ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Изучение репаративного потенциала (клеточные эффекты и биологические характеристики) обогащенной тромбоцитами плазмы (PRP) пациентов с острым аппендицитом (ОА) разного возраста.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
PRP была получена методом двухэтапного центрифугирования цельной крови пациентов с ОА и условно здоровых доноров (УЗД), которые были поделены на возрастные группы: 1-я (n=10) — УЗД в возрасте от 30 до 40 лет, 2-я (n=10) — УЗД возрасте от 60 до 70 лет, 3-я (n=10) — пациенты ОА 30—40 лет, 4-я (n=10) — пациенты с ОА 60—70 лет. Работа выполнена с использованием клеточной линии hTERT-HDFa (d220) дермальные фибробласты человека (ДФЧ). В опытные лунки вносили активированную PRP доноров в концентрации 10%. Пробы без внесения PRP — отрицательный контроль (0 (К)); положительный контроль — образцы PRP с добавлением 10% FBS — 0 (К 10% FBS). Проводили оценку метаболической активности клеток (резазуриновый тест), жизнеспособности образцов (относительно данных 0 (К)), способности генерировать активные формы кислорода (АФК) культуры (реакция окисления 2′,7′-дихлородигидрофлуоресцеин диацетата), миграционной активности (скретч-тест, scratch assay), интенсивности старения клеток. Биологические характеристики PRP оценивали методом иммуноферментного анализа белков IL-6, IL-10, TGFB-1, PAI-1, PDGF, VEGF.
РЕЗУЛЬТАТЫ
PRP пожилых пациентов с ОА характеризовалась повышенными уровнями IL-6, IL-10 по сравнению с таковой молодых пациентов с данной патологией и увеличением TGF-β по сравнению с таковой у УЗД ровесников. В 1-е сутки после стимуляции ДФЧ плазмой наименьшая жизнеспособность выявлена в образцах, стимулированных PRP пожилых УЗД, при этом не выявлено статистически значимых различий в группах пациентов с ОА вне зависимости от возраста. На 3-и сутки отмечали резкий подъем пролиферативной и метаболической активности клеток после их стимуляции плазмой пациентов с ОА вне зависимости от возраста. Антиоксидантный резерв PRP пожилых пациентов с ОА был достоверно меньше, чем молодых больных ОА. Корреляционный анализ выявил достоверные взаимосвязи биологического профиля PRP, клеточных ответов и клинических данных пациентов с ОА разного возраста.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
При сопоставлении выявленных клеточных ответов с клиническими данными пациентов следует отметить, что прогностически значимыми маркерами PRP при ОА являются IL-6, IL-10 и TGF-β, уровни которых коррелировали с продолжительностью пребывания пациента в стационаре. Причем высокий уровень интерлейкинов IL-6, IL-10 был ассоциирован с увеличением продолжительности пребывания в стационаре именно пациентов пожилого возраста.