круглым дном выявлено не было.

Заключение

Результаты проведенного исследования демонстрируют отсутствие значимых различий количества эритроцитов и лейкоцитов, полученного методами визуальной и автоматизированной микроскопии мочи из вакуумных контейнеров с коническим и круглым дном, что дает возможность рекомендовать к использованию на практике оба вида мочевых вакуумных контейнеров.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.